Laktose buljongfundament, tilberedning og bruk

3967
Anthony Golden

De laktosekraft er et flytende, ikke-selektivt dyrkningsmedium, hovedsakelig brukt som et pre-anrikningsmedium til isolering av Salmonella-stammer fra den mikrobiologiske analysen utført på bearbeidede matvarer, meieriprodukter eller vann. Dette anbefales av Den internasjonale kommisjonen for mikrobiologiske spesifikasjoner for matvarer (ICMPF).

Mediet inneholder enzymatisk fordøyelse av gelatin, kjøttekstrakt og laktose, stoffer som er nødvendige for bakterievekst. I tillegg er laktose et gjærbart karbohydrat, derfor er noen koliforme i stand til å bryte det ned med produksjon av gass..

Ammede buljonger med turbiditet. Kilde: Foto tatt av forfatteren MSc. Marielsa gil

Av denne grunn anbefales laktosekraft fra American Public Health Association (APHA) for den presumptive studien av totale og fekale koliforme bakterier, og kvalifiserer den som et utmerket alternativ til å erstatte tryptose laurylsulfatbuljong i standardteknikken til det mest sannsynlige tallet ( MPN).), Brukt til mikrobiologisk analyse av mat, melk og overflate, underjordiske, rekreasjons-, husholdnings- og industrielle avløpsvannprøver.

Artikkelindeks

  • 1 Begrunnelse
  • 2 Klargjøring
  • 3 bruksområder
    • 3.1 Forberikelse
    • 3.2 Analyse av totale og fekale koliforme stoffer
  • 4 Kvalitetskontroll av mediet
  • 5 Referanser

Basis

For mikrobiologisk analyse av noen prøver er trinnet for berikelse viktig for å kunne gjenopprette en spesifikk mikroorganisme som kan være i svært lave mengder eller i ugunstige forhold som bryter eller minimerer levedyktigheten..

Slik er tilfellet tørket og bearbeidet mat, muligens forurenset med Salmonellas sp. I disse tilfellene, hvis bakteriene er til stede, har de blitt utsatt for fysisk og kjemisk misbruk under produksjonsprosessen av produktet..

På en slik måte at mikroorganismer utsettes for uønskede faktorer som dehydrering, eksponering for hemmende eller giftige produkter, og overlapping generert av tilstedeværelsen av andre bakterier i større mengder, blant andre..

I denne forstand har laktosekraften en reparerende effekt på de skadede strukturene i mikroorganismen, og får den til å komme seg og reprodusere, på en slik måte at den kan oppdages.

På samme måte har laktosekraften evnen til å fortynne de hemmende stoffene som kan påvirke dens levedyktighet, slik at den kan utvikles. I tillegg er den ernæringsmessige sammensetningen av laktosekraft strategisk for å favorisere veksten av Salmonella sp over andre mikroorganismer.

For endelig identifisering, subkultur til andre definitive kulturmedier.

På den annen side tillater sammensetningen av mediet også påvisning av laktosefermenterende mikroorganismer som produserer gass..

Forberedelse

For å tilberede en liter laktosekraft må 13 gram det dehydratiserte mediet veies og oppløses i 1000 ml destillert vann..

For å hjelpe til med å oppløse mediet i vannet, kan løsningen varmes opp litt, men ikke for mye..

Når homogen er, blir løsningen fremstilt som følger: hvis buljongen vil bli brukt til å søke etter koliforme stoffer, tilberedes et stativ med prøverør, i hvilket et Durham gjæringsrør settes opp ned.

Durham-røret er en veldig viktig detalj, fordi det vil tillate deteksjon av gassdannelse, data av stor verdi i jakten på koliforme stoffer.

Når rørene er klare, deles det ut 10 ml av melkekraften, en mengde som må være tilstrekkelig til å dekke hele Durham-røret..

Hvis laktose-buljongen skal brukes som en forberikende buljong, er det ikke nødvendig å plassere et Durham-gjæringsrør. I dette tilfellet kreves det en større mengde medium (225 ml), som serveres i 500 ml flasker, bred munn og med et termosikkert skruelokk..

Deretter autoklaveres rørene eller kolberne ved 121 ° C i 15 minutter..

Mediet må holde seg ved en slutt pH på 6,9 ± 0,2 ved 25 ° C.

Kjøttkraften oppbevares i kjøleskapet til bruk.

Før bruk må buljongen bringes til romtemperatur.

På den annen side kan laktosekraften også tilberedes i en dobbel konsentrasjon..

