Salmonella-Shigella agar begrunnelse, tilberedning og bruk

4167
Abraham McLaughlin

De Salmonella-Shigella agar også kjent som SS-agar, er det et moderat selektivt og differensielt medium, spesielt designet for isolering av enteropatogene bakterier fra Salmonella- og Shigella-slekten, både fra miljømessige og kliniske prøver..

SS agar har en kompleks sammensetning; Den består av kjøttekstrakt, pepton, laktose, gallsalter, natriumcitrat, natriumtiosulfat, jerncitrat, agar, nøytralrød, lysegrønn og destillert vann. På grunn av sin store selektivitet kan prøver med rikelig blandet flora sås..

SS-agar med kolonier av Salmonella sp. Kilde: Manurx27 [CC BY-SA 4.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0)], fra Wikimedia Commons

I mikrobiologilaboratorier brukes Salmonella-Shigella-medium mye for å undersøke tilstedeværelsen av Salmonella og Shigella i avføringsprøver i diaré, avløpsvann, drikkevann og mat..

Noen ganger er det nødvendig å bruke forberikende buljong (laktosekraft) og anrikningsbuljong (selenitt cystinbuljong) for å gjenopprette stammer av Salmonella.

Disse trinnene er nødvendige når det er mistanke om at det foreligger Salmonella i svært lave mengder, eller når belastningen kan bli misbrukt ved prosesser av industriell produksjon, hovedsakelig bearbeidet mat. Det anbefales også å berike avføringsprøver fra pasienter som har blitt behandlet med antibiotika..

Deretter kan den berikede kjøttkraften sås på Salmonella-Shigella-agar og andre lignende medier, slik som xylose-agar, lysindoksykolat (XLD) og enterisk Hektoen-agar (HE)..

Artikkelindeks

  • 1 Begrunnelse
    • 1.1 Næringsstyrke
    • 1.2 Konsistens
    • 1.3 Selektiv
    • 1.4 Differensial
  • 2 Klargjøring
  • 3 Bruk
  • 4 Begrensninger
  • 5 Kvalitetskontroll
  • 6 Referanser

Basis

Hver komponent i Salmonella-Shigella-kulturmediet har en spesifikk funksjon, og blandingen som helhet gir den egenskapene som kjennetegner den..

Nærende kraft

Kjøttekstraktet og peptonet (fordøyd med kasein og animalsk vev) gir de nødvendige næringsstoffene (nitrogener, karbon og vitaminer) for utvikling av mikroorganismer som tåler resten av komponentene..

Konsistens

Agar-agar har ansvaret for å gi mediet solid konsistens.

Selektiv

Dette mediet er veldig selektivt fordi det inneholder gallsalter, natriumcitrat og lysegrønn. Derfor hemmer den veksten av alle gram-positive bakterier og de fleste gram-negative basillene, inkludert noen koliforme stoffer..

Mens bakterier av slekten Salmonella og noen stammer av Shigella støtter disse forbindelsene.

Hovedsakelig er Salmonella-slekten veldig motstandsdyktig mot gallsalt, så mye at de er i stand til å leve i galleblæren til noen bærerpasienter som stadig kaster bakteriene i avføringen..

Differensial

Laktose er det gjærbare karbohydratet som hjelper til med å skille laktose-gjærende stammer fra ikke-gjærende. Denne egenskapen fremgår av tilstedeværelsen av pH-indikatoren, som i dette mediet er fenolrød.

Laktosefermenterende stammer gir røde kolonier, mens ikke-gjærende stammer er fargeløse. Denne egenskapen er viktig siden Salmonella og Shigella ikke gjærer laktose..

På den annen side inneholder dette mediet natriumtiosulfat som en kilde til sulfid og jerncitrat som en kilde til jern. Begge forbindelsene er i stand til å skille bakterier som er i stand til å produsere hydrogensulfid. Disse reagerer for å danne et synlig, uoppløselig svart jernsulfidutfelling..

