De medium OF eller glukose fermenteringsagar er en halvfast agar spesielt designet for studier av oksidativ og fermentativ metabolisme av karbohydrater i en viktig gruppe andre mikroorganismer enn Enterobacteriaceae, kalt ikke-enteriske gramnegative basiller.
Den ble skapt av Hugh og Leifson; disse forskerne innså at konvensjonelle metoder for å studere syreproduksjon fra karbohydrater ikke var egnet for denne spesifikke gruppen av bakterier.
Dette er fordi ikke-enteriske gramnegative stenger generelt produserer lave mengder syrer, i motsetning til Enterobacteriaceae..
I denne forstand har OF-mediet spesielle egenskaper som kan oppdage små mengder syre som dannes, både ved oksidative og gjærende veier. Disse forskjellene er relatert til mengden peptoner, karbohydrater og agar..
Dette mediet inneholder mindre peptoner og en høyere konsentrasjon av karbohydrater, og reduserer dermed produktene som alkaliserer mediet som et resultat av proteinmetabolisme og øker produksjonen av syrer på grunn av bruk av karbohydrater..
På den annen side favoriserer reduksjonen i mengden agar spredning av syren som produseres gjennom mediet, i tillegg til at vi kan observere motilitet..
OF-medium består av pepton, natriumklorid, bromtymolblått, dikaliumfosfat, agar og et karbohydrat. Det vanligste karbohydratet er glukose, men andre kan brukes i henhold til det du vil studere, for eksempel laktose, maltose, xylose, blant andre..
Artikkelindeks
Som ethvert kulturmedium, må OF-medium inneholde næringsstoffer som garanterer bakterievekst; disse stoffene er peptoner.
På sin side gir karbohydrat energi og tjener samtidig til å studere oppførselen til mikroorganismen mot den, det vil si at bakteriene kan klassifiseres som en oksidativ, fermenterende eller ikke-sakkarolytisk organisme..
OF medium inneholder et 1: 5 pepton / karbohydratforhold i motsetning til 2: 1 konvensjonelle medier. Dette sikrer at mengden alkaliske aminer dannet fra nedbrytningen av peptoner ikke nøytraliserer dannelsen av svake syrer..
På den annen side inneholder mediet natriumklorid og dikaliumfosfat. Disse forbindelsene stabiliserer osmotisk mediet og regulerer henholdsvis pH. Bromothymolblått er pH-indikatoren, som gjør fargen på mediet fra grønt til gult ved produksjon av syre..
Noen mikroorganismer kan bruke karbohydrater gjennom oksidasjons- eller gjæringsveiene, mens andre ikke tar noen av de to rutene..
Dette avhenger av egenskapene til hver mikroorganisme. For eksempel kan noen strenge aerobe mikroorganismer oksidere visse karbohydrater, og fakultative anaerober kan oksidere og gjære avhengig av miljøet rundt dem, mens andre ikke oksyderer eller gjærer karbohydrater (asakarolytisk).
Endelig er det en modifisering av OF-mediet anbefalt av CDC som inneholder en spesiell OF-base med fenolrød som indikator..
Glukoseoksidasjonsprosessen krever ikke glukosefosforylering, det samme gjør fermenteringsprosessen. I dette tilfellet oksyderes aldehydgruppen til en karboksylgruppe, noe som resulterer i glukonsyre. Dette blir igjen oksidert til 2-ketoglukonisk.
Sistnevnte akkumuleres eller brytes ned til to molekyler av pyruvinsyre. Dette systemet krever nærvær av oksygen eller noen uorganisk forbindelse som den endelige elektronakseptoren..
Produksjonen av syrer på denne ruten er svakere enn den som oppnås ved gjæringsveien.
For at gjæringen av glukose skal skje på en av de tilgjengelige rutene, må den først fosforyleres og bli glukose-6-fosfat.
Glukosefermentering kan ta flere ruter, den viktigste er Embden-Meyerhof-Parnas-ruten, men de kan også ta Entner-Doudoroff-ruten, eller Warburg-Dickens-heksosemonofosfatveien, også kjent som nedbrytningen av pentoser.
