De endo agar eller Endo medium er et solid, differensialkulturmedium med en viss grad av selektivitet. Den opprinnelige formelen ble opprettet av Endo i 1904 for å skille laktosefermentering fra ikke-fermenterende bakterier. Opprinnelig var det designet for å isolere Salmonella typhi, men senere vendte målet for mediet om jakten på koliforme.
Endo Agar-prinsippet har blitt værende, men formuleringen har gjennomgått utallige endringer gjennom årene. For tiden er mediet sammensatt av peptisk fordøyelse av dyrevev, laktose, dikaliumhydrogenfosfat, natriumsulfitt, basisk fuchsin og agar..
Hovedbruken av mediet har vært knyttet til isolasjon og differensiering av gramnegative basiller som tilhører Enterobacteriaceae-familien og til andre nære familier..
I lang tid ble det brukt til påvisning av koliforme stoffer i vann-, meieri- og matprøver, men i dag har bruken av dette mediet blitt fortrengt av andre med lignende funksjoner. Imidlertid bruker noen mikrobiologilaboratorier denne agaren for isolering av Enterobacteriaceae fra prøver av klinisk opprinnelse..
Artikkelindeks
Endo agar inneholder peptoner som fungerer som en kilde til aminosyrer, nitrogen, karbon og energi, nødvendig for vekst av lite krevende mikroorganismer..
På den annen side tilveiebringes den litt selektive karakteren til agaren ved tilsetning av natriumsulfitt og basisk fuchsin; begge komponentene hemmer delvis eller helt veksten av de fleste gram-positive bakteriene.
Differensialkarakteren er gitt av tilstedeværelsen av det gjærbare karbohydratet, som i dette tilfellet er laktose og basisk fuchsin, som også fungerer som en pH-indikator..
Gramnegative bakterier som vokser på denne agaren og er i stand til å gjære laktose, vil danne sterke rosa kolonier; å være patognomonisk av Escherichia coli dannelsen av mørkerøde kolonier med en iriserende grønnaktig metallisk glans. Dette skyldes den høye produksjonen av syrer fra karbohydratgjæring..
Det skal bemerkes at mediet rundt koloniene også får en sterk rosa farge. Mens ikke-laktosefermenterende Gram-negative stenger danner blekrosa kolonier som ligner på middels eller fargeløs.
Dikaliumhydrogenfosfat balanserer pH i mediet og agar er komponenten som gir den faste konsistensen.
Vei ut 41,5 g av det dehydrerte mediet og oppløs i 1 liter destillert vann. Varm opp blandingen med jevnlig omrøring til mediet er helt oppløst. Steriliser i autoklav ved 121 ° C, ved 15 lb trykk, i 15 minutter.
Når du tar den ut av autoklaven, må du avkjøle til en temperatur på omtrent 45-50 ° C, rist blandingen for å homogenisere før servering. Hell 20 ml i sterile petriskåler.
La platene stivne, snu og oppbevar i en plakett eller pakk med mørkt papir før du oppbevarer dem i kjøleskapet. Det er veldig viktig å beskytte det tilberedte mediet mot direkte lys. En anbefalt praksis er å forberede den nøyaktige mengden du trenger.
Hvis de oppbevares i kjøleskap, skal platene få varme opp før bruk..
Mediumets pH skal være mellom 7,2 og 7,6, og fargen på det tilberedte mediet er blekrosa..
Det er en annen versjon av Endo agar (m-Endo) som følger formelen til McCarthy, Delaney og Grasso, som inneholder flere forbindelser og varierer i form av tilberedning.
Denne varianten inneholder: Laktose, Tryptose, Enzymatisk fordøyelse av kasein, Enzymatisk fordøyelse av dyrevev, Natriumklorid, Dibasisk kaliumfosfat, Sodium Sulfite, Gjærekstrakt, Monobasisk kaliumfosfat, Basisk fuchsin, Sodium Deoxycholate, Lauryl Sulfate natrium og agar.
I dette tilfellet veies 51 g av det dehydratiserte mediet og suspenderes i 1 liter destillert vann inneholdende 20 ml etanol..
Varm opp litt under omrøring til mediet oppløses helt. Den skal ikke bli overopphetet og skal ikke autoklaveres. Når blandingen er homogen, server i sterile petriskåler og la den stivne..
I noen land brukes det fortsatt til å telle totale og fekale koliforme stoffer i mat- og vannprøver, spesielt på jakt etter tilstedeværelsen av Escherichia coli som hovedindikator for fekal forurensning.
M-Endo-agar anbefales av American Public Health Association (APHA) for overvåking og kontroll av desinfeksjons- og avløpsrenseprogrammer, samt for evaluering av drikkevannskvaliteten..
Den mest brukte metoden er membranfiltrering, etter å ha beriket prøven med Laurylsulfatbuljong i 2 til 4 timer..
Det kan også brukes som erstatning for EMB-agar i mikrobiologisk analyse av mat og vann ved hjelp av mest sannsynlige tallteknikk (MPN), spesielt i den komplette bekreftelsesfasen for å bekrefte tilstedeværelsen av E coli fra uklare EC-buljonger.
For å evaluere kvaliteten på det tilberedte Endo agar-partiet sås kjente eller sertifiserte kontrollstammer..
Blant stammene som kan brukes til dette formålet er: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus mirabilis ATCC 14153 og Enterococcus faecalis ATCC 11700.
Stammene blir sådd ved utmattelse og inkuberes ved 37 ° C i 24 timer i aerobiose.
De forventede resultatene er:
-Endomedium har lav selektiv kraft, derfor er det mulig at noen gram-positive mikroorganismer som Staphylococcus, Enterococcus og til og med gjær kan vokse.
-Andre basiller som ikke tilhører Enterobacteriaceae-familien kan utvikle seg i dette mediet, som for eksempel Pseudomonas sp Y Aeromonas sp. Karakteristikken til disse stammene er fargeløse uregelmessige kolonier.
-Dette tilberedte mediet er veldig følsomt for lys, og derfor forringes langvarig eksponering for det indikatorsystemet og ødelegger mediet irreversibelt..
-Komponentene i mediet betraktes som kreftfremkallende, derfor bør direkte kontakt unngås.
-Det dehydratiserte mediet er veldig hygroskopisk og må oppbevares i originalemballasjen ved romtemperatur, tett lukket og i et tørt miljø..
Ingen har kommentert denne artikkelen ennå.