De galle esculin agar Det er et selektivt og differensielt, solid kulturmedium. Den brukes som en diagnostisk test for å bestemme evnen til en viss mikroorganisme å vokse i et medium som inneholder galle og også bryte ned glukosid esculin til esculetin og glukose..
Denne diagnostiske testen brukes til å skille arter av slekten Streptococcus som tilhører gruppe D (galle esculin positiv), fra andre grupper av Streptococcus som reagerer negativt på denne testen..
Det skal bemerkes at noen streptokokker fra viridans-gruppen kan hydrolysere esculin, men ikke er i stand til å vokse i nærvær av galle i en konsentrasjon på 40%, derfor er reaksjonen for denne gruppen negativ i dette mediet.
På den annen side er galle esculin medium også nyttig for diagnosen Listeria monocytogenes eller arter av Aerococcus sp, siden disse mikroorganismene er galle esculin positive.
Esculin galle agar består av pepton, kjøtt ekstrakt, okse galle, esculin, jern citrat, agar og destillert vann. Noen kommersielle hus inkluderer natriumazid i sammensetningen av mediet.
Mediet kan tilberedes i laboratoriet hvis du har alle forbindelsene separat, eller det kan fremstilles fra det kommersielle dehydratiserte mediet..
Artikkelindeks
Galle-esculin-mediet inneholder peptoner og kjøttekstrakt, begge forbindelsene gir de nødvendige næringsstoffene for vekst av mikroorganismer.
Den inneholder også esculin; Denne forbindelsen er et glukosid dannet ved foreningen av et enkelt monosakkarid (glukose) med en forbindelse kalt 6,7-dihydroksykumarin eller esculetin (aglukon), bundet av en acetal- eller glukosidbinding.
Testen er basert på å vise om bakteriene er i stand til å hydrolysere esculin. Hvis dette skjer, brytes esculin ned i esculetin og glukose. Esculetina reagerer med jernet som er tilstede i mediet og danner en mørkebrun, nesten svart forbindelse.
Dette betyr at jerncitrat fungerer som en reaksjonsutvikler. Denne karakteristikken gjør galle esculin agar til et differensialmedium..
For sin del er galle en hemmer som forhindrer veksten av noen mikroorganismer, derfor må bakteriene, før de splitter esculin, kunne vokse i nærvær av galle. Derfor betraktes dette mediet som selektivt.
Bakteriene som kan utvikle seg i dette miljøet er hovedsakelig de som lever i tarmmiljøet.
I denne forstand tilfører noen kommersielle selskaper natriumazid til mediet for ytterligere å hemme veksten av enteriske gramnegative basiller, og øke selektiviteten til mediet for vekst av Streptococcus..
Til slutt gir agaren den faste konsistensen til mediet, og vannet er løsningsmidlet til forbindelsene..
Veie:
5 g peptoner
3 g kjøttekstrakt
40 g biffgalle
1 g esculin
0,5 g jerncitrat
15 g agar
1000 ml destillert vann
Ved tilsetning av natriumazid, veier 0,25 g / liter og tilsett blandingen.
Oppløs komponentene i liter destillert vann, varme opp til forbindelsene er fullstendig oppløst. Fordel 5 ml i 16 x 125 mm prøverør med skruehett. Autoklav ved 121 ° C, 15 pounds trykk i 15 minutter.
Fjern fra autoklaven og vipp rørene på en støtte, slik at agaren stivner i et bredt fløytenebb.
Oppbevares i kjøleskap til bruk. Ta med romtemperatur før såing.
Agarplater med galle esculin kan også fremstilles; i dette tilfellet autoklaveres hele blandingen i en kolbe og fordeles deretter i sterile petriskåler. De får stivne og oppbevares i kjøleskapet..
Mediumets pH må være 6,6 ± 0,2.
Vei mengden spesifisert av innsatsen. Dette kan variere fra et forretningshus til et annet. Fortsett deretter med samme fremgangsmåte som forklart ovenfor.
Mediumets pH bør være 6,6 ± 0,2. Fargen på det dehydratiserte mediet er lys beige og det tilberedte mediet er mørkt gult.
Galleeskulinmediet brukes hovedsakelig til å skille gruppe D Streptococcus (galle esculin-positiv), fra resten av Streptococcus-gruppene (galle esculin-negativ).
Ved å kombinere den hypersaltede veksttesten for buljong med galdeskulintesten, kan du identifisere en spesiell gruppe av gruppe D Streptococcus kalt Enterococcus.
Denne spesielle gruppen av streptokokker tilhører gruppe D av nevnte slekt, og de er i stand til å hydrolysere esculin i nærvær av galle, det samme gjør resten av medlemmene i gruppe D, men de er også i stand til å utvikle seg i et hypersaltet medium klorid av 6,5% natrium), en egenskap som utgjør forskjellen.
Derfor kalles streptokokker som hydrolyserer esculin-galle, men som ikke vokser i hypsaltet buljong, ikke-enterokokker gruppe D-streptokokker..
Inokuler mediet fortrinnsvis fra en ren Todd-Hewitt 24-timers kjøttkraft.
Tilsett 2 dråper til overflaten av mediet med en Pasteur-pipette og spred det i mediet med en platinsløyfe..
Inkuber ved 35 ° C i 48 timer, mens inkubasjonstiden er oppfylt, kan den overvåkes for å se om det er en positiv reaksjon. Hvis reaksjonen på slutten av tiden forblir negativ, kan den inkuberes i opptil 72 timer.
Positiv reaksjon: Utseende av en mørkbrun, nesten svart farge i fløytenebbet (i tilfelle rørtesten) eller sverting av agaren rundt koloniene (i tilfelle platetesten).
Negativ reaksjon: ingen sverting av mediet eller svart vises i mindre enn halvparten av røret etter 72 timers inkubasjon. På den annen side bør bakterievekst i mediet uten utseende av den svarte fargen betraktes som en negativ test..
For å evaluere kvaliteten på mediet, en belastning på Enterococcus faecalis ATCC 29212 som en positiv kontroll og en streptokokokusstamme som ikke tilhører gruppe D som en negativ kontroll.
-Medier som ikke inneholder natriumazid tillater vekst av enteriske gramnegative stenger. Noen av dem kan sverte midten.
- Noen kommersielle hus legger til lav konsentrasjon av galle (10%), og av denne grunn kan noen Streptococcus som ikke tilhører gruppe D utvikle seg i mediet og hydrolysere esculin, noe som kan generere tolkningsfeil..
Ingen har kommentert denne artikkelen ennå.