Salt og mannitolagar Begrunnelse, tilberedning og bruk

1007
David Holt

De salt og mannitolagar eller salt mannitol er et fast, selektivt og differensielt kulturmedium. Det ble opprettet av Chapman for isolering av patogene Gram-positive kokker, spesielt Staphylococcus aureus.

Imidlertid er det også nyttig for å isolere Staphylococus epidermidis, som noen ganger kan være til stede som et opportunistisk patogen, og Staphylococcus saprophyticus, anerkjent urinpatogen, blant andre arter.

A. Fiola med tilberedt salt mannitolagar medium. B. Saltede mannitolagarplater sådd med gjærende og ikke-gjærende mannitol-bakteriestammer. Kilde: A og B: Bilder tatt av forfatteren MSc. Marielsa gil.

Noen Enterococcus er i stand til å vokse på dette mediet, samt visse Gram-positive sporedannende stenger..

Dette mediet er veldig nyttig i analysen av kliniske prøver, men det brukes også i den mikrobiologiske studien av mat og i kvalitetskontrollen av industriprodukter, som blant annet kosmetikk, medisiner..

Salt mannitolagar består av ekstrakter og peptoner fra biff, triptein, mannitol, natriumklorid, fenolrød og agar.

Artikkelindeks

  • 1 Begrunnelse
  • 2 Klargjøring
  • 3 bruksområder
  • 4 Kvalitetskontroll
  • 5 Avsluttende hensyn
  • 6 Referanser

Basis

Mannitolagar er selektiv takket være den høye saltkonsentrasjonen. Saltinnhold fungerer som et hemmende stoff og forhindrer veksten av gramnegative bakterier.

Det er også differensial på grunn av tilstedeværelsen av karbohydratmannitol og den fenolrøde pH-indikatoren. Fra dette produserer bakteriene som er i stand til å gjære mannitol syrer, forsurer mediet, gjør koloniene og mediet gule..

På den annen side vokser kolonier som ikke gjærer mannitol i mediet og tar næringsstoffene som er gitt av kjøttekstrakter og peptoner og triptein. Derfra ekstraherer bakteriene karbon, nitrogen, vitaminer og mineraler som er nødvendige for veksten..

Koloniene i dette tilfellet kan være svake eller sterke rosa, og mediet forblir i samme farge eller endres til fuchsia.

Agar er stoffet som gir konsistensen til mediet.

Forberedelse

For å fremstille en liter salt mannitolagar, blir 111 g av det dehydratiserte mediet fra det foretrukne kommersielle selskap veid og oppløst i 1000 ml destillert vann ved bruk av en kolbe..

Varme påføres med hyppig omrøring av mediet for å forbedre oppløsningsprosessen. Kok i et minutt.

Plasser kolben i autoklaven ved 121 ° C i 15 minutter.

På slutten av tiden fjerner du kolben fra autoklaven, lar den hvile og serverer mellom 15 og 20 ml på sterile petriskåler når temperaturen er omtrent 50 til 55 ° C..

Det er lov å stivne, bestilles på en invertert måte i plakkoer og oppbevares i kjøleskapet til bruk. Før du sår en prøve, vent til platen når romtemperatur.

Platene blir sådd ved striping eller ved overflatesåing med en drigalski-slikkepott. Den endelige pH-verdien til det tilberedte mediet må være 7,4 ± 0,2

Fargen på det dehydratiserte mediet er lysebeige og fargen på det tilberedte mediet er oransjerød.

applikasjoner

På grunn av sin høye selektivitet er dette mediet ideelt for såing av prøver med blandet flora der du vil se etter tilstedeværelsen av Staphylococus aureus, som hovedpatogenet til denne slekten.

I denne forstand er en av dens hyppigste bruksområder i mikrobiologisk analyse av svelgeksudater og neseutslippsprøver, spesielt for å oppdage asymptomatiske bærere av S. aureus.

