De Biuret er et reagens som brukes til bestemmelse av proteiner med lang kjede og kort kjede. Det brukes spesielt innen analytisk kjemi og urinalyse for å undersøke konsentrasjonen av totale proteiner i serum, plasma og urin..
Proteinverdier kan økes eller reduseres i visse patologier. Hypoproteinemia symptomer opptrer vanligvis hos pasienter med nyresykdom, hos underernærte pasienter og hos pasienter med kroniske infeksjoner..
Mens hyperproteinemi observeres i patologier som multippel myelom, systemisk lupus erythematosus, bakteriell endokarditt, bakteriell hjernehinnebetennelse, Waldenstroms makroglobulinemi, blant andre..
På den annen side skyldes tilstedeværelsen av protein i urinen filtrering av albumin i nyrene. Dette er en patologisk atferd som bør studeres.
I denne forstand er Biuret veldig nyttig, da det gjør det mulig å kvantifisere tilstedeværelsen av proteiner i serum, plasma, urin, blant mange andre prøver..
Selv Biuret kan brukes til å undersøke tilstedeværelsen og konsentrasjonen av proteiner i dårlig utforskede prøver eller prøver med ukjent sammensetning. Derfor er det mye brukt i forskningsområdet.
Biuret-testen er basert på å oppdage peptidbindinger. Testen foregår i et alkalisk medium. Prøven må inneholde minst to peptidbindinger for at et fiolett-lilla kompleks skal dannes. Komplekset er dannet av foreningen av bindingene og kobberionet.
Artikkelindeks
Biurets reagens består av kaliumhydroksid, kobbersulfat og natrium- og kaliumtartrat. Natriumhydroksyd brukes til å alkalisere mediet, siden denne tilstanden er viktig for at reaksjonen skal finne sted.
Stoffene som reagerer med proteiner er kobbersulfat, mens natriumtartrat har den funksjonen at den ikke tillater dannelse av kobberhydroksid, som har en tendens til å utfelle og forstyrrer reaksjonen..
Hvis stoffer med peptidbindinger (polypeptider eller proteiner) blir funnet i prøven, vil testen være positiv.
En reaksjon tolkes som positiv når løsningen blir lilla. Fargen produseres ved dannelse av et kompleks mellom minst to peptidbindinger som har CO-NH-gruppen og de kupiske kationene.
Det fiolette komplekset kan dannes på to måter: den ene er ved tap av protoner fra amidgruppene som binder seg til metallet (depronotasjon), og den andre ved foreningen av oksygen- og nitrogenelektronene som er frie og binder. Med kobber.
Denne reaksjonen kan variere i intensitet og farge, avhengig av type protein..
Testen kan utføres kvalitativt eller kvantitativt. I den kvalitative formen rapporteres det som positivt eller negativt. Mens den er i kvantitativ form, kan konsentrasjonen måles ved spektrofotometrisk metode.
Reaksjonen leses mellom 540-560 nm. Intensiteten til fargen er direkte proporsjonal med konsentrasjonen av peptidbindinger i prøven..
-Natriumhydroksid (NaOH) 20%
-1% Cupric Sulfate Pentahydrate (CuSO4. 5HtoELLER)
-Blandet natriumkaliumtartrattetrahydrat (KNaC4H4ELLER64HtoELLER)
-Den må oppbevares nedkjølt.
-Plasser 100 ul av prøven eller standarden som skal analyseres i et prøverør.
-Tilsett 2 ml natriumhydroksid.
-Bland veldig godt.
-Tilsett 5 ml Biuret-reagens.
-Bland og la stå i 25 minutter ved romtemperatur, dekk til og beskytt mot lys.
-Observer fargedannelsen eller ikke, og måle spektrofotometrisk.
Bovint serumalbumin kan brukes som standard for å utføre kalibreringskurven. Ulike konsentrasjoner blir utarbeidet av den. For eksempel 25, 50, 75, 100, 125 og 150%.
Reaksjonen er satt opp med alle disse kjente konsentrasjoner og absorbansen leses ved en bølgelengde på 540 nm. Med dataene fra de kjente konsentrasjonene og absorbansavlesningene blir kalibreringskurven laget.
I hver bestemmelse eller batch av behandlede prøver anbefales det å montere en standard. Bovint serumalbumin 0,1-2 mg / ml kan brukes som kalibreringsstandard..
Målinger utføres på et spektrofotometer ved 540 nm.
Lineæritet oppfylles til en konsentrasjon på 12 g / dl.
Selv om det ikke er veldig hyppig, bør det bemerkes at noen stoffer kan forstyrre under gjennomføringen av denne testen. For eksempel kan tilstedeværelsen av ammoniakk hemme fargedannelsen.
På samme måte kan andre stoffer absorbere med samme bølgelengde, for eksempel visse pigmenter..
På den annen side kan interferens genereres når et annet stoff enn peptidbindingen danner et kompleks med kobbersaltet. Eksempel: noen karbohydrater og visse lipider.
Hvis prøven som skal analyseres, har en slags bunnfall, må den filtreres eller sentrifugeres før testen monteres..
Testen påvirkes ikke av tilstedeværelsen av:
-Bilirubin opp til en konsentrasjon på 20 mg / dl.
-Hemoglobin opp til en konsentrasjon på 750 mg / dl.
-Dekstran opp til en konsentrasjon på 30 g / l.
-Triglyserider opp til en konsentrasjon på 4000 mg / dl.
-Det er en enkel metode å utføre.
-Det er en økonomisk test.
-Har høy spesifisitet for proteiner.
-Lite forstyrrelser.
Den har dårlig følsomhet for å oppdage lave mengder protein. Arbeidet utført av Fuentes og samarbeidspartnere bekrefter at Biuret-testmetoden har en deteksjonsgrense på 1 mg / ml protein og en kvantifiseringsgrense på 3 mg / ml.
Imidlertid rapporterer annen forskning utført ved University of Amazonia mye lavere verdier. Deteksjonsgrensen rapportert av studien er 0,020 mg / ml og kvantifiseringsgrensen er 1,33 mg / ml..
Biuret-reagenset eller testen brukes til bestemmelse av proteiner i kliniske og ikke-kliniske prøver i rutine- og forskningslaboratorier.
I mange patologier er det viktig å bestemme konsentrasjonen av totale proteiner i kliniske prøver, som kan være høye eller lave.
De er forhøyet i:
-Multippelt myelom,
-Systemisk lupus erythematosus,
-Bakteriell endokarditt,
-Bakteriell hjernehinnebetennelse,
Waldenstroms makroglobulinemi, blant andre.
Det er redusert i:
-Nyreinsuffisiens,
-Personer med alvorlige grader av underernæring,
-Pasienter med kroniske infeksjoner, blant andre.
De vanligste kliniske prøvene er serum, plasma og urin. Den normale verdien av proteiner i serum eller plasma er 6,0-8,8 gr / dl.
Konsentrasjonen av protein i urinen hos voksne overstiger ikke tallet 150 mg / 24 timer.
Spedbarn: < a 0,50 mg
Barn 2 år og eldre: indeks: 0,20 mg
Voksne: < 0,2 mg
Biuret-reaksjonen kan brukes til mange typer ikke-kliniske prøver, for eksempel meieriprodukter, motgift eller et hvilket som helst ukjent stoff du vil undersøke forekomsten av proteiner for..
Ingen har kommentert denne artikkelen ennå.