Trypticasein soya buljong begrunnelse, forberedelse og bruksområder

586
David Holt

De tryptisk soyabuljong Det er et flytende dyrkningsmedium, svært næringsrikt og ikke-selektivt. På grunn av sin store allsidighet er det et av de mest brukte flytende kulturmediene i mikrobiologilaboratoriet..

Det er også kjent med navnet tryptisk soyabuljong eller kasein-soyedigerert buljong, hvis forkortelse er TSB for akronymet på engelsk. Tryptic am Buljong eller CST for forkortelsen på spansk. Bruken er veldig variert på grunn av sammensetningen. Den består av triptein, soyapepton, natriumklorid, dikaliumfosfat og glukose.

Trypticasein soya buljong sådd med en stamme av Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 hvor pigmentproduksjon observeres. Kilde: Foto tatt av forfatteren MSc. Marielsa gil.

Den er i stand til å reprodusere klinisk viktige patogene bakterier, inkludert de som er ernæringskrevende og anaerobe bakterier. Noen opportunistiske og forurensende sopper kan også utvikle seg i dette miljøet.

På grunn av den høye næringskraften har den høy følsomhet for å oppdage mikrobiell forurensning. Av den grunn ble den valgt av USDA Animal and Plant Health Inspection Service for mikrobiologisk analyse av vaksiner..

På samme måte oppfyller trypticasein soya buljong kravene til de forskjellige farmakopéene (europeisk EP, japansk JP og nordamerikansk USP) for den mikrobiologiske studien av produkter på industrielt nivå, som kosmetikk og mat..

På den annen side er det verdt å nevne at dette mediet til tross for dets store nytte er relativt billig, noe som gjør det rimelig for de fleste mikrobiologilaboratorier. Det er også veldig enkelt å tilberede.

Artikkelindeks

  • 1 Begrunnelse
  • 2 Klargjøring
    • 2.1 -Tripticasein soya buljong
    • 2.2-Varianter av trypticasein soya buljong
  • 3 Bruk
  • 4 Sådd
  • 5 Kvalitetskontroll
  • 6 Begrensninger
  • 7 Referanser

Basis

Triptein, pepton og glukose gir viktige ernæringsegenskaper for å gjøre det til et ideelt medium for rask mikrobiell vekst.

I omtrent 6 til 8 timers inkubasjon kan vekst allerede sees i de fleste mikroorganismer. Imidlertid er det langsomt voksende stammer som det kan ta dager å vokse..

Natriumklorid og dikaliumfosfat fungerer som henholdsvis osmotisk balanse og pH-regulator. Tilstedeværelsen av vekst fremgår av utseendet til uklarhet i mediet; hvis det ikke er noen vekst, forblir mediet gjennomsiktig.

På grunn av den lyse fargen er det mulig å observere produksjonen av pigmenter, slik som den som er vist på bildet i begynnelsen av artikkelen, som tilsvarer pigmentet produsert av Pseudomonas aeruginosa. 

Forberedelse

-Tryptikasein soya buljong

For å tilberede trypticase soya buljong, må 30 g av det dehydrerte kommersielle mediet veies i digital skala. Deretter oppløses den i en liter destillert vann i en kolbe.

Blandingen får hvile i 5 minutter, og deretter føres den til en varmekilde for å oppløse mediet. Den bør omrøres ofte mens den koker i 1 minutt.

Når den er oppløst, fordeles den i rør av passende størrelse etter behov. Rør med bomullsplugger eller med bakelittlokk kan brukes. Deretter steriliseres rørene med mediet i autoklaven ved 121 ° C i 15 minutter..

Mediumets pH må forbli på 7,3 ± 0,2

Det skal bemerkes at fargen på det dehydratiserte dyrkningsmediet er lysebeige og bør lagres mellom 10 og 35 ° C, på et tørt sted. Mens den tilberedte buljongen er lys gulfarget og bør oppbevares i kjøleskap (2 til 8 ° C).

-Trypticasein soya buljong varianter

Modifisert trypticasein soya buljong kan tilberedes ved å tilsette gallsalt og novobiocin for å gjøre den selektiv for isolering av E coli. Et annet alternativ for samme formål er å tilberede trypticase soyabuljong supplert med vancomycin, cefixim og telluritt (2,5 µg / ml)..

På den annen side kan mer glukose (0,25%) tilsettes til tryptisk soyabuljong når målet er å stimulere dannelsen av biofilm..

Bruk

Det er næringsrikt nok til å tillate vekst av kresne eller kresne bakterier som Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp og Brucella sp, ikke nødvendig å supplere med blod eller serum.

På samme måte kan noen sopp utvikle seg i denne buljongen, som f.eks Candida albicans-kompleks, Aspergillus sp og Histoplasma capsulatum.