Noen land har implementert denne analysen som et obligatorisk krav for folk som ønsker å jobbe som matleverandører..

Denne kontrollen forhindrer ansettelse av transportører av S. aureus, og dermed unngå massiv matforgiftning, på grunn av inntak av mat forurenset med stafylokokk enterotoksin.

Det kan også inkluderes i såing av sårinfeksjoner, blodkulturer, CSF, bronkoalveolær skylling, blant andre.

Saltet mannitolagar er nyttig for å isolere kolonier fra urinkulturer fra CLED-agar eller blodagar hvis gram har avslørt grampositive kokker i klynger..

Det er også gyldig i mikrobiologisk analyse av mat, drikkevann, jord, blant andre applikasjoner..

QA

Når en mengde plater med salt mannitolagar er tilberedt, anbefales det å utføre en kvalitetskontroll. Kontrollstammer blir sådd for å vise om det er vekst av det samme eller ikke.

Som positiv kontroll, kjente stammer av Staphylococcus aureus. Den skal vokse tilfredsstillende og utvikle gule kolonier, og mediet får også samme farge.

På samme måte er det praktisk å inkludere en kjent stamme av Staphylococcus epidermidis. Skal vokse tilfredsstillende med å utvikle rosa kolonier, og mediet holder seg i samme farge eller blir mørkere til en sterkere rosa.

Som en negativ kontroll brukes stammer som ikke skal vokse på dette mediet. For eksempel en kjent stamme av Escherichia coli eller Klebsiella pneumoniae. Det forventede resultatet er fullstendig inhibering, det vil si ingen vekst..

I tillegg må en uinokulert plate inkuberes. I den skal det ikke være vekst eller fargeendring.

Det er viktig at platen ikke brukes hvis det er tegn på forringelse, for eksempel forurensning, dehydrering, misfarging, blant andre.

Siste tanker

Når du bruker salt mannitol-agarmedium, er det noen viktige aspekter du bør vurdere:

-Å få en vekst av gule kolonier indikerer ikke at det er det Staphylococcus aureus. Det må huskes at noen stammer av Enterococcus er i stand til å vokse i dette mediet og gjære mannitol, samt visse Gram-positive sporedannende stenger..

Derfor er det viktig å utføre et gram på kolonien og en katalasetest..

-På den annen side må det vurderes at andre arter av Staphylococcus enn aureus de er også i stand til å gjære mannitol. Derfor er det viktig å subkulturere kolonien til en næringsbuljong å ta derfra og utføre koagulasetesten..

Blant Staphylococcus-artene av klinisk betydning for mennesket som gjærer mannitol er: S. aureus, S. simulans, S. capitis ssp capitis, S. capitis ssp urealyticus, S. xylosus, S. cohnii ssp urealyticum, blant andre.

Andre kan gi en variabel reaksjon, det vil si noen ganger positiv og noen ganger negativ. Noen er S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. warneri, S. intermedius, blant andre.

-Det anbefales ikke å ta kolonier direkte fra mannitolagar for å utføre koagulasetesten, ettersom den høye saltkonsentrasjonen av mediet kan forstyrre resultatet..

-Til slutt anbefales det å ruge platene sådd med salt mannitol i opptil 48 timer, fordi noen stammer av S. aureus kan sakte gjære mannitol, selv om dette er sjeldent.

Referanser

  1. Britannia Laboratories. Salt mannitolagar. 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com
  2. "Salt mannitolagar". Wikipedia, The Free Encyclopedia. 31. okt 2018, 19:08 UTC. 17. januar 2019, 20:55, tilgjengelig på: en.wikipedia.org.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. (5. utg.). Argentina, redaksjonelt Panamericana S.A.
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12. utg. Argentina. Redaksjonell Panamericana S.A
  5. BD Laboratories. BD Mannitol Salt Agar. 2013. Tilgjengelig på: bd.com.

Ingen har kommentert denne artikkelen ennå.