De Hektoen agar eller enterisk Hektoen agar er et solidt, selektivt og differensielt kulturmedium. Den ble opprettet ved Hektoen-instituttet av King og Metzger for isolering av enteropatogene bakterier av slektene Shigella og Salmonella..
Mediet er sammensatt av proteosepepton, gjærekstrakt, gallsalter, laktose, sukrose, salicin, natriumtiosulfat, natriumklorid, jerncitrat, ammoniumcitrat, bromotymolblått, surt fuchsin og agar. Denne formuleringen gjør det mulig å skille Shigella- og Salmonella-slekten fra resten av bakteriene som er i stand til å vokse i dette mediet..
Selv om det finnes andre medier med samme funksjon som Hektoen agar, har det en større fordel sammenlignet med andre medier, spesielt når du vil gjenopprette Shigella-arter..
Arten av begge kjønn gir alvorlige gastrointestinale problemer hos mennesker på grunn av inntak av forurenset mat; derfor er overføring fekal - oral. Derfor er bruken av Hektoen agar hovedsakelig indikert i mikrobiologisk analyse av avføring og matprøver..
Artikkelindeks
Hektoen agar inneholder peptoner og gjærekstrakt som kilde til næringsstoffer, og gir de essensielle elementene for mikrobiell utvikling.
Imidlertid har den også gallsalter som virker ved å hemme veksten av noen bakterier, spesielt gram-positive og noen gram-negative. Det er av denne grunn at det regnes som et selektivt medium.
På den annen side er Hektoen agar et differensialmedium. Denne egenskapen er tildelt av tilstedeværelsen av fermenterbare karbohydrater som laktose, sukrose og salisin, sammen med pH-indikatorsystemet, representert av bromotymolblått og surt fuchsin..
Alle bakterier som er i stand til å vokse på dette mediet som ikke tilhører slekten Salmonella og Shigella, vil utvikle laks eller oransje kolonier med unntak av slekten Proteus. Dette skyldes gjæringen av en eller flere av karbohydratene som er tilstede, som forsyrer mediet, noe som gjør at pH-indikatoren endres..
Slekten Shigella og Salmonella er på sin side ikke i stand til å gjære noen av karbohydratene som er tilstede, og bruker bare peptoner som energikilde som alkaliserer mediet og derfor er koloniene blågrønne..
Bakterier som er i stand til å danne hydrogensulfid (fargeløs gass) kan også skilles ut i dette mediet. Sodium thiosulfate fungerer som kilden til svovel mens jerncitrat er utviklingsmidlet. Begge forbindelsene muliggjør dannelsen av et svart bunnfall av jernsulfid som viser reaksjonen.
Det svarte bunnfallet i sentrum av kolonien med en gjennomsiktig glorie rundt gir et fiskeøyeutseende. Denne karakteristikken antyder tilstedeværelsen av slekten Salmonella.
Til slutt opprettholder natriumkloridet den osmotiske balansen, og agaren gir mediet fast konsistens..
Vei 76 g av det dehydratiserte mediet og oppløs det i en liter destillert vann. Rist blandingen kraftig og la den hvile i 10 til 15 minutter. Den kan varmes opp og kokes, noe som gir roterende bevegelser til den er helt oppløst. Dette mediet autoklaveres ikke.
Når mediet når en temperatur på omtrent 45 ° C, hell et volum på 20 ml direkte i sterile petriskåler..
Agaren får størkne. På den tiden er de klare til bruk. Det anbefales å bruke dem umiddelbart. Hvis dette ikke er mulig, lagres de i kjøleskapet til bruk..
Platene bør fjernes fra kjøleskapet på forhånd før såing for å bringe dem til romtemperatur.
Mediumets pH bør være 7,5 ± 0,2. Fargen på det dehydratiserte mediet er lilla og det tilberedte mediet er brungrønt.
Bruk av Hektoen agar anbefales for å søke etter bakterier av slekten Shigella og Salmonella i avføring og matprøver..
Muligheten for å isolere disse bakteriene økes betraktelig hvis prøven tidligere er beriket i spesielle buljonger, som selenittbuljong, cystinselenittbuljong, tetrakionatbuljong osv..
Inokulatet må være sterkt og såingen gjøres ved å strekke. Platene inkuberes ved 37 ° C i 24 til 48 timer i aerobiose.
Inkubasjon i 48 timer anbefales fordi kolonienes egenskaper er tydeligere for deres tolkning og differensiering på dette tidspunktet..
For å utføre kvalitetskontroll på dette mediet brukes sertifiserte bakteriestammer, for eksempel: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 og Shigella sonnei ATCC 25931.
De forventede resultatene er som følger: Salmonella typhimurium og Salmonella enteritidis de bør utvikle blågrønne kolonier med eller uten et svart senter. Mens Shigella-arten vil vokse som grønnblå kolonier.
Stammer av Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 og Staphylococcus aureus ATCC 25923.
I disse tilfellene er de observerte egenskapene følgende: E coli Y K. pneumoniae kolonier vil utvikle seg i denne middels laksefargen til oransje, med et bunnfall med samme farge rundt. Mens Proteus vil utvikle blågrønne kolonier med eller uten et svart senter..
Samtidig som S. aureus Y E. faecalis må hemmes, noen ganger E. faecalis klarer å vokse som veldig små, gule kolonier.
På den annen side, siden dette mediet ikke autoklaveres, er det viktig å evaluere steriliteten til mediet. Derfor bør en til to uinokulerte plater inkuberes fra 37 ° C i 24 timer i aerobiose fra hver forberedte batch..
Åpenbart forventes ingen vekst av noe slag på platen.
-Proteusarter kan utvikle seg i dette mediet, og egenskapene til deres kolonier kan forveksles med Salmonella- eller Shigella-arter. Av denne grunn må enhver mistenkelig koloni bekreftes med biokjemiske tester..
-Det er nødvendig å følge bruken av dette mediet med andre mindre selektive agarer, fordi hvis den etterspurte mikroorganismen finnes i lave konsentrasjoner, kan det hende den ikke utvikler seg i dette mediet..
-Ikke overopphet den under tilberedningen, da overdreven varme endrer sammensetningen av mediet.
-Laktosefermenterende Salmonella-kolonier kan virke uvanlig og kan gå ubemerket hen.
Ingen har kommentert denne artikkelen ennå.