BHI agarfundament, tilberedning og bruk

778
Jonah Lester

De BHI agar Brain Heart Infusion Agar er et solid næringsrikt kulturmedium. På spansk refererer vi til det som hjerneinfusjonsagar. Det er et ikke-selektivt dyrkningsmedium, som betyr at alle typer Gram-positive og Gram-negative bakterier kan utvikle seg, i tillegg til noe gjær og filamentøse sopp..

Den består av en infusjon av hjerne og hjerte av biff, peptisk hydrolysat fra dyrevev, bukspyttkjertelhydrolysat av kasein, natriumklorid, glukose, dinatriumfosfat og agar..

BHI-plater. Kilde: Foto tatt av forfatteren MSc. Marielsa gil.

Det skal bemerkes at BHI-agar er et av de mest brukte kulturmediene i bakteriologilaboratorier. Kan brukes uten kosttilskudd som primær kultur, subkultur av kolonier oppnådd på andre selektive medier eller for vedlikehold av stammer i laboratoriet.

På den annen side er det et ideelt medium å bli brukt som en base ved fremstilling av berikede medier, som blodagar og sjokoladeagar. Begge er ideelle for å isolere krevende mikroorganismer fra et ernæringsmessig synspunkt. Imidlertid bør det bemerkes at det ikke inneholder egnet glukose fordi det inneholder glukose..

På samme måte kan BHI-agar brukes til fremstilling av spesielle medier for isolering av vanskelige å dyrke patogene mikroorganismer i vanlige medier, inkludert: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae og Histoplasma capsulatum.

Med antibiotikatilsetningsstoffet blir BHI-agar et selektivt medium for isolering av sopp.

Artikkelindeks

  • 1 Begrunnelse
  • 2 Klargjøring
    • 2.1 Kiler
    • 2.2 Plater
    • 2.3 Klargjøring av blodagar
  • 3 bruksområder
    • 3.1 Bruk uten kosttilskudd
    • 3.2 Som basisagar for fremstilling av andre medier
  • 4 Kvalitetskontroll
  • 5 Referanser

Basis

Det er et næringsrikt kulturmedium å isolere moderat krevende mikroorganismer, og berikelsen kan økes med tilsetning av blod og andre kosttilskudd..

Det er et ikke-selektivt dyrkningsmedium, derfor tillater det vekst av de fleste Gram-positive og Gram-negative bakteriene, samt noen sopp. Imidlertid kan det bli selektivt med tilsetning av antibiotika..

Mediet inneholder biff hjerne- og hjerteinfusjon, peptisk hydrolysat fra dyrevev og kaseinhydrolysat i bukspyttkjertelen; alle disse forbindelsene fungerer som kilder til vitaminer, aminosyrer, nitrogen og karbon.

Glukose er et karbohydrat som gir energi til mikroorganismer når de har gjæret det. I mellomtiden opprettholder natriumklorid og dinatriumfosfat osmotisk balanse og gir en pH nær nøytralitet. Til slutt gir agaren solid konsistens til mediet.

Forberedelse

Vei 52 gram av det dehydratiserte mediet og oppløs det i en liter destillert vann. Ta blandingen til en varmekilde til kokepunkt, rør ofte under oppløsningen..

BHI agarplater eller kiler kan tilberedes uten tilsetningsstoffer.

Kiler

For tilberedning av kiler, server tilberedningen til halvparten av hvert rør er fylt, dekk til og steriliser i en autoklav ved 121 ° C i 15 minutter, og la den ligge på en base til de stivner. Oppbevar senere i kjøleskapet til bruk.

BHI kiler for bakterioteca. Kilde: Foto tatt av forfatteren MSc. Marielsa gil.

Tallerkener

Den oppløste blanding autoklaveres ved 121 ° C i 15 minutter, når den lar den avkjøles til 50 ° C, og 20 ml av mediet serveres i sterile petriskåler. De får stivne, blir invertert og lagret i kjøleskapet til bruk. La platene komme til romtemperatur før såing.

Mediumets pH må forbli på 7,4 ± 0,2.

Uforberedt medium er beige i fargen og tilberedt er lysegult i fargen.

Klargjøring av blodagar

Etter sterilisering av mediet, avkjøl til en temperatur på omtrent 45 til 50 ° C, tilsett deretter blodet (50 ml), bland forsiktig for å homogenisere og server aseptisk 20 ml i hver petriskål. Hvis det dannes bobler på platen, må den lettere flammen raskt føres over boblene for å eliminere dem.

På samme måte kan spesielle medier fremstilles ved å tilsette de tilsvarende tilsetningsstoffene når blandingen når en temperatur på 45 til 50 ° C..

