Cetrimid agar begrunnelse, forberedelse, bruksområder

924
David Holt

De cetrimid agar o cetrimid er et selektivt fast dyrkningsmedium, designet for isolering av Pseudomonas aeruginosa. Den er basert på å fremheve produksjonen av karakteristiske pigmenter av denne arten og ble laget av modifiseringen av Tech agar, skapt av King, Ward og Raney..

Den opprinnelige formelen inneholdt salter av magnesiumklorid, kaliumsulfat, fordøyelse av gelatin i bukspyttkjertelen og agar-agar. Modifikasjonen av formelen besto av tilsetning av cetrimid (cetyltrimetylammoniumbromid) og glyserol.

Cetrimide agar sådd med Pseudomonas aeruginosa Kilde: BiotechMichael [Public domain], fra Wikimedia Commons

Cetrimid-agar er nyttig for den mikrobiologiske studien av prøver der tilstedeværelsen av Pseudomonas aeruginosa. Det skal bemerkes at denne bakterien er av største betydning, for selv om den er en del av den normale miljømikrobioten, oppfører den seg ofte som et opportunistisk patogen.

Derfor er et av de vanligste problemene forårsaket av denne kimen nosokomielle infeksjoner, det vil si de som oppstår i sykehusmiljøet, og angriper pasienter som har et deprimert immunsystem.

På den annen side, på grunn av tilhørigheten som denne mikroorganismen har med fuktighet, er de mest sårbare forurensningsmålene: assistert pusteutstyr, medisiner, forstøver, vannkilder, klimaanlegg, desinfeksjonsmidler, såpevæsker, injiserbare løsninger, åpne sår, katetre, urinrør, blant andre.

I denne forstand er cetrimidagar nyttig for å utføre mikrobiologiske kontroller og kulturer til de tidligere nevnte elementene..

Artikkelindeks

  • 1 Begrunnelse
    • 1.1 Tolkning
  • 2 Klargjøring
  • 3 bruksområder
  • 4 Sådd
  • 5 Begrensninger
  • 6 Kvalitetskontroll
  • 7 Referanser

Basis

Cetrimid-agar er basert på mediets evne til å fremme veksten av P. aeruginosa, stimulere produksjonen av pigmentene og i sin tur hemme veksten av andre mikroorganismer.

Disse egenskapene skyldes funksjonen til hver av komponentene. Gelatinpeptonet som er til stede fungerer som en kilde til nitrogen, vitaminer og mineraler. Glyserol eller glyserin fungerer som karbonkilde.

For sin del er cetrimid (cetyltrimetylammoniumbromid) stoffet som hemmer veksten av andre bakterier enn P. aeruginosa, inkludert andre arter som tilhører samme slekt.

Inhiberingen skjer fordi cetramid fungerer som et kationisk vaskemiddel, og klarer å destabilisere plasmamembranen til de fleste bakterier, bortsett fra P. aeruginosa og noen andre som klarer å overleve.

På den annen side inneholder den magnesiumklorid og kaliumsulfat. Disse forbindelsene stimulerer fenotypisk uttrykk relatert til evnen til Pseudomonas aeruginosa å produsere forskjellige pigmenter, inkludert: pyocyanin, pyoverdin, pyorrubin, pyomelanin og fluorescein. Til slutt inneholder den agar-agar, noe som gir den solid konsistens.

Tolkning

Tolkningen av veksten oppnådd i denne agaren utføres som følger:

Observasjon av runde, glatte kolonier med vanlige kanter, med produksjon av blågrønne, grønne, brune eller rødlige pigmenter, pluss utslipp av fruktig lukt (aminoacetofenon), er et presumptivt resultat av tilstedeværelsen av denne bakterien i nevnte prøve..

Videre er det veiledende for P. aeruginosa observasjon av et lyst grønn-gult pigment på koloniene når platen blir utsatt for ultrafiolett lys.

Fluorescens av P. aeruginosa-kolonier på cetrimidagar under ultrafiolett lys.

Det skal bemerkes at hver observerte farge skyldes produksjonen av et spesifikt pigment. Det blågrønne pigmentet tilsvarer produksjonen av pyocyanin, det grønne til pyoverdin, det rødlige til pyorrubin, det brune til pyomelanin og den lyse gulgrønne fluorescensen under UV-lys til fluorescein..

