De pepton vann Det er et flytende, ikke-selektivt anrikningsmedium, som primært brukes som et fortynningsmiddel for prøver av mat eller andre materialer. Dette mediet er kjemisk sett veldig enkelt, det inneholder kjøttpepton, natriumklorid og vann..
Den har en viss næringsverdi, slik at prøven kan berikes. Hvis det er misbrukt bakterier, har dette mediet makten til å reparere levedyktighet. Det er spesielt nyttig i utvinningen av bakterier som tilhører Enterobacteriaceae-familien..
I tilfelle utvinning av Salmonellas anbefales bruk av varianten av bufret peptonvann; Dette fungerer som et pre-anrikningsmedium for prøven, i dette tilfellet inneholder det andre elementer som dinatriumfosfat og dikaliumfosfat..
Normalt fremstilles peptonvann ved nøytral pH, men det er andre varianter der det er nødvendig at pH er 8,5 ± 0,2 (alkalisk), fordi bakterien som skal isoleres er basisk, slik som Vibrio cholerae.
Videre kan dette mediet brukes som et basismedium for karbohydratfermenteringstester..
Artikkelindeks
Peptoner gir næringsstoffene som kreves for bakterievekst, spesielt nitrogen og kortkjedede aminosyrer, mens natriumklorid opprettholder osmotisk balanse..
I tillegg tillater mediet å spre, homogenisere og reparere bakterieceller som har blitt skadet av industrielle prosesser..
Som et fortynningsmiddel er det ideelt, og erstatter effektivt fysiologisk løsning (SSF) eller fosfatbufferløsning (PBS).
Bakterievekst er tydelig ved å observere dens uklarhet..
Vei opp 1 g pepton og 8,5 g natriumklorid, oppløs i 1 liter destillert vann. PH bør justeres til 7,0. For dette kan 1 N natriumklorid brukes..
Vei 15 g av det dehydratiserte mediet og oppløs det i en liter destillert vann. Homogeniser blandingen. Om nødvendig kokes blandingen i 1 minutt for å hjelpe den totale oppløsningen. Server i 100 ml flasker eller 10 ml rør etter behov. Autoklav ved 121 ° C i 15 minutter.
Avkjøl og bruk eller oppbevar i kjøleskap. Den endelige pH i mediet er 7,2 ± 0,2.
Fargen på det dehydratiserte mediet er lys beige og det tilberedte mediet er lysegult.
Til det forrige preparatet - før sterilisering - må karbohydratet tilsettes til en sluttkonsentrasjon på 1%, pluss Andrade-indikatoren (sur fuchsin) eller fenolrød (0,018 g / L). Rørene må være utstyrt med en Durham-bjelle for å observere gassdannelse.
Den inneholder enzymatisk hydrolysat av kasein, natriumklorid, dihydrogenkaliumfosfat og natriumhydrogenfosfatdodekahydrat. Endelig pH er 7,0 ± 0,2.
Vekt 20 g av det dehydratiserte mediet for tilberedning og oppløs det i 1 liter destillert vann. La den hvile i omtrent 5 minutter. Varm opp i 1 minutt til det er helt oppløst.
Hell i passende glass etter behov. Steriliser ved bruk av autoklaven ved 121 ° C i 15 minutter.
Vei 25 g av det dehydratiserte mediet og oppløs det i 1 liter vann. Fortsett som beskrevet ovenfor. PH varierer fra 8,3 til 8,7.
Inokulatet gjøres ved å plassere prøven direkte.
Det brukes til å fortynne prøver, spesielt når det mistenkes at det kan være skadede bakterier. Vanligvis er fortynningene 1:10 og 1: 100.
Inkuber i 24 timer i aerobiose ved 35-37 ° C.
For avføringsprøver som leter etter Salmonella, anbefales bruk av bufret eller bufret vann som et pre-anrikningsmedium..
For å gjøre dette, gjør du slik:
Hvis avføringen er dannet, ta 1 g prøve. Hvis de er flytende, ta 1 ml avføring og suspendere i et rør med 10 ml buffert peptonvann. For rektale vattpinner, tapp vattpinnematerialet ut i røret med bufret peptonvann.
I alle tilfeller, bland og homogeniser prøven veldig bra..
Inkuber ved 37 ° C i 18 til 24 timer. Deretter subkultur i en anrikningsbuljong slik som selenitt cystinbuljong eller tetrakionatbuljong ved 37 ° C i 18-24 timer til. Til slutt dyrk i selektive medier for Salmonella, som blant annet SS-agar, XLD-agar, Hektoen-agar..
Peptonvann brukes som et anrikningsmedium eller som et enkelt fortynningsmiddel, men hvis det søkes etter Salmonella-arter, brukes det som et pre-anrikningsmedium, som allerede beskrevet..
Fortsett med mat som følger:
Vekt 25 g av prøven for fast mat og for flytende mat måler du 25 ml av den. Plasser nevnte porsjon i kolber som inneholder 225 ml peptonvann. Bland og homogeniser prøven.
Hvis det mistenkes at den mikrobielle belastningen er høy, kan det foretas serielle eller desimale fortynninger for å lette tellingen av kolonidannende enheter (CFU)..
Antall fortynninger vil avhenge av prøvetypen og erfaringen til analytikeren..
Hvis det tvert imot mistenkes at den mikrobielle belastningen er veldig lav, er det ikke nødvendig å utføre fortynninger. Deretter subkultur på selektive medier.
Når det gjelder mat fra havet, som skalldyr, fisk, blant andre, på jakt etter Vibrio cholerae eller andre Vibrio-arter, bør peptonvann justert til pH 8,5 (alkalisk peptonvann) brukes.
Fra hver batch som er utarbeidet, skal ett til to rør inkuberes uten inokulering i 24 timer i aerobiose ved 37 ° C. På slutten av tiden skal ingen uklarhet eller fargeendring observeres.
Kjente kontrollstammer kan også brukes til å evaluere effektiviteten:
Følgende bakteriestammer kan brukes til dette: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.
I alle tilfeller forventes tilfredsstillende mikrobiell utvikling, som observeres av uklarhet i mediet..
-Det dehydratiserte mediet er veldig hygroskopisk, så det må holdes borte fra fuktighet.
-Mediet skal ikke brukes hvis det observeres noen form for forverring.
-Det dehydratiserte dyrkningsmediet skal lagres mellom 10 - 35 ° C
-Det tilberedte mediet bør oppbevares nedkjølt (2-8 ° C).
Ingen har kommentert denne artikkelen ennå.