Simmons Citrate Agar begrunnelse, tilberedning og bruk

2790
Jonah Lester
Simmons Citrate Agar begrunnelse, tilberedning og bruk

De Simmons Citrate Agar Det er et fast medium som brukes som en biokjemisk test for identifikasjon av mikroorganismer, spesielt gramnegative basiller. Det opprinnelige mediet ble opprettet av Koser i 1923.

Kosers citratmedium besto av en buljong som inneholder natriumfosfat, ammoniumfosfat, monokaliumfosfat, magnesiumsulfat og natriumcitrat..

A. Dehydrert Simmons Citrate Agar kommersielt medium B. Tilberedt Simmons Citrate Agar. Kilde: A. Foto tatt av MSc. Marielsa Gil B. Roto2esdios [CC BY-SA 3.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0)], fra Wikimedia Commons

Som man kan se, er den eneste kilden til karbon i mediet sitrat, og av nitrogen er ammoniumfosfat, uten proteiner og karbohydrater som en kilde til disse elementene, de er ofte til stede i andre medier..

Derfor kan bakteriene som inokuleres i dette mediet bare reprodusere hvis den er i stand til å ta opp karbon fra sitrat. Testen var positiv hvis det var uklarhet i mediet, men den hadde ulempen at ikke-spesifikk uklarhet kunne oppstå.

Dette problemet ble løst av Simmons ved å tilsette bromotymolblått og agar til Kosers opprinnelige formel. Selv om prinsippet er det samme, tolkes det annerledes.

Artikkelindeks

  • 1 Begrunnelse
    • 1.1 Såmodus
    • 1.2 Tolkning
  • 2 Klargjøring
  • 3 Bruk
  • 4 Avsluttende hensyn
    • 4.1 Inokulum
    • 4.2 Såing
    • 4.3 Fargeintensitet
  • 5 Referanser

Basis

Noen bakterier har evnen til å overleve i fravær av gjæring eller melkesyreproduksjon, og trenger å skaffe energi ved bruk av andre underlag. I denne testen er den eneste karbonkilden som tilbys, citrat.

Bakterier som er i stand til å overleve under disse forhold, metaboliserer raskt sitrat i en alternativ vei til den tradisjonelle, ved hjelp av trikarboksylsyresyklusen eller sitratgjæringssyklusen..

Katabolismen av citrat av bakterier involverer en enzymatisk mekanisme uten intervensjon av koenzym A. Dette enzymet er kjent under navnet citricase (citrate oxaloacetate lyase) eller citrate desmolase. Reaksjonen krever nærvær av et divalent kation, som i så fall tilføres av magnesium.

Reaksjonen genererer oksaloacetat og pyruvat, som deretter gir opphav til organiske syrer midt i en alkalisk pH dannet ved bruk av nitrogenkilden. Disse organiske syrene brukes som en karbonkilde som genererer karbonater og bikarbonater, og ytterligere alkaliserer miljøet..

Såmodus

Simmons citratmedium skal inokuleres lett i fiskehale ved hjelp av en rett løkke eller nål og inkuberes i 24 timer ved 35-37 ° C. Etter tiden observeres resultatene.

Såingen utføres bare på overflaten av agaren. Ikke punkter.

Tolkning

Hvis mediet forblir den opprinnelige fargen (grønt) og det ikke er noen synlig vekst, er testen negativ, men hvis mediet blir blått, indikerer det tilstedeværelsen av alkaliske produkter, som detekteres av pH-indikatoren. I dette tilfellet er testen positiv.

Sitrat (+) og (-). Kilde: MSc. Marielsa gil

Dette skjer fordi hvis bakterien bruker karbon fra sitratet, er den også i stand til å ta nitrogen fra ammoniumfosfatet som den frigjør ammoniakk med, og alkalisere mediet..

På den annen side, hvis vekst av bakteriene observeres i mediet, men det ikke er noen fargeendring, må testen også betraktes som positiv, siden hvis det er vekst, betyr det at bakteriene var i stand til å bruke sitrat som karbonkilde , selv om det ikke er noen endring i pH for øyeblikket (noen ganger kan det ta tid).

