De safranin Det er et meriquinoidfargestoff, oppkalt etter å ha i sin kjemiske struktur 2 benzenoidringer og 2 quinoidringer, sistnevnte er de som gir den røde fargen.
Det kalles også dimetylsafranin eller basisk rødt 2 i sin korte form, siden dets vitenskapelige navn er 3,7-diamino-2,8-dimetyl-5-fenyl-fenaziniumklordimetylsafranin og den kjemiske formelen er CtjueH19N4 Cl.
Det er en variant som kalles trimetyl-safranin, men det er ingen signifikant forskjell mellom de to stoffene.
Safranin er et monokromatisk fargestoff, og avhengig av egenskapene til den kjemiske formelen, er det et positivt ladet stoff. Derfor har den en affinitet for negativt ladede strukturer. Disse strukturene vil være farget rødt.
Denne egenskapen gir det anvendelighet i mange histologiske teknikker for å plette forskjellige cellulære strukturer, både i eukaryote og prokaryote organismer..
Safranin brukes som kontrastfargestoff i viktige og velkjente teknikker for rutinemessig bruk i bakteriologi. Disse teknikkene er: Gram-Hucker-flekken, Schaeffer Fulton-flekken for sporer eller flekker av bakteriekapsler, blant andre..
Artikkelindeks
Fargen på safran (et krydder hentet fra stigmaene til blomsten av Crocus sativus) var inspirasjonen til å gi navnet denne fargen. Fra begrepet safran kommer navnet safranin. Dette skyldes den store likheten mellom fargen på safran og fargen som fargestoffet gir..
Safranin oppnås som krystaller eller i pulver, begge presentasjoner er løselige i vann. Safraninfargestoffet er luktfritt. Flekker strukturer rødt. Strukturene som tiltrekker seg safraninfargestoff kalles safranofiler..
Strukturelt er safranin kompleks, den har to benzenoidringer i endene, og i midten er de to quinoidringene der N-kationen er funnet.+. Sentrum av strukturen er systemet som har ansvaret for å gi fargen. På grunn av denne karakteristikken klassifiseres dette fargestoffet i kategori II..
Safranin brukes til å plette forskjellige strukturer. Spesielt fremhever Kulchitsky-celler som er tilstede i mage-tarmkanalen, også kalt enterokromaffinceller.
Den er i stand til å farge mikroorganismer som tilhører familien Rickettsiaceae. På samme måte brukes den i forskjellige teknikker, for eksempel Koster-metoden, en modifisert brukt for farging av bakterier av slekten Brucella.
På den annen side brukes safranin i Schaeffer Fulton-sporefargingsteknikken og i Gram-Hucker-farging. I begge teknikkene fungerer safranin som et kontrastfargestoff.
I den første tar sporene fargen på malakittgrønt, og resten av strukturene er røde av safranin. I det andre mister de gramnegative bakteriene fargen på den fiolette krystall i misfargingstrinnet, derfor er safranin den som flekker de gramnegative bakteriene rødt.
I tillegg brukes safranin i bakteriologi for å forberede Brucella agar media med en 1: 5000 fortynning av safranin. Dette mediet tjener til å skille arten Brucella suis av resten av arten. Brucella melitensis Y Brucella abortus de vokser i dette miljøet men B. suis er hemmet.
I det agroindustrielle området har safranin blitt brukt med 2,25% og fortynnet 1:10 for å beise stengelprøver av sukkerrørplanten..
Denne planten blir ofte påvirket av bakteriene Leifsonia xyli subsp. xyli, som skader xylem av planten. De fargede stilkene blir evaluert for å bestemme funksjonen til xylemkarene..
Et blod- eller vevsutstryk plasseres i en bufferoppløsning (fosfatbuffer pH 7,6). Den får tørke spontant og deretter dekket med metylenblått i 3 minutter og motfarget med safranin. Rickettsiae er blått i kontrast til den røde bakgrunnen.
Et smøre lages og flammes i tenneren for fiksering. Deretter dekkes det med en blanding av 2 deler vandig safranin mettet med 3 deler 1 mol / L KOH-oppløsning i 1 minutt. Den vaskes med destillert vann og motfarges med 1% karbolisk metylenblått..
