Medium MIO fundament, forberedelse og bruksområder

568
David Holt

De halv MIO er en biokjemisk test som brukes til å identifisere bakteriearter som tilhører Enterobacteriaceae-familien. Det er ganske næringsrikt og består av glukose, gjærekstrakt, pepton, triptein, L-ornitinhydroklorid, bromokresollilla og agar.

Betydningen av akronymet (MIO) beskriver hver av parametrene som kan observeres i dette mediet; motilitet, indol og ornitin. Motilitet er mikroorganismens evne til å bevege seg på grunn av tilstedeværelsen av flageller. For at denne egenskapen skal overholdes, må konsistensen av mediet være halvfast, slik at preparatet inneholder mindre agar..

Resultattolkningsskjema i MIO-mediet. Kilde: Utarbeidet av forfatteren MSc. Marielsa gil

Produksjonen av indol viser tilstedeværelsen av enzymet tryptofanase som virker på aminosyren tryptofan, og krever bruk av et avslørende reagens for å gjøre produksjonen av indol synlig..

Til slutt bestemmer ornitin om bakterien er i stand til å dekarboksylere aminosyren, det vil si om den har enzymet orinitindekarboxylase.

Artikkelindeks

  • 1 Begrunnelse
    • 1.1 Pepton, gjærekstrakt og triptein
    • 1.2 Motilitet
    • 1.3 Glukose
    • 1.4 L-ornitin
    • 1,5 pH-indikator
  • 2 Såing og utvikling av teknikk
  • 3 Klargjøring
    • 3.1 MIO-medium
    • 3.2 Kovacs Reagent (utvikler av indoletest)
  • 4 Bruk
  • 5 Kvalitetskontroll
  • 6 Referanser

Basis

Pepton, gjærekstrakt og triptein

Disse elementene bidrar til næringskraften til dette mediet. De tjener som en kilde til næringsstoffer og essensielle aminosyrer for bakteriell utvikling.

I tillegg er triptein en kilde til tryptofan for å demonstrere tilstedeværelsen av enzymet tryptofanase, som nedbryter tryptofan ved reduktiv deaminering, frigjør indol, pyruvinsyre, ammoniakk og energi..

Indol er fargeløs, derfor blir dens tilstedeværelse avslørt ved å tilsette fem dråper Ehrlichs eller Kovacs reagens, begge med p-dimetylaminobensaldehyd..

Aldehydgruppen til denne forbindelsen reagerer med indol og danner et ringformet, fuchsia-rødt produkt på overflaten av agaren..

Ethvert spor av farger bør betraktes som en positiv test. Beviset skal leses umiddelbart, ettersom fargen brytes ned over tid.

Videre bør denne testen avsløres etter at motilitets- og dekarboksyleringsresultatene til ornitin er notert..

Tolkning

Positiv test: dannelse av en fuchsia-rød ring når det tilsettes dråper av Kovacs reagens.

Negativ test: ingen ringdannelse.

Motilitet

Bakterienes evne til å bevege seg vil være påvist hvis det observeres et uklart medium eller hvis det er en tykk vekstlinje som utvides rundt den første inokuleringen..

En negativ motilitetstest vil være beviset ved å observere en tynn vekstlinje, og alt rundt det vil være uten vekst..

Det er viktig at motiliteten leses før indolen avsløres, ettersom tilsetningen av reagenset skyer hele mediet..

I mobile, men langsomt voksende bakterier er det vanskelig å demonstrere deres motilitet med dette mediet. I dette tilfellet anbefales det å bruke andre tester eller metoder, for eksempel medium motilitet eller drop-ventende metode..

Glukose

Glukose er det gjærbare karbohydratet som, i tillegg til å gi energi, forsyrer miljøet, en nødvendig forutsetning for at dekarboksyleringen av aminosyren ornitin skal skje..

Glukosefermentering må alltid forekomme, med utgangspunkt i prinsippet om at alle bakterier som tilhører Enterobacteriaceae-familien gjærer glukose..

L-Ornithine

I tilfelle bakteriene produserer enzymet ornitindekarboksylase, kan dette virke når mediet har blitt forsuret ved gjæring av glukose..

Enzymet ornitindekarboksylase virker på karboksylgruppen i aminosyren som produserer et amin kalt putresin som alkaliserer mediet igjen.

Denne testen bør leses etter 24 timers inkubasjon, for hvis du prøver å lese før, kan du feiltolke testen med en falsk negativ.

Det må huskes at den første reaksjonen som skjer er fermentering av glukose, og derfor blir mediet gult i en innledende fase (første 10 til 12 timer). Hvis ornitindekarboksylering senere oppstår, blir mediet lilla.

Det er viktig å tolke ornitindekarboksyleringstesten før du avslører indol, da tilsetning av Kovacs reagens endrer fargen på mediet..

