De Czapek agar (CZA) er et selektivt fast dyrkningsmedium spesielt designet for dyrking av saprofytiske bakterier og sopp. Den ble opprettet av botanikeren Friedrich Johann Franz Czapek, av polsk opprinnelse, og den amerikanske kjemikeren Arthur Wayland Dox; Av denne grunn er denne agaren også kjent som Czapek-Dox-medium..
Det opprinnelige mediet var flytende, men agar ble senere tilsatt for å gjøre det til et fast medium. Czapek-medium består av natriumnitrat, bifaliumfosfat, magnesiumsulfat, kaliumklorid, jernholdig sulfat, sukrose, agar og destillert vann..
PH i Czapek-agar er 7,3, men det er en variant som tilsettes 10% melkesyre, hvis pH forblir på 3,5. Dette syremediet brukes til dyrking av acidofile mikroorganismer.
På den annen side modifiserte noen kommersielle hus sammensetningen av Czapek-agar ved å endre magnesiumsulfat og bifaliumfosfat med glyserofosfat; denne modifikasjonen forhindrer dannelsen av magnesiumfosfatutfellingen observert med den konvensjonelle formelen. På samme måte er det en annen variant som gjærekstrakt tilsettes.
Til slutt anbefales Czapek agar av American Public Health Association APHA for studiet av Actinomycetes sp, Aspergillus sp, Paecilomyces sp Y Penicillium sp. Disse artene er preget av å være miljømikroorganismer og opportunistiske patogener..
Artikkelindeks
Dette mediet inneholder sukrose; Dette karbohydratet fungerer som en kilde til karbon, mens natriumnitrat er kilden til nitrogen, men i motsetning til andre medier er det tilførte nitrogenet uorganisk..
Av denne grunn anses Czapek-mediet som selektivt, fordi bare mikroorganismer som er i stand til å bruke uorganiske forbindelser som eneste nitrogenkilde, kan vokse..
Som en regulator av mediumets osmolaritet er bipaliumfosfat. For sin del gir magnesiumsulfat, kaliumklorid og jernholdig sulfat essensielle mineraler for vekst av saprofytiske (frilevende) mikroorganismer. Med denne formelen dannes et bunnfall av magnesiumfosfat.
Til slutt er agar-agar forbindelsen som gir den faste konsistensen til mediet og vann er løsningsmidlet for alle komponentene..
Med den modifiserte Czapek-agarformelen er det ingen bunndannelse, og det forbedrer vekstytelsen til noen sopper.
Den ekstreme surheten til Acid Czapek Agar gjør det til et mer selektivt medium, og tillater bare vekst av acidofile mikroorganismer som er i stand til å bruke uorganisk nitrogen. Mens Czapek-gjæragar forbedrer ytelsen til visse sopp.
Vei ut 49 g av dehydrert dyrkningsmedium og oppløs i destillert vann. Påfør varme til kokende. Rist blandingen ofte til den er helt oppløst..
Fordel den oppløste blandingen i rør og autoklav ved 121 ° C i 15 minutter. Når du fjerner fra autoklaven, homogeniseres før du legger ned rørene og lar dem stivne.
Autoklaver den oppløste blandingen ved 121 ° C i 15 minutter og la den avkjøles til 50 ° C, homogeniseres og hell 20 ml i sterile petriskåler. La stivne, snu og oppbevare i kjøleskapet til bruk.
PH bør være 7,3 ± 0,2. Fargen på det dehydratiserte mediet er hvitt og det tilberedte mediet er lysegult, lett overskyet på grunn av tilstedeværelsen av et flokkulerende bunnfall..
Forbered som allerede beskrevet, men tilsett 10 ml steril 10% melkesyre for hver liter tilberedt medium. Det modifiserte Czapek-mediet må holde seg på pH 3,5 ± 0,2.
Vei ut 45,4 g av det dehydratiserte mediet og oppløs det i 1 liter vann. Resten av preparatet er det samme som beskrevet ovenfor. Fargen på det dehydratiserte mediet er hvitt og det tilberedte mediet er hvitt. Den endelige pH-verdien til mediet er 6,8 ± 0,2.
Også kalt Czapek gjærekstraktagar (CYA). Inneholder elementene i klassisk Czapek-agar pluss gjærekstrakt.
Czapek-mediet brukes til å søke etter saprofytiske mikroorganismer i prøver av blant annet jord, grønnsaker, korn, luft, insekter..
Czapek-agar ved sur pH brukes til vekst av acidofile mikroorganismer, mens modifisert Czapek-agar er spesielt nyttig for dannelsen av klamydosporer i arter av komplekset. Candida albicans.
Til slutt er Czapek-gjæragar veldig nyttig for isolering av Aspergillus og Penicillium..
For å søke etter Actinomycetes i jorden, fortsett som følger: prøven blir behandlet med fenolisert vann i 30 minutter, og deretter såes 1 ml av suspensjonen på Czapek agar. Inkuber ved 28 ° C i 5 til 7 dager.
For grønnsaks-, korn- og insektprøver plasseres de direkte på agaren. Du kan også gjøre fortynninger og så 0,1 ml på overflaten av agaren..
For såing brukes en rett løkke eller nål, den impregneres med vattpinnen og agaren inokuleres ved å punktere til den berører bunnen av platen. Inkuber i 24 timer ved 28 ° C og undersøk under et mikroskop over og under platen for å se om klamydosporer har dannet seg..
Inkubasjonstemperaturen og tiden varierer avhengig av typen mikroorganisme som skal isoleres. Plater inkuberes vanligvis i en til to uker i et temperaturområde på 20 til 25 ° C..
Imidlertid er det spesifikke forhold for noen stammer. For eksempel har de fleste arter av slekten Aspergillus optimal vekst ved 30 ° C; derimot A. fumigatus vokser ved 50 ° C.
Når det gjelder inkubasjonstiden, er en eller to uker imidlertid normal Candida albicans kan utvikle seg i løpet av 24 til 48 timer ved 25 ° C.
Den utvikler seg i 12 dagers inkubasjon ved 27 ° C. Koloniene deres er små (25 mm).
Koloniene har et fløyelsaktig utseende, med en definert hvit kant, og i midten har den en blågrønn fargetone som blir grå når den eldes. Baksiden av kolonien er oransje, og plasserer midten av samme farge på grunn av produksjonen av pigment.
Utvikler med hvite til gule mycel og svarte sporer.
Kremete lette beige kolonier utvikler seg. I modifisert Czapek danner agar klamydosporer.
Et mørkegrønt mycelium utvikler seg på 7 dager ved 25 ° C.
For å evaluere kvaliteten på dyrkningsmediet kan sertifiserte kontrollstammer sås, for eksempel: Aspergillus niger MKTA 16404, Candida albicans MKTA 10231.
Aspergillus niger utvikler hvite til gule mycel og svarte sporer på omtrent 5 dager, mens Candida albicans den vil ha en tilfredsstillende vekst i løpet av 24 timers inkubasjon ved 25 ° C; koloniene er kremfarge.
Noen studier har avdekket at for utvinning av Actinomycetes er agaren med best utbytte potetdekstrose-agar, med Czapek-agar som nummer to, men for utvinning av Aspergillus og Penicillium er Czapek-agar den som gir den høyeste utvinningsgraden..
Ingen har kommentert denne artikkelen ennå.