Videre er dette mediet under anaerobe forhold ideelt for å gjenvinne bakterier som tilhører slekten Clostridium, så vel som ikke-sporulerte anaerobe bakterier av klinisk betydning..

Hvis 6,5% natriumklorid tilsettes, kan det brukes til vekst av Enterococcus og annen gruppe D Streptococcus..

På forskningsnivå har det vært veldig nyttig i forskjellige protokoller, spesielt i studiet av biofilm eller biofilmdannende bakterier. Det brukes også til å forberede 0,5% Mac Farland-bakteriesuspensjonen som er nødvendig for å utføre antibiogrammet ved Kirby og Bauer-metoden..

I dette tilfellet blir 3 til 5 kolonier med lignende utseende tatt og emulgert i 4-5 ml trypticasein soya buljong. Den inkuberes deretter i 2 til 6 timer ved 35-37 ° C og justeres deretter til ønsket konsentrasjon ved bruk av sterilt saltvann. Trypticasein soya buljong bør ikke brukes fra 18 til 24 timer med inkubasjon.

Sådd

Prøven kan sås direkte eller rene kolonier hentet fra selektive medier kan subkultureres. Inokulatet skal være lite for ikke å skyne mediet før inkubasjon.

Normalt inkuberes den ved 37 ° C i aerobiose i 24 timer, men disse forholdene kan variere avhengig av hvilken mikroorganisme som søkes. Det kan også inkuberes under anaerobe forhold ved 37 ° C i flere dager om nødvendig. For eksempel i tøffe eller langsomt voksende mikroorganismer kan den inkuberes i opptil 7 dager.

I den mikrobiologiske analysen av farmasøytiske stoffer - som vaksiner - er protokollene strengere. I disse tilfellene kastes ikke buljongen uten vekst før den når 14 dagers kontinuerlig inkubasjon..

QA

Fra hver klargjorte batch skal 1 eller 2 ikke-inokulerte rør inkuberes for å demonstrere deres sterilitet. Må forbli uendret.

Kjente stammer kan også plantes for å vurdere deres atferd. Blant stammene som kan brukes er:

Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 eller 25923, Escherichia coli ATCC 8739,  Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

I alle tilfeller må veksten være tilfredsstillende under forholdene med passende atmosfære og temperatur for hver mikroorganisme..

Begrensninger

-Gjæringen av glukose får pH til mediet til å synke på grunn av produksjonen av syrer. Dette kan være ugunstig for overlevelsen av noen mikroorganismer som er følsomme for surhet..

-Det anbefales ikke for vedlikehold av stammer, for i tillegg til surhet tømmer bakterier næringsstoffer etter noen dager med påfølgende akkumulering av giftige stoffer som gjør miljøet ugjestmild.

-Du må jobbe med å ta vare på alle sterilitetsprotokoller, siden buljongen er lett forurenset.

-Etter at du har tilberedt trypticasein soya buljonger, bør du ikke prøve å overføre buljong til et annet sterilt rør, fordi denne typen manøvrer er veldig sårbar for forurensning..

Referanser

  1. Cona E. Betingelser for en god følsomhetsstudie ved agardiffusjonstest. Pastor chil. infektol. 2002; 19 (2): 77-81. Tilgjengelig på: scielo.org
  2. Britannia-laboratoriet. Triptein soya buljong. 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com
  3. MCD laboratorium. Tryptikasein soya buljong. Tilgjengelig på: electronic-systems.com
  4. Neogen-laboratoriet. Triptych Soyabuljong. Tilgjengelig på: foodsafety.neogen.com
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12. utg. Redaksjonell Panamericana S.A. Argentina.
  6. Rojas T, Vásquez Y, Reyes D, Martínez C, Medina L. Evaluering av den magnetiske immunoseparasjonsteknikken for utvinning av Escherichia coli O157: H7 i tunge kremer. ALAN. 2006; 56 (3): 257-264. Tilgjengelig på: scielo.org.ve
  7. Gil M, Merchán K, Quevedo G, Sánchez A, Nicita G, Rojas T, Sánchez J, Finol M. Biofilmdannelse i isolater av Staphylococcus aureus i henhold til antimikrobiell følsomhet og klinisk opprinnelse. Vitae. 2015; 62 (1): 1-8. Tilgjengelig på: saber.ucv.ve
  8. Narváez-Bravo C, Carruyo-Núñez G, Moreno M, Rodas-González A, Hoet A, Wittum T. Isolation of Escherichia coli O157: H7 i avføringsprøver med dobbel bruk av storfe fra Miranda kommune, Zulia-staten, Venezuela. Pastor Cient. (Maracaibo), 2007; 17 (3): 239-245. Tilgjengelig på: scielo.org

Ingen har kommentert denne artikkelen ennå.