Næringsagarfundament, tilberedning og bruk

2395
Jonah Lester

De næringsagar Det er et solid ikke-selektivt og ikke-differensielt kulturmedium. I dette mediet vokser alle slags bakterier som ikke er krevende fra ernæringsmessig synspunkt..

Det er et enkelt medium, og til tross for navnet inneholder det en lavere ernæringsverdi sammenlignet med andre lignende medier, som Brain Heart Infusion Agar eller Trypticase Soy Agar..

Koloni stoler på næringsagar

Dens nytte i laboratoriet er veldig variert. Brukes hovedsakelig til artsubkultur, vedlikehold av stammer, kolonitelling, som grunnlag for å forberede blant annet blodagar..

På grunn av den lyse beige fargen, produserer pigmenter produsert av noen bakteriestammer, for eksempel det grønne pigmentet av Pseudomonas aeruginosa, det mursteinrøde pigmentet produsert av Serratia marcescens ved romtemperatur, det gylden gule pigmentet av Staphylococcus aureus, blant andre.

I tillegg er det et av de billigste voksende mediene som finnes på markedet..

Artikkelindeks

  • 1 Begrunnelse
  • 2 Sammensetning
  • 3 Klargjøring
  • 4 bruksområder
    • 4.1 Som grunnlag for tilberedning av blodagar
    • 4.2 Stimulere sporulering av spordannende bakterier
    • 4.3 Vedlikehold av stammen
    • 4.4 Kolonitelling
    • 4.5 Kjører diagnostiske tester
    • 4.6 Utvinning av mesofile aerober fra saltvann (strender)
  • 5 Referanser

Basis

Som allerede nevnt ovenfor, er det et veldig enkelt medium som er basert på å gi næringsstoffer til bakterievekst uten begrensning og uten komplekse reaksjoner å tolke..

Siden mediet er gjennomsiktig, er det ideelt for å telle kolonier ved hjelp av dybdeskuringsmetoden..

Sammensetning

Den består hovedsakelig av kjøttekstrakt eller gjærekstrakt, peptoner eller gelatin-bukspyttkjertelen, agar-agar, natriumklorid og destillert vann..

Kjøtt eller gjærekstrakt og peptonene representerer de essensielle kildene til karbon og mineraler (nitrogen, fosfor og svovel), som vil bli brukt av bakterier som kilde til energi og vekstfaktorer..

Likeledes er agar-agar basen til alle faste kulturmedier, som kommer til å erstatte gelatin, som var den første baseforbindelsen som ble brukt av Robert Koch for å gi solid konsistens til sine medier..

Agar er et polysakkarid sammensatt av galaktose, galaktomannan, agarose og agaropektin. Stiller inn ved 40 ° C og smelter nær 100 ° C.

På sin side gir natriumklorid mediet osmolariteten som er nødvendig for bakteriell utvikling.

Til slutt tjener vannet til å hydrere og oppløse de lyofiliserte forbindelsene. Destillert vann justert til nøytral pH bør brukes. Kranvann skal ikke brukes fordi det inneholder kalsium og magnesium som kan reagere med fosfater i mediet og danne uoppløselige salter..

Forberedelse

For en liter næringsagar må 31 g av det dehydratiserte mediet veies. Den plasseres i en kolbe og oppløses i en liter destillert vann. Etter 5 minutters stående, varm opp over en varmekilde og bland hele tiden til kokende i 1 eller 2 minutter..

Utarbeidelse av kulturmedium.

Kolben plasseres deretter i en autoklav og steriliseres ved 121 ° C i 20 minutter..

Sterilisering i autoklav

På slutten av tiden fjernes den fra autoklaven og serveres i sterile petriskåler ved hjelp av en laminær hette eller en Bunsen-brenner..

Hvis petriskålene er engangs (plast), må mediet distribueres når agaren har en temperatur på omtrent 50 ° C, for å forhindre at de blir deformert av overdreven varme.

La stivne og oppbevares på en omvendt plateholder og avkjøl ved 2-8 ° C til bruk.

Platene må herdes før de blir sådd. Næringsagarplater skal ikke brukes hvis de er forurenset eller dehydrert.

PH i det tilberedte mediet må justeres til 7,3 ± 0,2.

applikasjoner

Det er det enkleste dyrkningsmediet som brukes i mikrobiologilaboratoriet. Formuleringen er utmerket for vekst av ikke-krevende bakterier.