Hvis prøven inneholder bakterier av slekten Brucella disse vises oransje på en blå bakgrunn.
En blanding av bakteriesuspensjon er laget med India-blekk og safranin tilsettes den. Under mikroskopet vil en rødlig glorie bli observert rundt hver bakteriekapsel med svart bakgrunn..
En smøre lages med bakteriesuspensjonen. Så er den festet til varme. Det er dekket med 5% malakittgrønt, ofte flammende til røyk slippes ut. Prosessen gjentas i 6-10 minutter. Til slutt vaskes det med vann og motfarges med 0,5% safranin i 30 sekunder. Baciller flekker rødt og sporer grønne.
En utstrykning er laget med bakteriesuspensjon, og den er fiksert til varme. Dekk lysbildet med krystallfiolett i 1 minutt. Deretter plasseres lugol som en mordant løsning i 1 minutt. Deretter blekes det med acetonalkohol og til slutt motfarges med safranin i 30 sekunder..
Grampositive bakterier flekker blålilla og gramnegative bakterier røde.
Noen laboratorier har sluttet å bruke Gram-Hucker-teknikken for å vedta den modifiserte Gram-Kopeloff-teknikken. I sistnevnte erstattes safranin med grunnleggende fuchsin. Dette er fordi safranin svakt flekker arter av slektene Legionella, Campylobacter Y Brucella.
Vevssnitt fra mage-tarmkanalen er farget med sølvklorid. Det blir deretter avfarget med natriumtiosulfat og til slutt motfarget med safranin.
Kulchitsky-celler er preget av tilstedeværelsen av svartbrune granulater..
Fordi safranin har en positiv ladning, binder det seg veldig godt til karboksyl- og sulfatgruppene av glykosaminoglykaner. Dette er en del av proteoglykanene som utgjør ledbrusk. I denne forstand er det mulig å identifisere om det er tap av brusk når det farges med safranin O..
Tapet av bruskvev kan måles ved hjelp av Mankin-skalaen eller også kalt slitasjegikt..
Teknikken er forklart nedenfor: den histologiske seksjonen senkes ned i et brett med Weigerts jernhematoksylinoppløsning, føres deretter gjennom sur alkohol og vaskes med vann.
Fortsett fargeleggingsprosessen ved å senke lysbildet i raskt grønt, det vaskes med eddiksyre og nå senkes det ned i safranin O. For å fullføre prosessen dehydreres den ved bruk av alkoholer i forskjellige konsentrasjoner i stigende rekkefølge. Det siste trinnet krever xylen eller xylol for at prøven skal avklares.
Lysbildene er betinget med Canada balsam eller lignende som skal observeres under et mikroskop..
Med denne teknikken farges kjernene sorte, beingrønne og brusk der proteoglykanene er funnet røde.
Pérez et al. I 2003 foreslo en enkel og billig teknikk for å fargelegge makroalger. Prøvene blir fremstilt i parafinhistologiske seksjoner. Seksjonene er fiksert med 1% glyserin, slik at de tørker helt. Den plasseres deretter i xylol for å fjerne parafinen.
Seksjonen blir rehydrert ved å føre den gjennom en serie skuffer som inneholder etanol i forskjellige grader av konsentrasjon (synkende rekkefølge), i 2 minutter på hver..
Deretter farges den i 5 minutter med en 3: 1 blanding av 1% safranin med 1% toluidinblått, begge fremstilt med 50% etanol. Tre dråper pikrinsyre tilsettes til blandingen, som fungerer som en mordant..
Deretter blir de dehydrert ved å gå gjennom alkoholbrettene igjen, men denne gangen på stigende måte. Til slutt skylles det med xylol, og prøven tilberedes med Canada balsam for å bli observert..
Heldigvis er safranin et fargestoff som ikke utgjør noen fare for de som håndterer det. Det er et ufarlig fargestoff, det er ikke kreftfremkallende og det er ikke brannfarlig..
Direkte kontakt med huden eller slimhinnene kan forårsake lett rødhet i området, uten store komplikasjoner. For dette anbefales det å vaske det berørte området med rikelig med vann.
Ingen har kommentert denne artikkelen ennå.