Denne egenskapen finnes i noen stammer av slekten Salmonella. Normalt er koloniene flate fargeløse med en svart prikk i midten av den. Resten av Salmonellas produserer ikke HtoS og utvikle seg som fargeløse kolonier.

På den annen side er kolonier av slekten Shigella flate fargeløse uten å sverte..

Forberedelse

Dette mediet er veldig enkelt å tilberede.

Vei 63 g av det dehydrerte kommersielle mediet og oppløs i en liter destillert vann. Varm oppløsningen og rør. Blandingen kan koke i opptil minutter.

Dette mediet må ikke autoklaveres. Etter oppløsning serveres den direkte på enkle eller doble sterile plater..

Når de stivner, ordnes de på en omvendt måte i plakk og oppbevares i kjøleskap (2-8 ° C) til bruk..

Mediet etter tilberedning skal være ved pH 7,2 ± 0,2 og med en oransjerød farge..

Det er viktig å la platene varme opp før prøvene sås ut. Den opprinnelige prøven kan sås direkte, slippe ut materiale på en del av agaren og deretter stryke av utmattelse derfra.

Hvis du bruker beriket buljong, passerer du en del av selenittbuljongen og sår med en drigalski-slikkepott..

Inkuber ved 37 ° C i 24 timer i aerobiose.

Det må tas i betraktning at antall gram som skal veies og den endelige pH i mediet kan variere fra et kommersielt hus til et annet. Den midterste basen gir alltid indikasjonene for forberedelsen.

Bruk

Det brukes ofte i avføringskulturanalyse og i den mikrobiologiske studien av avløpsvann, drikkevann og matprøver..

Ofte tilberedes dobbeltplater, på den ene siden plasseres Salmonella-Shigella-agar og på den andre siden XLD-agar.

Begrensninger

-Noen Shigella-stammer vokser ikke på dette mediet. Derfor anbefales det ikke for primær isolasjon av denne slekten..

-Ikke alle gjennomsiktige kolonier med svart senter er en indikasjon på Salmonella; Biokjemiske tester må utføres for å gjøre en korrekt identifikasjon, siden koloniene til noen Proteus-stammer ikke kan skilles fra Salmonella.

-Det dehydratiserte mediet må tas vare på fra eksponering for miljøet, da det er veldig hygroskopisk. Derfor må den oppbevares i et tørt og godt lukket miljø. Åpent i veldig korte perioder.

-Over tid kan gallsaltene i mediet utfelle og danne et matte-lignende bilde i agaren, men dette påvirker ikke resultatene..

-Noen Shigella-stammer kan sakte gjære laktose.

QA

For å bevise at mediet fungerer som det skal, anbefales det å plante kjente eller sertifiserte kontrollstammer og observere om veksten oppfyller de forventede egenskapene..

For dette kan du bruke stammer av E. coli, Enterobacter sp, Klebsiella pneumoniae, Shigella flexneri, Salmonella typhimurium eller Enterococcus faecalis.

De forventede resultatene er:

Escherichia coli --rosa konvekse kolonier.

Enterobacter og Klebsiella- store kolonier og røde eller rosa slimhinner.

Shigella flexneri --klare eller fargeløse flate kolonier.

Salmonella typhimurium - fargeløse kolonier med svart senter.

Enterococcus faecalis-- total hemming.

Referanser

  1. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. Salmonella-Shigella agar. 2009. Tilgjengelig på: f-soria.es
  2. BD laboratorium. BD Salmonella-Shigella Agar. 2013. Tilgjengelig på: bd.com
  3. Britannia Laboratories. Salmonella-Shigella Agar. 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com
  4. Valtek diagnostikk. Salmonella-Shigella Agar (SS Agar). Tilgjengelig på: andinamedica.com
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12. utg. Redaksjonell Panamericana S.A. Argentina.
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. utg. Redaksjonell Panamericana S.A. Argentina.

Ingen har kommentert denne artikkelen ennå.