Noen laboratorier legger bromokresol lilla til laktosekraften som en pH-indikator, for å vise rørene hvor det har vært laktosefermentering på grunn av fargeendring. I dette tilfellet får buljongen en lilla farge, og hvis det er gjæring blir den gul.

applikasjoner

I mikrobiologilaboratorier brukes laktosekraft mye, da det er et relativt billig medium som gir pålitelige og raske resultater (24-48 timer)..

Den kan brukes til analyse av totale og fekale coliforme stoffer i mat og vann eller som en pre-anrikningsbuljong for Salmonella.

Forberikelse

Foranrikning er et trinn før prøveberikelse, noe som forbedrer utvinningen av bakterier av slekten Salmonella i bearbeidet mat..

For å gjøre dette blir prøven av den faste maten (25 gram) eller væske (25 ml) sådd i 225 ml laktosekraft, inkubert i 24 til 48 timer. Deretter vil den bli underkulturert i et anriket medium slik som selenitt cystinbuljong eller tetrakionatbuljong. Gå deretter videre til XLD og SS selektive medier.

Total og fekal coliform analyse

Det er et utmerket medium som en indikator på fekal forurensning.

Derfor er laktosekraft ideell for den presumptive fasen av studien av koliforme med metoden Most Probable Number..

For prøver der det er mistanke om en stor mengde coliforme stoffer, vil en mindre mengde av den inokuleres (1 ml), mens for prøver der det er mistanke om en lavere mengde coliforme, vil et større volum prøver (10 ml) inokuleres ..

For analysene blir fortynninger laget 10-1, 10-to, 10-3, danner et batteri på 3-5 rør for hver konsentrasjon som brukes.

Fra hver fortynning sås det samme volumet i laktosekraften.

Rørene inkuberes i 24 timer. Negative buljonger inkuberes i ytterligere 24 timer.

Tolkningen av resultatene er laget ved å observere to egenskaper: den første er tilstedeværelsen eller fraværet av uklarhet, og da dette mediet ikke inneholder en pH-indikator, vil det ikke være noen fargeendring..

Det andre er produksjon eller ikke av gass. Gass er lett påvist i Durham-røret ved at det ser ut som en eller flere luftbobler inni..

Det betraktes som positivt hvis begge egenskapene blir observert, det vil si uklarhet med gassproduksjon. Positive rør bør sås på nytt i bekreftende medier (Brilliant Green Bile 2% buljong og EC-buljong).

Kvalitetskontroll av mediet

- Når du forbereder mediet, er det viktig å ikke glemme å plassere Durhams-rørene hvis formålet med røret er å studere koliforme..

- Ikke overopphet mediet før sterilisering.

- Fordel i reagensglass før sterilisering, aldri etter.

- Ikke bruk hvis mediet er mer enn 3 måneder gammelt..

- Ikke bruk hvis du ser noen endringer i de vanlige egenskapene til mediet.

- Når du forbereder et parti laktosekraft, tester du kvaliteten på batchen ved å plante stammer kjent som Escherichia coli, Enterobacter aerogenes , Citrobacter freundii Y Klebsiella pneumoniae. De vokser veldig bra, med gassproduksjon (positiv kontroll).

- Det kan også inkludere Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium eller Enterococcus faecalis, som vokser bra, men uten gassproduksjon (negativ kontroll).

- Det skal bemerkes at den opprinnelige fargen på det dehydratiserte mediet er beige og at det tilberedte mediet er veldig lett og gjennomsiktig gul. Hvis det observeres endring i farge eller utseende, kan det forverres..

Referanser

  1. Acevedo R, Severiche C, Castillo M. Miljøbiologi og mikrobiologi. (2013) 1. utgave. University of Cartagenas, Colombia.
  2. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B og Velázquez O. (2009). Teknikker for mikrobiologisk analyse av matvarer. 2. utg. Fakultet for kjemi, UNAM. Mexico.
  3. Conda Pronadisa Laboratories. 2017. Dobbeltkonsentrasjon av laktose-buljong (European Pharm.)
  4. Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. Sammenligning av teknikker for utvinning av koliforme bakterier fra sedimentet i Lake Xochimilco, Mexico. Pastor argent. mikrobiol.  2013; 45 (3): 180-184. Tilgjengelig på: scielo.org.
  5. Sotomayor F, Villagra V, Cristaldo G, Silva L, Ibáñez L. Bestemmelse av den mikrobiologiske kvaliteten i det artesiske brønnvannet i distriktene Central, Cordillera og Capital Municipality.. Mem. Inst. Undersøkelse. Vitenskap. Helse 2013; 11 (1): 5-14. Tilgjengelig fra: scielo.iics.

Ingen har kommentert denne artikkelen ennå.