De Thayer Martin agar er et svært næringsrikt og selektivt fast medium for isolering av Neisseria meningitidis og Neisseria gonorrhoeae; begge kjent som patogene eller klinisk viktige Neisserias.
En av de viktigste spesielle egenskapene til Thayer Martin Agar er det høye innholdet av kosttilskudd. Denne egenskapen er viktig, fordi Neisserias er svært krevende mikroorganismer fra ernæringsmessig synspunkt og derfor ikke vokser i vanlige medier..
På den annen side, siden disse mikroorganismene vanligvis finnes i ikke-sterile områder, er det nødvendig å tilsette inhibitorer som forhindrer veksten av den medfølgende floraen, uten å påvirke utviklingen av Neisseria-slekten..
Denne agaren består av GC-basagar, hemoglobin, ekstra kosttilskudd og et kompleks av hemmende stoffer (antibiotika og soppdrepende middel). Kommersielle hus selger hvert av kosttilskuddene separat.
Prøven som skal såes i dette mediet, vil avhenge av mikroorganismen det søkes. For å Neisseria gonorrhoeae ideelle prøver er vaginale og urinrørsekresjoner. Mens for Neisseria meningitidis de mest brukte prøvene er CSF, pharyngeal og nasopharyngeal exudates.
Artikkelindeks
Neisserias er mikroorganismer klassifisert som irriterende, og derfor er isolasjonen vanskelig. Av denne grunn er Thayer Martín et komplekst medium, og hver av komponentene oppfyller en funksjon som er forklart nedenfor:
GC-agar inneholder proteosepepton, maisstivelse, natriumklorid, dikaliumfosfat, monokaliumfosfat og agar-agar. Komponentene gir grunnleggende næringsstoffer for mikrobiell utvikling, nøytraliserer giftige fettsyrer, hjelper til med å opprettholde osmotisk balanse, definerer pH og gir medium konsistens..
Hemoglobin gir faktor V og X (henholdsvis nikotinamid-adenindinukleotid NAD og hemin). Av denne grunn vokser også Haemophilus-arter i dette mediet. Hemoglobin kan oppnås kommersielt i dehydrert form, eller ferskt defibrinert bovint blod kan tilsettes mediet..
På den annen side må et anrikningstilskudd også tilsettes Thayer-Martin-mediet, siden næringsstoffene som finnes i basagaren ikke er tilstrekkelige for kravene i Neisseria-slekten..
Det mest brukte anrikningstilskuddet kalles isovitalex. Den inneholder glutamin, adenin, NAD, kokarboksylase, guanin, jernnitrat, p-amino benzosyre, vitamin B12, tiamin og glukose. Alle disse forbindelsene er nødvendige for riktig utvikling av patogene Neisserias.
Siden det er et næringsrikt medium, må det brukes hemmere som forhindrer veksten av mikroorganismer i den vanlige floraen i området og dermed favoriserer isolasjonen av Neisseria-slekten..
Hemmerkomplekset består av vancomycin, colistin og nystatin. Vancomycin hemmer veksten av Gram-positive bakterier, colistin forhindrer veksten av Gram-negative bakterier som Pseudomonas og noen saprofytiske Neisserias, og nystatin virker på gjær som Candida albicans.
Imidlertid ble Thayer Martin Agar senere modifisert; endringene besto av tilsetning av trimetoprim, økning i mengden agar og tilsetning av ekstra glukose. Disse endringene forbedret utvinningen av arten av Neisseria gonorrhoeae.
Det skal bemerkes at trimetoprim hemmer veksten av slekten Proteus og dens påfølgende svermedannelse. I denne forstand er antibiotika de som gir Thayer Martin-mediet den selektive karakteren.
Vei ut 8,2 g dehydrert GC-medium og suspender i 100 ml. Bland og kok i 1 minutt med hyppig omrøring for å oppløses helt. Steriliser blandingen i en autoklav ved 121 ° C i 15 minutter.
Suspender 2 g dehydrert hemoglobin i 2 eller 3 ml varmt destillert vann til en jevn blanding er dannet. Tilsett mer vann litt etter litt for å få et volum på 100 ml. Suspensjonen må være homogen før sterilisering.
Steriliser i autoklav i 15 minutter.
Rekonstituer det kommersielle hetteglasset med fortynningsmidlet fra samme kommersielle selskap. Bland godt. Mengden fortynningsmiddel som skal brukes vil bli spesifisert i instruksjonene i settet..
Rekonstituer hetteglasset med fortynningsmidlet fra det kommersielle selskapet. Bland godt. Mengden fortynningsmiddel som skal brukes vil bli spesifisert i instruksjonene i settet..
For hver 100 ml GC-agar gjør du slik:
Når GC-agaren forlater autoklaven, la den avkjøles til en temperatur på omtrent 50 ° C og tilsett 2 ml av den tilberedte hemoglobinløsningen, 2 ml berikelsestilskudd (isobitalex eller britalex) og 2 ml inhiberingstilskudd. Bland og server i sterile petriskåler..
La det stivne og oppbevares i kjøleskapet til bruk.
Fargen på det tilberedte mediet er kirsebærrød. Den endelige pH i mediet er 7,2 ± 0,2
Vei ut 8,2 g dehydrert GC-medium og suspender i 100 ml. Tilsett 1 g agar-agar og tilsett 0,3 g glukose. Bland og kok i 1 minutt med hyppig omrøring for å oppløses helt. Steriliser blandingen i en autoklav ved 121 ° C i 15 minutter.
Forbered hemoglobin og berikelse supplement som beskrevet ovenfor.
Inhiberingstilskuddet som brukes er V.C.N.T (vancomycin, colistin, nystatin, trimetoprim).
Fortsett som beskrevet for den opprinnelige Thayer Martin-agaren.
Thayer Martin Agar skal få lov til å varme seg før prøvene blir stripete. Vanlige prøver er svelgpinnepinner, nesepinner, vaginal, urethral og / eller rektal utslipp og CSF..
Bruk ferske prøver og lag sterke inokulater på agaren. Prøvene blir sådd direkte ved materialutslipp og deretter uttømming som strekker seg på overflaten.
Platene inkuberes ved 35-37 ° C i 24 til 48 timer i en mikroaerofil krukke (5% COto). På slutten av inkubasjonstiden undersøkes platene for små kolonier, gråfarge og noen ganger slimete..
Utfør gram- og bekreftende biokjemiske tester på mistenkelige kolonier.
Følgende mikrobielle stammer kan brukes til å utføre kvalitetskontroll på Thayer Martin Agar.
Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 og Neisseria meningitidis ATCC 13090; det forventes tilfredsstillende utvikling i begge stammene.
Følgende stammer bør også inkluderes: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 og Candida albicans ATCC 10231. Hos dem alle forventes en total eller delvis inhibering i dette mediet..
-Det må tas i betraktning at bakterier som er resistente mot inhibitorene som brukes, kan vokse i mediet.
-Det er stammer av Neisseria gonorrhoeae som kan være følsomme for konsentrasjonen av vancomycin som brukes. Av denne grunn anbefales det å bruke sjokoladeagar supplert med isovitalex, men uten hemmere..
-Det er nystatinresistente gjærstammer som kan vokse i dette mediet og forstyrre isolasjonen av patogene Neisserias, spesielt gonokokker..
Ingen har kommentert denne artikkelen ennå.