Vogel-Johnson agar begrunnelse, forberedelse og bruk

4477
Egbert Haynes

De Vogel-Johnson agar er et solidt, selektivt og differensielt kulturmedium, spesielt formulert for isolering av Staphylococcus aureus. Dette mediet ble skapt av Vogel og Johnson i 1960 fra modifiseringen av tellurittglycinagaren formulert i 1955 av Zebovitz, Evans og Niven..

Modifikasjonen besto i å øke konsentrasjonen av mannitol til stede i mediet og i inkorporeringen av en pH-indikator. Den nåværende formelen består av triptein, gjærekstrakt, mannitol, dikaliumfosfat, litiumklorid, glycin, fenolrød, agar, 1% kaliumtellurittoppløsning og vann..

Kilde: Pixinio.com/Laboratorio de la Clínica ProcreaTec. Flickr.

Det skal bemerkes at det er andre medier som, i likhet med Vogel-Johnson agar, er selektive for isolering av S. aureus, slik som salt mannitolagar og Baird Parker-agar. I denne forstand kan det sies at grunnlaget for Vogel-Johnson-agar er en blanding mellom salt mannitolagar og Baird Parker-agar..

I den første koloniene i S. aureus De utmerker seg ved å gjære mannitolen og gjøre pH-indikatoren gul. På den annen side, i det andre den S. aureus det er preget av å redusere telluritt til tellur og danne grå til svarte kolonier. Begge egenskapene er observert i Vogel-Johnson agar..

Dette mediet, som sine kolleger, er nyttig for påvisning av Staphylococcus aureus i matprøver, sanitære kontroller av industriprodukter og i kliniske prøver.

Artikkelindeks

  • 1 Begrunnelse
    • 1.1 Næringsstofftilførsel
    • 1.2 Selektiv kraft
    • 1.3 Differensialkraft
    • 1.4 Osmotisk balanse og størkningsmiddel
  • 2 Klargjøring
    • 2.1 Kaliumtellurittløsning ved 1% vekt / volum
    • 2.2 Vogel-Johnson Agar Base Medium
  • 3 Bruk
  • 4 Kvalitetskontroll
  • 5 Referanser

Basis

Tilførsel av næringsstoffer

Vogel-Johnson medium inneholder triptein og gjærekstrakt; Begge stoffene gir langkjedede aminosyrer som fungerer som kilder til karbon og nitrogen som er nødvendige for bakterievekst. Bakterier som kan vokse i dette mediet, tar næringsstoffene fra disse stoffene..

Selektiv kraft

Vogel-Johnson-agar er i stand til å hemme veksten av gramnegative bakterier og til og med noen gram-positive bakterier, og favoriserer utviklingen av koagulase-positive stafylokokker. De hemmende stoffene er kaliumtelluritt, litiumklorid og glysin..

Differensialkraft

Stoffene som lager dette differensielle mediet er mannitol og kaliumtelluritt. Mannitol er et karbohydrat, og når det gjæres, produseres syrer som får mediet til å bli rødt til gult, noe som skjer takket være tilstedeværelsen av den røde fenol pH-indikatoren..

Mens den fargeløse telluritten når den er redusert til fritt metallisk tellur, tar en mørk grå til svart farge..

De Staphylococcus aureus gjærer mannitol og reduserer telluritt til tellur. Det er derfor de typiske koloniene i S. aureus i dette mediet er de grå eller svarte omgitt av et gult medium.

Bakterier som vokser i dette mediet og ikke reduserer telluritt eller gjæringsmannitol, vil danne gjennomsiktige kolonier omgitt av et rødt farget medium, enda mer intens enn den opprinnelige fargen, på grunn av alkalisering av mediet ved bruk av peptoner.

På den annen side vil bakterier som reduserer telluritt men ikke gjærer mannitol vokse som grå eller svarte kolonier omgitt av et dyprødt medium..

Hvis mediet ble tilberedt uten tilsetning av kaliumtelluritt, ble kolonier av S. aureus ville utvikle seg som gule kolonier, omgitt av et gult medium, som i salt mannitolagar.