Den valgte ruten vil avhenge av det enzymatiske systemet som mikroorganismen har..
I gjæringen av glukose via Embden-Meyerhof-Parnas-banen, er den delt inn i to triomolekyler, for deretter å bli nedbrutt til forskjellige karbonforbindelser, til den når dannelsen av glyseraldehyd-3-fosfat. Derfra stammer et mellomstoff, som er pyruvinsyre..
Derfra vil forskjellige typer blandede syrer bli dannet som kan variere fra art til art..
Dette systemet oppstår i fravær av oksygen og krever en organisk forbindelse som den endelige elektronakseptoren..
Ved gjæring av glukose via Entner-Doudoroff-banen blir glukose 6-fosfat glukono-ᵼ-lakton-6-fosfat og derfra oksyderes det til 6-fosfoglukonat og 2-keto-3-deoksy-6- fosfoglukonat, til til slutt danner pyruvinsyre. Denne veien trenger oksygen for at glykolyse skal oppstå.
Denne ruten er en hybrid av de forrige 2. Det begynner på samme måte som Entner-Doudoroff-banen, men senere dannes glyseraldehyd-3-fosfat som en forløper for pyruvinsyre, slik det skjer i Embden-Meyerhof-Parnas-banen..
Veie:
2 g pepton
5 g natriumklorid
10 g D-glukose (eller karbohydratet som skal tilberedes)
0,03 g bromtymolblått
3 gr agar
0,30 g dikaliumfosfat
1 liter destillert vann.
Bland alle forbindelsene unntatt karbohydratet og oppløs i 1 liter destillert vann. Varm opp og rist til den er helt oppløst.
Etter avkjøling til 50 ° C, tilsett 100 ml 10% glukose (filtrert).
Fordel 5 ml OF-medium aseptisk i reagensglass med bomullsdeksel og autoklav ved 121 ° C, trykk 15 kg i 15 minutter.
La stivne i vertikal posisjon.
Mediumets pH bør være 7,1. Fargen på det tilberedte mediet er grønt.
Oppbevares i kjøleskap.
OF-mediet er et spesielt medium for å bestemme den metabolske oppførselen til en mikroorganisme mot et karbohydrat. Spesielt for de som danner lite, svakt eller ingen syrer.
For hver mikroorganisme er det nødvendig med 2 OF-rør, begge må inokuleres med mikroorganismen som skal studeres. Kolonien tas med et rett håndtak, og det punkteres i midten av røret uten å komme til bunnen; flere punkteringer kan gjøres, så lenge det ikke er interesse for å observere motilitet.
Et lag sterilt flytende vaselin eller sterilt smeltet parafin (ca. 1 til 2 ml) tilsettes et av rørene og er merket med bokstaven "F". Det andre røret er original og er merket med bokstaven "O". Begge rørene inkuberes ved 35 ° C og observeres daglig i opptil 3 til 4 dager..
Tabell: Klassifisering av mikroorganismer i henhold til deres oppførsel i åpne (oksidative) og lukkede (gjærende) AV rør
Gassen observeres ved dannelse av bobler eller fortrengning av agaren.
Det skal bemerkes at en organisme som bare oksyderer glukose men ikke gjærer den, ikke vil være i stand til å gjære andre karbohydrater heller, i alle fall vil den bare oksidere den. Derfor, i denne situasjonen, vil det forseglede røret for studier av andre karbohydrater bli utelatt..
I tillegg kan motilitet sees i OF-mediet.
Positiv motilitet: vekst som ikke er begrenset til inokulasjonssonen. Det vokser mot sidene av røret.
Negativ motilitet: vekst bare i det første inokulatet.
Følgende stammer kan brukes som kvalitetskontroller: Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa Y Moraxella sp. De forventede resultatene er:
-Noen mikroorganismer kan ikke vokse i OF-medium. I disse tilfellene gjentas testen, men 2% serum eller 0,1% gjærekstrakt tilsettes mediet..
-Oksidasjonsreaksjoner blir ofte bare observert nær overflaten, og resten av mediet kan forbli grønt, på samme måte som det blir sett på som positivt.
Ingen har kommentert denne artikkelen ennå.