Strålende grønn agarfundament, tilberedning og bruk

560
Anthony Golden

De knallgrønn agar Det er et solid kulturmedium, med høy grad av selektivitet. Den brukes utelukkende til isolering av stammer av slekten Salmonella, men det er noen unntak, for eksempel tyfi- og paratyphi-arter som ikke vokser i dette mediet..

Søket etter slekten Salmonella er hyppig i avføring, vann eller matprøver. Slik sett kan dette mediet være veldig nyttig. Denne agaren ble opprettet i 1925 av Kristensen, Lester og Jurgens, senere ble den modifisert av Kauffmann.

Lys grønn agar. Fermenterende og ikke-fermenterende kolonier. Kilde: M J Richardson / Invisible Worlds utstilling - 2012geograph.org.uk/photo/2815842 Creative Commons License.

Den består av pluripeptoner fra peptisk fordøyelse av animalsk vev og bukspyttkjertelfordøyelse av kasein, den inneholder også gjærekstrakt, natriumklorid, laktose, sukrose, fenolrød, lysegrønn og agar-agar..

Det er preget av å være et ganske ugjestmildt miljø for de fleste bakterier, og favoriserer veksten av Salmonella, men noen koliforme er i stand til å leve i den, og utvikle seg svakt.

Det er viktig å merke seg at slekten Shigella ikke vokser i dette miljøet, og det gjør det heller ikke Salmonella typhimurium, ingen Salmonella paratyphi. Derfor, hvis du vil isolere disse mikroorganismene, bør du bruke andre medier, for eksempel XLD-agar, blant andre..

Artikkelindeks

  • 1 Begrunnelse
    • 1.1 Lysegrønn agar
    • 1.2 Varianter av lysegrønn agar (BGA)
  • 2 Klargjøring
  • 3 Bruksområder / applikasjoner
  • 4 Kvalitetskontroll
  • 5 Referanser

Basis

Lys grønn agar

Hver av komponentene som utgjør mediet oppfyller en bestemt funksjon som bestemmer agarens egenskaper og egenskaper..

Pluripeptoner og gjærekstrakt er kilden til næringsstoffer som mikroorganismer tar nitrogen og mineraler som er nødvendige for deres utvikling. Laktose og sukrose er energikilder for mikroorganismer som er i stand til å gjære dem..

Lysegrønn er det hemmende stoffet som forhindrer veksten av Gram-positive bakterier og et stort antall gramnegative mikroorganismer..

Natriumklorid gir mediet osmotisk stabilitet. Mens fenolrødt er pH-indikatoren, endrer den farge når det oppdages produksjonen av syrer fra gjæring av karbohydrater..

De ikke-gjærende koloniene av laktose og sukrose vokser på dette mediet i en rosa eller gjennomsiktig hvit farge, på rød bakgrunn. For eksempel bakterier av slekten Salmonella.

Mens laktose- eller sukrose-gjærende bakterier som er i stand til å vokse på dette mediet, utvikler de grønn-gule eller gulgrønne kolonier på en grønn-gul bakgrunn. For eksempel, Escherichia coli og Klebsiella pneumoniae.

Bright green agar (BGA) varianter

Det finnes andre varianter av lysegrønn agar; Novobiocin Brilliant Green Glucose (NBG) Agar og Novobiocin Brilliant Green Glycerol Lactose (NBGL) Agar.

Novobiocin Bright Green Glucose Agar (NBG)

Inneholder Trypticase Soyagar, Ferric Ammonium Citrate, Sodium Thiosulfate Pentahydrate, Phenol Red, Glucose, Bright Green, Novobiocin og Destilled Water.

Den brukes til isolering av Salmonella-kolonier fra avføringsprøver.

I dette tilfellet er lyse grønt og novobiocin de hemmende stoffene som forhindrer veksten av gram-positive bakterier og noen gram-negative mikroorganismer..