Tolkning

Negativ test: gul medium eller gul bakgrunn.

Positiv test: halvt helt lilla.

PH-indikator

I dette tilfellet brukes bromokresol lilla; den som har ansvaret for å avsløre når det er en endring i pH i mediet. Når syrnet blir surt, blir indikatoren gul, og når den er alkalisert blir den lilla.

Såing og utvikling av teknikk

For å så MIO-mediet brukes en rett løkke eller nål, og med den samles en del av kolonien som skal studeres..

En dyp punktering blir laget midt i MIO i en rett linje. Det er ikke tilrådelig å utføre en dobbel punktering, siden det kan gi et falskt bilde av motilitet hvis punkteringen ikke utføres på samme sted.

Inkuber i 24 til 48 timer ved 37 ° C i aerobiose. Observer resultatene i denne rekkefølgen: motilitet, dekarboksylering av ornitinet og avslør til slutt indolen.

Det anbefales å aseptisk fjerne 2 ml av mediet, overføre det til et sterilt rør og utføre indolprøven der, slik at hvis det er negativt, kan resten av originalrøret inkuberes i ytterligere 24 timer for å avsløre indole igjen..

Utviklingen av indolen utføres som følger: 3 til 5 dråper Kovacs reagens tilsettes MIO-mediet, og det ristes kraftig. Det observeres om en rød fuchsia-ring dukker opp eller ikke.

Forberedelse

Middels MIO

Vei ut 31 g MIO-medium og oppløs i en liter destillert vann..

Varm opp til blandingen koker i ett minutt, og rister ofte til agaren er helt oppløst. Fordel 4 ml av mediet i 13/100 reagensglass med bomullshetter.

Steriliser i autoklav ved 121 ° C i 15 minutter. Fjern fra autoklaven og la stå rett i et stativ, på en slik måte at det dannes en halvfast blokk.

Oppbevares i kjøleskap 2-8 ° C. La det varme opp før du sår bakteriestammen.

Fargen på det dehydratiserte mediet er beige og det tilberedte mediet er lett opaliserende lilla..

Den endelige pH-verdien til det tilberedte mediet er 6,5 ± 0,2

Mediet blir gult ved sur pH og er lilla ved alkalisk pH.

Kovacs Reagent (utvikler av indoletest)

Dette reagenset fremstilles som følger:

150 ml amyl, isoamyl eller butylalkohol (hvilken som helst av de tre) måles. 10 g p-dimetylaminobensaldehyd er oppløst i den. Deretter tilsettes langsomt 50 ml konsentrert saltsyre..

Det tilberedte reagenset er fargeløst eller lysegult. Den skal oppbevares i en gul flaske og oppbevares i kjøleskap. En mørk brun farge viser forverring.

Også Kovacs-reagenset kan erstatte Ehrlich-reagenset. Sistnevnte, som er mer følsom, foretrekkes å avsløre indol i bakterier som produserer den i små mengder, for eksempel i noen ikke-gjærende gramnegative stenger og visse anaerober..

Bruk

Dette mediet er en test som utfyller et batteri med biokjemiske tester for identifisering av bakterier som tilhører Enterobacteriaceae-familien..

Dataene for dekarboksylering av ornitin tjener til å skille mellom Shigella sonnei, som gir positivt, av Shigella boydii, Shigella flexneri og S. dysenterieae, som gir negativer.

Det skiller også slekten Klebsiella, som tester negativt, fra slekten Enterobacter, der de fleste av dens arter tester positive..

Kilde: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. utg. Redaksjonell Panamericana S.A. Argentina.

QA

Hver gang et parti MIO-medium blir utarbeidet, kan det utføres en kontrolltest. For dette brukes kjente eller sertifiserte stammer for å observere oppførselen til mediet..

Stammene som kan brukes er Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes Y Proteus mirabilis.

De forventede resultatene er E. coli og M. morganii. Dan M: +, I: + og O: +.

Klebsiella pneumoniae gir alle negative (M: -, I: -, O :-). Proteus mirabilis Y Enterobacter aerogenes gi M: + I: - og O: +.

Referanser

  1. Mac Faddin J. (2003). Biokjemiske tester for identifisering av bakterier av klinisk betydning. 3. utg. Redaksjonell Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12. utg. Redaksjonell Panamericana S.A. Argentina.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. utg. Redaksjonell Panamericana S.A. Argentina.
  4. Britannia Laboratories. MIO Medio 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com
  5. BD Laboratories. BBL Motility Indole Ornithine (MIO) Medium. 2007. Tilgjengelig på: bd.com
  6. Valtek Laboratories. Medium M.I.O. Motilitet, Indole, Ornitin. 2010. Tilgjengelig på: andinamedica.com

Ingen har kommentert denne artikkelen ennå.