Dens viktigste bruksområder er forklart nedenfor:

Som grunnlag for tilberedning av blodagar

Dette mediet brukes noen ganger som en base for å forberede blodagar, men det er ikke den mest brukte basen..

Stimulere sporulering av spordannende bakterier

Dette kulturmediet er spesielt nyttig for å stimulere sporulering av sporedannende bakterier som f.eks Bacillus sp.

For å gjøre dette, en stamme av slekten Bacillus og ble inkubert i 24 timer ved 37 ° C i aerobiose. Når koloniene har vokst, blir platen utsatt for temperaturstress, det vil si at ovnens temperatur økes til 44 ° C og blir stående i ytterligere 24 timer eller plassert i kjøleskap i 24 timer.

På slutten av tiden lages kulturflekker og farges med Gram-flekk eller med Shaeffer-Fulton-sporeflekk. I dem vil basillene med endosporer (sporer inne i basillen) og exosporer (sporer utenfor basillen) bli observert..

Vedlikehold av stammen

Noen forskningslaboratorier eller universitetsundervisningsstøttelaboratorier krever å opprettholde levedyktige bakterier av klinisk betydning så lenge som mulig, for å bruke bakteriebanken (bacterioteca) til forskningsarbeid eller for utarbeidelse av undervisningspraksis, der studentene vil lære å manipulere og identifisere disse mikroorganismene.

Næringsagar, så vel som hjerneinfusjonsagar, kan brukes til dette formålet. Agaren tilberedes, helles i rør med et bakelittlokk og vippes på en base, på en slik måte at agaren stivner og danner en blokk i bunnen og en skråkant på overflaten (fløytenebb).

Hvert rør er merket med navnet på bakteriene som skal sås ut og datoen. Hver av bakteriene blir sådd på rammen og inkubert i 24 timer, når koloniene har vokst, blir rørene lagret ved romtemperatur.

Bakterioteca må fornyes fra 1 til 3 måneder for å unngå forurensning og dehydrering av mediet og i tillegg til at bakteriene dør.

Bare ikke-kresne bakterier kan opprettholdes på denne måten.

Kolonitelling

Selv om det er spesialiserte midler for å telle kolonier, for eksempel standardtallagar, kan næringsagar brukes til dette formålet, enten ved overflatesåing med en drigalski-spatel eller ved dybde. Av denne grunn er det veldig nyttig i mikrobiologisk analyse av mat og vann..

Kjører diagnostiske tester

Fordi det er et medium som ikke inneholder blod, eller noe annet tilsetningsstoff, er det ideelt for å ta kolonier dyrket på dette mediet for å utføre katalasetesten..

På grunn av sin lette farge er det også indikert å utføre oksidasetester direkte på et område av den frøede agaren uten forstyrrelser..

Gjenoppretting av mesofile aerober fra saltvann (strender)

Næringsagaren fremstilt med 10% sjøvann er nyttig for evaluering av mesofile aerober i strandvann..

På denne måten kan man forstå det virkelige nivået av forurensning som vannet har med disse mikroorganismer, siden resultatene i denne typen prøver overlappes når kulturmedier fremstilt på konvensjonell måte blir brukt..

Dette ble demonstrert av Cortez et al. i 2013 i et forskningsarbeid.

Dette kan forklares på grunn av den plutselige endringen som bakterier gjennomgår når de går fra et hypersaltet miljø til et salt med lite salt, derfor kommer mikroorganismer inn i en tilstand av sløvhet der de er levedyktige, men ikke dyrkbare..

Referanser

  1. "Næringsagar." Wikipedia, The Free Encyclopedia. 13. sep 2016, 20:33 UTC. 29. des 2018, 21:04 en.wikipedia.org
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12. utg. Argentina. Redaksjonell Panamericana S.A.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. (5. utg.). Argentina, redaksjonelt Panamericana S.A.
  4. Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Effekt av kulturmedier utarbeidet med sjøvann på helseindikatorer i marine farvann i spa i Chichiriviche, Falcón-staten, Venezuela. Rev Soc Ven Microbiol 2013; 33: 122-128
  5. Paredes V, Dias V, Silva de Almeida M og Cardoso M. Mikrobiologisk vannkvalitet for inseminerende doser, for svin.Cient.Agro.Amaz. 2013; 1 (2): 42-49.
  6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktisk klinisk mikrobiologi. University of Cadiz, 2. utgave. UCA Publications Service.

Ingen har kommentert denne artikkelen ennå.