De agar M.R.S. er et selektivt fast dyrkningsmedium, brukt til isolering og telling av melkesyrebakterier, spesielt av slekten Lactobacillus. Denne agaren ble opprettet i 1960 av Man, Rogosa og Sharpe, med samme navn, men på grunn av dens kompleksitet brukes ofte forkortelsen M.R.S..
Den består av proteosepepton, kjøttekstrakt, gjærekstrakt, glukose, sorbitanmonoleat, dikaliumfosfat, natriumacetat, ammoniumcitrat, magnesiumsulfat, mangansulfat og agar..
Denne sammensetningen tillater riktig utvikling av melkesyrebakterier fra kliniske prøver, som avføring, vaginal utflod, orale prøver og morsmelk, samt meieriprodukter og kjøttmat.
Det brukes ikke rutinemessig i kliniske laboratorier, fordi melkesyrebakterier sjelden er involvert i sykdomsprosesser. Imidlertid, innen matmikrobiologi, er bruken av M.R.S agar hyppigere..
På den annen side brukes dette mediet av noen forskningssentre som har som mål å studere melkesyrebakterier..
Artikkelindeks
Man, Rogosa og Sharpe agar har en ganske kompleks sammensetning. Ved å bryte ned funksjonen til hver av komponentene, kan grunnlaget forklares.
Proteinepepton, kjøttekstrakt, gjærekstrakt og glukose er næringsstoffer som gir kilden til karbon, nitrogen, vitaminer og mineraler som er nødvendige for bakterievekst. I tillegg er glukose den universelle energikilden som brukes i de fleste kulturmedier..
På den annen side, for å fremme veksten av melkesyrebakterier, er tilstedeværelsen av kofaktorer (kationer) som er essensielle i metabolismen av Lactobacillus og relaterte bakterier nødvendig; disse forbindelsene er saltene av natrium, magnesium og mangan.
På samme måte er sorbitanmonoleat eller polysorbat 80 en viktig kilde til fettsyrer da de absorberes som næringsstoffer..
I tillegg virker sorbitanmonoleat og ammoniumcitrat ved å hemme utviklingen av den medfølgende floraen, spesielt gramnegative bakterier, og gir den selektive karakteren til denne agaren..
Til slutt er agar-agar den som gir solid konsistens til mediet.
Det er andre varianter av Man Rogosa Sharpe agar; en av dem er supplert med cystein (M.R.S.c), veldig nyttig for isolering av bifidobakterier, blant andre mikroorganismer. På den annen side er det MRS-medium supplert med neomycin, paromomycin, nalidiksyre og litiumklorid, spesielt for selektiv telling av bifidobakterier i meieriprodukter..
Vei ut 68,25 gram av det dehydratiserte mediet og oppløs det i en liter destillert vann. La stå i 5 minutter. For å oppløse helt, vend til en varmekilde, rør ofte, og kok i 1 til 2 minutter. Steriliser i autoklav ved 121 ° C i 15 minutter.
Når du forlater autoklaven, la den stå i noen minutter og fordel den mens den fortsatt er varm i sterile petriskåler..
La platene stivne og invertere platene, bestill i platestativ og avkjøl til bruk. La platene komme til romtemperatur før bruk.
Mediumets pH bør være 6,4 ± 0,2. Noen kommersielle hus anbefaler pH mellom 5,5 og 5,9.
Det dehydratiserte mediet er beige og tilberedt er mørkt gult.
Både det dehydratiserte mediet og de tilberedte platene bør oppbevares ved 2 til 8 ° C..
M.R.S. De kan sås på overflaten (utmattelse eller med Drigalski-slikkepott). Det kan også såes etter dybde. Platene skal inkuberes ved 37 ° C i mikroaerofilisitet (4% Oto og 5-10% COto) i 24 til 72 timer.
Såmetoden velges i henhold til det forfulgte formålet (isolasjon eller telling).
Presumptive Lactobacillus-kolonier blir hvite i fargen og har et slimete eller kremaktig utseende på denne agaren. Senere må de identifiseres.
Til dette brukes overflatesåing. Prøvene som skal sås, krever en tidligere prosedyre.
Når det gjelder prøver av morsmelk, anbefales det å sentrifuger 1 ml av prøven ved 14 000 o / min i 10 minutter, for å fjerne fettlaget. 900 pl blir kastet, og i de resterende 100 ul suspenderes pelleten og helles på overflaten av M.R.S. Den skal deretter fordeles jevnt med en Drigalski-slikkepott..
Når det gjelder avføringsprøver, veies ett (1) gram avføring og homogeniseres i 9 ml 0,1% sterilt peptonvann, tilsvarende en fortynning på 1/10. Deretter blir seriefortynninger gjort, til en endelig fortynning på 10-4.
Til slutt blir 100 ul av de 10 fortynningene tatt-to, 10-3 og 10-4 og hver fortynning blir sådd på MRS-agar og fordeler seg jevnt med en Drigalski-slikkepott.
I dette tilfellet blir såingen gjort av dybden.
For morsmelkprøver tas 1 ml og plasseres i et sterilt konisk plastrør. MRS-agar tilsettes ved en omtrentlig temperatur på 40 ° C til et sluttvolum på 25 ml for å oppnå en homogen blanding. Deretter helles den i sterile petriskåler på en jevn måte og får hvile til polymerisering..
For avføringsprøver gjøres fortynninger, som tidligere beskrevet. Ta 1 ml av hver fortynning og legg den i sterile koniske plastrør. Smeltet MRS-agar tilsettes til et volum på 25 ml.
Blandingen fra hver fortynning helles jevnt i sterile petriskåler. Til slutt får den hvile til polymerisasjonen.
Hver dag får studien av melkesyrebakterier mer interesse; Forskere søker spesielt å lære om nye stammer og deres potensial som startgær for standardisering i produksjon av meieriprodukter, blant annet..
Slik sett har Alvarado et al. (2007) brukte M.R.S. å gjennomføre en studie der de isolerte, identifiserte og karakteriserte melkesyrebakterier som var til stede i en håndverker Andesrøkt venezuelansk ost.
I osten fant de tilstedeværelsen av bakterier av Lactococcus og Lactobacillus-slekten, og konkluderte med at blandingene av isolerte stammer er egnet som startstammer ved fremstilling av ost fra pasteurisert melk..
På den annen side er Sánchez et al. (2017) brukte M.R.S. å undersøke tilstedeværelsen av melkesyrebakterier i grisene i fordøyelseskanalen, for å bruke dem som native probiotika som øker produktiviteten til sunne smågriser.
Med dette mediet klarte de å isolere fire arter: Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae Y Pediococcus pentosaceus.
Likeledes Báez et al. (2019) brukte M.R.S. for å evaluere melkesyrebakterier (LAB) og bifidobakterier med probiotisk potensial i morsmelk og spedbarnsavføring.
De klarte å isolere 11 BAL og 3 Bifidobacteria sp i morsmelk, og 8 BAL og 2 Bifidobacteria sp. i avføring. Alle møtte visse parametere som beviser dem som bakterier med probiotisk aktivitet.
Forfatterne konkluderte med at både morsmelk og avføring fra utelukkende ammede spedbarn tjener som naturlige kilder til probiotiske bakterier..
For å evaluere kvaliteten på M.R.S. Kontrollstammer som:
Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia coli og Bacillus cereus.
De forventede resultatene er tilfredsstillende vekst for de første 6 bakteriene, mens E coli Y Bacillus cereus må være fullstendig hemmet.
Ingen har kommentert denne artikkelen ennå.