Midten er kirsebærrød.

applikasjoner

Bruk uten kosttilskudd

BHI-agar uten tilsetningsstoffer er nyttig som en primær kultur og for såing av rene stammer av lave eller middels krevende mikroorganismer for deres påfølgende identifikasjon..

Siden det er et lysfarget medium, er det ideelt for å observere pigmenter, og siden det ikke inneholder forstyrrende stoffer, kan noen biokjemiske tester, som oksidase og katalase, utføres på det, eller andre biokjemiske tester kan monteres fra kolonier fra denne agaren.

Likeledes brukes BHI-agarkiler mye for vedlikehold av stammer i en viss tid i laboratoriet (bacterioteca).

De overflatesådde plater eller kiler med bakteriestammer inkuberes ved 37 ° C i 24 til 48 timer. Mens det er sopp, vil temperaturen og inkubasjonstiden avhenge av typen sopp det søkes etter..

Som basisagar for utarbeidelse av andre medier

Med denne basen kan du forberede berikede og selektive medier.

Beriket

Hovedfunksjonen er å tjene som grunnlag i utarbeidelsen av blodagar for rutinemessig bruk i mikrobiologilaboratorier. Spesielt bidrar BHI-basen til isolering av stammer av Streptococcus sp. Imidlertid har den ulempen at den ikke er egnet for observasjon av hemolysemønstre fordi den inneholder glukose..

Det brukes også til fremstilling av kanin eller hesteblodagar for isolering av Haemophilus sp. For bedre resultater kan et tilsettingstilskudd (IsoVitaleX) tilsettes.

Hvis prøvene kommer fra luftveiene til agaren, kan bacitracin tilsettes for å hemme den medfølgende floraen og øke sannsynligheten for utvinning av stammene av Haemophilus sp.

På den annen side kan blodagar (lam eller menneske) med cystintelluritt tilberedes for å isolere Corynebacterium diphtheriae. På samme måte er det nyttig å tilberede kaninblodagar, med tilsetning av cystin og glukose for isolering av Francisella tularensis.

Blodagarplatene sås ved utmattelse og de inkuberes ved 35-37 ° C i 24-48 timer i mikroaerofilisitet (5-10% COto).

Selektiv

Dette mediet med tilsetning av antibiotika kan erstatte Sabouraud agar for isolering av sopp..

Kombinasjonen av BHI-agar med kloramfenikol - gentamicin eller penicillin -, streptomycin og hesteblod er ideell for isolering av Histoplasma capsulatum.

Avhengig av mikroorganismen som skal isoleres, anbefales inkubasjon ved 35-37 ° C eller ved romtemperatur i aerobiose. Noen ganger er inkubasjon nødvendig i begge temperaturområder, ved hjelp av 2 plater for dette..

Noen sopper som Trichophyton mentagrophytes skal inkuberes ved romtemperatur i opptil 7 dager.

QA

Fra hver batch klargjort, anbefales det å ruge 1 plate eller kile ved 37 ° C i 24 timer og kontrollere at det ikke er vekst; spesielt viktig når du forbereder blodagar, da det er et lett forurenset medium.

På den annen side kan kvaliteten på mediet evalueres ved å inokulere kjente eller sertifiserte standardstammer og observere deres utvikling..

I denne forstand å evaluere BHI-agar uten tilsetningsstoffer, stammer av Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 eller Candida albicans ATCC 10231. Inkuber ved 37 ° C i aerobiose i 24 til 48 timer. Det forventes tilfredsstillende vekst i alle tilfeller.

For å evaluere blodagarplater, stammer av  Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 eller Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533.

Bakteriestammer inkuberes ved 37 ° C i mikroaerofilisitet i 24 timer, mens soppen inkuberes ved romtemperatur i et fuktig kammer i opptil 7 dager. Det forventes tilfredsstillende vekst i alle tilfeller.

Referanser

  1. Britannia Laboratories. Hjernens hjerteinfusjonsagar. 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com.
  2. BD Laboratories. Brain Heart Infusion (BHI) Agar. 2013. Tilgjengelig på: bd.com.
  3. Laboratorios Difco Francisco Soria Melguizo, S.A. Hjernens hjerteinfusjonsagar. 2009.
  4. Neogen-laboratoriet. Hjernens hjerteinfusjonsagar. Tilgjengelig på: foodsafety.neogen.com
  5. Gil M. Blood agar: foundation, bruksområder og preparering. 2018. Tilgjengelig på: lifeder.com.
  6. Wikipedia-bidragsytere. Hjernen hjerteinfusjon. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 19. september 2018, 03:58 UTC. Tilgjengelig på: wikipedia.org. Tilgang 2. mars 2019.
  7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12. utg. Redaksjonell Panamericana S.A. Argentina.

Ingen har kommentert denne artikkelen ennå.