De Tryptikasein soyaagar eller Trypticase Soy Agar er et solid, ikke-selektivt og næringsrikt kulturmedium. Det er utpekt med bokstavene TSA for akronymet på engelsk Trypticase Soy Agar. Den består av triptein, soyapepton, natriumklorid og agar-agar.
På grunn av den høye næringskraften er den ideell for dyrking av moderat krevende og ikke-krevende mikroorganismer. Medium uten ekstra kosttilskudd anbefales ikke til primærkulturer, men det er veldig nyttig for å underkulturere rene stammer og holde dem levedyktige, blant annet..
Denne agaren tjener også som en base for fremstilling av berikede medier som blodagar, spesielt når det er nødvendig å observere hemolysemønstrene og å montere optokin og bacitracin taxa, som kreves ved diagnosen Streptococcus pneumoniae Y Streptococcus pyogenes henholdsvis.
På den annen side, når det kombineres med antibiotika, er det nyttig å isolere fakultative og strenge anaerobe mikroorganismer av klinisk betydning fra prøver med blandet flora..
Endelig oppfyller sammensetningen av trypticasein soyagar og dens ytelse kravene fastsatt av de forskjellige farmakopéene (europeiske, japanske og nordamerikanske)..
Artikkelindeks
For riktig utvikling av bakterier er tilstedeværelsen av energiforsyning nødvendig, slik som aminosyrer, vitaminer, puriske og pyrimidiske baser..
I denne forstand gir triptein og soyapepton disse næringsstoffene til mikroorganismer, og tillater dermed full utvikling. For kjedelige bakterier er det imidlertid nødvendig å supplere denne agaren med defibrinert blod eller oppvarmet blod for å øke berikelsen..
På den annen side, hvis antibiotika tilsettes mediet, blir det et selektivt medium. Du kan også legge til 0,6% gjærekstrakt for å favorisere isolasjonen av arten av slekten Listeria, mens tilsetningen av cystintelluritt Y lammets blod er ideelt for Corynebacterium diphteriae.
Til slutt tilfører natriumkloridet mediet den osmotiske balansen, og agaren gir den faste konsistensen..
For å fremstille trypticasein-soyagar, må 40 g av det dehydratiserte kommersielle mediet veies i digital skala. Den oppløses i en liter destillert vann i en kolbe.
Blandingen får hvile i 5 minutter, og deretter føres den til en varmekilde for å oppløse mediet. Den bør omrøres ofte og kokes i 1 eller 2 minutter. Deretter steriliseres mediet i autoklaven ved 121 ° C i 15 minutter.
La avkjøles til 50 ° C og fordel den i sterile petriskåler. La stivne, snu, ordne i tøyler og oppbevar i kjøleskapet.
Den endelige pH-verdien til mediet må være 7,3 ± 0,2.
Det skal bemerkes at fargen på det dehydratiserte dyrkningsmediet er lysebeige og skal oppbevares mellom 10 og 35 ° C, på et tørt sted..
Den tilberedte agaren er på sin side lysegul i fargen. Tilberedte plater skal oppbevares i kjøleskap (2 til 8 ° C) til bruk..
Platene må nå romtemperatur før bruk.
Blodagar tilberedes ved å tilsette 5% defibrinert blod når avkjøling av tryptisk soyagar til 50 ° C. Blandingen homogeniseres ved å rotere med milde bevegelser.
Server i sterile petriskåler. Midtfargen skal være kirsebærrød.
For å forberede den TSA-baserte blodagaren, fortsett det samme som prosedyrene som allerede er beskrevet, men når du forlater autoklaven, la den hvile til temperaturen på mediet er omtrent mellom 56 og 70 ° C. På den tiden plasseres blodet og blandes til mediet blir brunt..
Server i sterile petriskåler. Fargen på mediet er sjokoladebrun.
Agarpreparasjonsprosedyren er den samme som beskrevet for plater, med den forskjellen at i stedet for å servere mediet på petriskåler, fordeles det mellom 10 og 12 ml i rør med bakelittlokk før sterilisering..
Deretter autoklaveres rørene ved 121 ° C i 15 minutter. Når de forlater, lener de seg ved hjelp av en støtte og lar dem stivne.
De tilberedte kilene blir sådd etter overflateareal og tjener til å holde visse ikke-krevende mikroorganismer levedyktige i en spesifisert tid..
Tryptikasein soyaagar brukes i følgende tilfeller:
-Som en base for å tilberede den klassiske blodagaren som rutinemessig brukes i de fleste laboratorier.
-Isolasjonen av kjipe bakterier.
-Observere hemolysemønsteret.
-Kjører diagnostiske tester.
-Som grunnlag for å utarbeide spesiell blodagar for Corynebacterium diphteriae, med cystintelluritt Y lamblod.
-Som en base for å tilberede lamblodagar, pluss kanamycin-vancomycin for vekst av anaerober, spesielt Bacteroides sp.
-For vedlikehold av ikke-krevende stammer (Bacterioteca).
-Aerobic microbial count in the microbial limit study of water, environment, food and cosmetic samples.
Prøver kan sås direkte på overflaten av Trypticasein Soy Agar supplert med blod eller andre tilsetningsstoffer. Det blir sådd av utmattelse.
Mens tryptikasein-soyagarplater uten tilsetningsstoffer vanligvis brukes til å dyrke mikrobielle stammer (bakterier eller gjær)..
For å kontrollere steriliteten til de forskjellige mediene som er tilberedt med trypticasein-soyabasagar, anbefales det å gjøre følgende: Fra hver forberedte batch skal 1 eller 2 uinokulerte plater eller rør inkuberes ved 37 ° C i 24 timer for å demonstrere steriliteten. I alle tilfeller må den forbli uten vekst.
Hvis det blir funnet forurensning, må hele batchen kastes..
Følgende bakteriestammer kan brukes til å studere riktig funksjon av tryptikasein soyagar: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 og Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Stammer blir sådd og inkubert aerobt ved 37 ° C i 24 timer.
I alle tilfeller må veksten være tilfredsstillende.
Sopp som Complex kan også brukes Candida albicans ATCC 10231 og Aspergillus niger ATCC 16404. Det forventes god vekst for begge stammene.
Følgende stammer kan brukes til å verifisere at blodagar tilberedt med denne basen fungerer korrekt: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 og Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.
De blir sådd og inkubert ved 37 ° C i mikroaerofilisitet i 24 timer..
I alle tilfeller må veksten være tilfredsstillende, med tanke på at i S. pyogenes beta-hemolyse (klar glorie rundt kolonien) bør observeres og i begge stammer av S. pneumoniae alfahemolyse (grønnaktig glorie rundt kolonier) bør observeres.
Ingen har kommentert denne artikkelen ennå.