Forberedelse

Vei opp 43 g av det dehydratiserte mediet og oppløs i destillert vann. Tilsett 10 ml glyserol. Ta blandingen til en varmekilde. Kok i noen minutter til fullstendig oppløsning.

Autoklav ved 121 ° C i 15 minutter. La stå og server i sterile petriskåler når temperaturen er rundt 50 ° C.

La stivne, snu, bestill i plaqueros og ha i kjøleskapet til bruk. For å frø cetrimid-agarplatene, må de tas ut av kjøleskapet på forhånd og få lov til å varme opp til romtemperatur..

Den endelige pH-verdien til mediet må være 7,2 ± 0,2.

Fargen på det dehydratiserte mediet er beige og preparatet er ugjennomsiktig hvitt.

applikasjoner

På cetrimidagar kan alle typer prøver plantes der nærvær av Pseudomonas aeruginosa. Derfor er det nyttig innen alle områder av mikrobiologi (miljø, industri, klinisk, vann og mat)..

Det er veldig viktig å analysere sykehusmiljøer og dermed kunne bruke korrigerende tiltak, siden denne mikroorganismen når pasienter gjennom forurenset utstyr, medisiner, løsninger og forsyninger som brukes av pasienten..

På denne måten kan mikroorganismen infisere nedre luftveier, urinveier og sår hos immunsupprimerte pasienter..

Koloni teller av P. aeruginosa i mikrobielle grensetester.

Sådd

Cetrimid-agar kan brukes som en primær kultur. Platen inokuleres på en av kantene, og derfra fordeles den ved utmattelse til resten av platen. Flytende prøver kan overflatesådes med en drigalski-slikkepott.

Platene inkuberes aerobt ved 37 ° C i 24 timers inkubasjon.

Begrensninger

-En liten prosentandel av stammer av  Pseudomonas aeruginosas ikke produsere pyocyanin, så en falsk negativ kan tolkes.

-Noen klinisk viktige Pseudomonas-arter hemmes i dette miljøet.

-Til tross for å observere egenskapene som er beskrevet for Pseudomonas aeruginosa, de må bekreftes med ytterligere bevis på identifikasjon. En test som ikke bør gå glipp av er oksidasetesten, den må gi positiv.

-Noen Enterobacteriaceae kan vokse på dette mediet og utvikle et gult pigment, men det skiller seg fra Pseudomonas aeruginosa ved at når platen utsettes for ultrafiolett lys, er det ingen fluorescens.

-Serratia marcescens klarer å utvikle og produserer et rosa pigment.

-Hvis platene sådd med cetrimidagar utsettes for romtemperatur en stund, blir stammene av P. aeruginosa de kan miste fluorescensen som observeres under UV-lys, men eiendommen gjenvinnes hvis den reinkuberes ved 37 ° C.

QA

For å analysere den gode ytelsen til cetrimidagar, kan kontrollstammer brukes, for eksempel: Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637, Escherichia coli ATCC 25922 og Staphylococcus aureus ATCC 25923.

De forventede resultatene er:

  • For å P. aeruginosa god vekst, med blågrønt pigment og positivt fluorescein.
  • S. maltophilia Y S. aureus vil være delvis til fullstendig hemmet.
  • Det forventes at Escherichia coli være fullstendig hemmet.

Referanser

  1. Callicó A, Cedré B, Sifontes S, Torres V, Pino Y, Callís A, Esnard S. Fenotypisk og serologisk karakterisering av kliniske isolater av Pseudomonas aeruginosa. VacciMonitor. 2004; 13 (3): 1-9.
  2. Conda Pronadisa Laboratories. Cetrimid agarbase. 2014. Tilgjengelig på: condalab.com
  3. Britannia Laboratories. Cetrimide agar. 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com
  4. BD Laboratories. BD Pseudosel agar (Cetrimide agar). 2013. Tilgjengelig på: bd.com
  5. Laboratorio Francisco Soria Melguizo, C.A. Cetrimide agar. 2009. Tilgjengelig på: http://f-soria.es

Ingen har kommentert denne artikkelen ennå.