Natriumtiosulfat er kilden til sulfid og jerncitrat er kilden til jern, begge er nødvendige for å avsløre hydrogensulfidproduksjon gjennom dannelsen av et svart ferrisulfidfall..

Glukose er det gjærbare karbohydratet og fenolrødt er pH-indikatoren..

I dette mediet utvikler Salmonella-koloniene seg store med et svart senter omgitt av en rødlig glorie og etterfulgt av et tydelig synlig område. Noen stammer av Citrobacter freundii produsere kolonier identiske med Salmonella.

Novobiocin Brilliant Green Glycerol Lactose Agar (NBGL)

Dette mediet inneholder trypticase soyagar, jernammoniumcitrat, natriumtiosulfat, laktose, glyserol, lysegrønn, novobiocin og destillert vann..

Forskjellen mellom dette mediet og det forrige er at glukose erstattes av laktose og glyserol og fenolrød ikke brukes..

Mediet brukes også til å isolere Salmonella-arter, koloniene utvikler seg svart på grunn av produksjonen av hydrogensulfid.

Bare kolonier som ikke produserer syre fra glyserol eller laktose, oppnår H-produksjontoDet er tilstrekkelig fordi lav pH forstyrrer dannelsen av HtoS. Dette resulterer i fargeløse kolonier for de fleste Proteus- og Citrobacter-arter..

Forberedelse

-Vei 58 gram av det kommersielt oppnådde dehydratiserte mediet. Tilsett den i en liter omdestillert vann. Bland, la stå noen minutter og legg preparatet under en varmekilde til det oppløses helt..

-Autoklaver ved 121 ° C i 15 minutter, ikke overskrid steriliseringstiden.

-La stå og server mens den er varm i sterile petriskåler. Den endelige pH-verdien skal være 6,9 ​​± 0,2.

-La det stivne og oppbevares i kjøleskapet til bruk. Før såing skal platene ta romtemperatur.

-Det pulveriserte mediet har grønn farge og tilberedt tar en oransje-brun eller rødgrønn farge, avhengig av pH og det kommersielle selskapet. En veldig brun farge er indikativ for at agaren var overopphetet..

-Når agaren har stivnet, anbefales det ikke å omstille den, ettersom mediet forverres..

Bruksområder / applikasjoner

Dette mediet brukes til å søke etter stammer av slekten Salmonella fra avføringsprøver og melkeprodukter, blant andre..

Siden det er et ganske ugjestmildt miljø, anbefales det å så rikelig med inokulum hvis den direkte prøven brukes. Ellers bør en pre-anrikning og berikelse av prøvene gjøres før såing i dette mediet..

Ettersom noen salmonellastammer hemmes eller vokser med vanskeligheter, anbefales det å følge dette mediet med annen selektiv agar for Salmonella.

Hver koloni med en typisk Salmonella-karakteristikk må underkastes biokjemiske tester for definitiv identifikasjon..

QA

For å teste den gode ytelsen til det lysegrønne agarmediet, kan ATCC-stammer brukes til å observere deres utvikling på det..

De hyppigste stammene som brukes til kvalitetskontroll er: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922,  Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 6538.

De tre første skal gi rosa eller gjennomsiktige hvite kolonier på rød bakgrunn. Salmonella med god utvikling og Proteus med dårlig eller regelmessig vekst.

For Klebsiella og Escherichia forventes grønne gule kolonier med gul bakgrunn, og i tilfelle Shigella og Staphylococcus bør de hemmes.

Det dehydratiserte mediet må oppbevares ved romtemperatur, på et tørt sted, fordi mediet er veldig hygroskopisk.

Referanser

  1. Laboratorio Difco Francisco Soria Melguizo S.A. Strålende grønn agar. 2009
  2. Britannia-laboratoriet. Bright Green Agar. 2015..
  3. BD laboratorium. BD Brilliant Green Agar. 2013.
  4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. (5. utg.). Argentina, redaksjonelt Panamericana S.A.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12. utg. Argentina. Redaksjonell Panamericana S.A

Ingen har kommentert denne artikkelen ennå.