Hvis det er noen tvil i tolkningen av den endelige fargen, kan den sammenlignes med et uinokulert citratrør.

Forberedelse

Vei 24,2 g av det dehydratiserte mediet for en liter vann. Bland og la den hvile i ca. 5 minutter. Fullfør oppløsningen av mediet ved oppvarming i 1 eller to minutter, rist ofte.

Hell 4 ml i reagensglass og autoklaver ved 121 ° C i 15 minutter. Når du forlater autoklaven, skrå ved hjelp av en støtte på en slik måte at agaren stivner i form av et fløytenebb med liten blokk eller bunn og mer skrå.

Den endelige pH-verdien til sitratmediet er 6,9 (grønn farge). Dette mediet er veldig følsomt for endringer i pH.

Ved pH 6 eller lavere blir mediet gult. Denne fargen blir ikke observert i testen med bakterier.

Og ved pH 7,6 eller høyere endres mediet til en dyp preussisk blå farge..

Bruk

Simmons Citrate Agar brukes til identifisering av visse mikroorganismer, spesielt basillene som tilhører Enterobacteriaceae-familien og andre ikke-glukose-gjærende basiller.

Kilde: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. utg. Redaksjonell Panamericana S.A. Argentina.

Siste tanker

Simmons citrate medium er en veldig delikat test, da falske positive kan oppnås hvis visse feil blir gjort..

Forsiktigheten som må tas er følgende:

Inokulum

En veldig tykk eller belastet bakteriell inokulum bør ikke lages, da det kan føre til at en koppegul farge utvikler seg på plantestedet, uten å påvirke resten av mediet, men det kan føre til tro på at det er vekst. Det betyr ikke testpositivitet.

Likeledes kan et tykt inokulum generere en falsk positiv, fordi forhåndsdannede organiske forbindelser innenfor celleveggene til døende bakterier kan frigjøre nok karbon og nitrogen til å slå pH-indikatoren..

Derfor er det ideelle å så med nålen i stedet for platinahåndtaket, for å unngå å ta overflødig materiale.

Sådd

På den annen side, når batteriet av biokjemiske tester blir sådd for identifisering av den aktuelle mikroorganismen, er det viktig at citrat-testen er den første som inokuleres, for å unngå overføring av proteiner eller karbohydrater fra et annet medium. ..

Under denne omstendigheten er det mulig å oppnå falskt positivt, fordi noen av disse stoffene som introduseres ved en feiltakelse metaboliseres og vil føre til en endring i pH..

En annen måte å unngå overføring av stoffer er å brenne løkken godt og ta et nytt inokulum mellom en test og en annen..

Det må også utvises forsiktighet når du berører kolonien for å utføre inokulatet, siden det bør unngås å dra en del av agaren fra kulturen som bakteriene kommer fra, på grunn av det ovenfor forklarte.

I denne forstand anbefaler Matsen, Sherris og Branson å fortynne inokulatet i fysiologisk løsning før de inokulerer sitrattesten for å unngå overføring av andre karbonkilder.

Fargeintensitet

Det bør tas i betraktning at intensiteten til fargen som produseres når testen er positiv, kan variere i henhold til handelshuset.

I tillegg er det mikroorganismer som tester positive etter 24 timer, men det er andre stammer som krever 48 timer eller mer for å produsere en endring i pH..

Referanser

  1. Mac Faddin J. (2003). Biokjemiske tester for identifisering av bakterier av klinisk betydning. 3. utg. Redaksjonell Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12. utg. Redaksjonell Panamericana S.A. Argentina.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. utg. Redaksjonell Panamericana S.A. Argentina.
  4. BD Laboratories. BBL Simmons Citrate Agar Slants. 2015. Tilgjengelig på: bd.com
  5. Britannia Laboratories. Simmons Citrate Agar. 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com
  6. Valtek Diagnostic Laboratories. Simmons Citrate Agar. 2016. Tilgjengelig på: andinamedica.com.

Ingen har kommentert denne artikkelen ennå.