Osmotisk balanse og størkningsmiddel

Dikaliumfosfat opprettholder den osmotiske balansen i mediet og justerer pH til nøytralitet 7.2. Mens agaren gir solid konsistens til kulturmediet.

Forberedelse

Kaliumtellurittløsning 1% vekt / volum

Denne løsningen er ikke inkludert i det dehydratiserte mediet, siden den ikke kan steriliseres i en autoklav. Av denne grunn tilberedes den separat og tilsettes det allerede steriliserte mediet..

Noen kommersielle hus selger den ferdige 1% kalium-tellurittløsningen. Hvis du vil forberede deg på laboratoriet, gjør du slik:

Vei ut 1,0 g kaliumtelluritt og mål 100 ml destillert vann. Oppløs kaliumtelluritt i en del vann og fullfør deretter vannmengden til den når 100 ml. Steriliser løsningen ved filtreringsmetode.

Vogel-Johnson Agar Base Medium

Vei 60 g av det dehydratiserte mediet, og oppløs i 1 liter destillert vann. Blandingen blir kokt opp for å hjelpe fullstendig oppløsning. Under oppløsningsprosessen omrøres mediet ofte.

Steriliser i autoklav ved 15 pounds trykk og 121 ° C i 15 minutter. Fjern fra autoklaven og la den hvile til mediet når en temperatur på omtrent 45 til 50 ° C. Tilsett 20 ml av den tidligere tilberedte 1% kaliumtellurittoppløsningen.

Bland og hell i sterile petriskåler. La stivne og bestill omvendt på plateholderne for senere å oppbevare i kjøleskapet til bruk.

Den endelige pH-verdien til det tilberedte mediet må være 7,2 ± 0,2.

Før du sår en prøve, vent til platen når romtemperatur..

Fargen på det tilberedte mediet er rødt.

Bruk

Selv om den kan brukes til isolering av S. aureus i alle typer prøver brukes den hovedsakelig til mikrobiologisk analyse av farmasøytiske produkter, kosmetikk og mat.

Det anbefales at inokulatet er tett. Såing kan gjøres ved striering med et platinahåndtak eller med overflate med en Drigalski-slikkepott.

Plater inkuberes ved 35-37 ° C i 24 til 48 timer i aerobiose.

QA

Følgende kontrollstammer kan brukes til å utføre kvalitetskontroll på Vogel-Johnson-mediet:

Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 eller Proteus mirabilis ATCC 43071.

Det forventede resultatet er som følger: for stammer av S. aureus Tilfredsstillende vekst med svarte kolonier omgitt av gult medium. For å S. epidermidis regelmessig vekst med gjennomsiktige eller svarte kolonier omgitt av rødt medium.

Likeledes for E coli total hemming forventes, og for Proteus mirabilis delvis eller total hemming; hvis den vokser, vil den gjøre det sparsomt, og koloniene vil være svarte omgitt av rød halvdel.

Referanser

  1. BD Laboratories. VJ (Vogel og Johnson Agar). 2006. Tilgjengelig på: bd.com
  2. Britannia Laboratories. Vogel- Johnson Agar. 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com
  3. Britannia Laboratories. Kalium telluritt. 2015. Tilgjengelig på: britania.com
  4. Himedia-laboratoriet. Vogel- Johnson Agar Medium. 2018. Tilgjengelig på: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
  5. Vogel- Johnson Agar Base. Merck Microbiology Manual. 12. utgave, s. 502-503. Tilgjengelig på: Brukere / Team / Nedlastinger
  6. Wikipedia-bidragsytere, “Ágar Vogel Jonhson”, Wikipedia er en leksikon gratis,   tilgjengelig på: wikipedia.org.
  7. Venezuelansk Standard Covenin 1292-89. (1989). Mat. Isolering og telling Staphylococcus aureus. Tilgjengelig i:sencamer.gob.ve

Ingen har kommentert denne artikkelen ennå.