Tioglykolat buljong begrunnelse, forberedelse og bruksområder

3140
Abraham McLaughlin

De tioglykollatbuljong Det er et beriket kulturmedium med flytende konsistens. Det er kjent under akronymet FTM for dets akronym på engelsk Fluid Thioglycollate Medium. Den ble opprettet av Brewer og modifisert i 1944 av Vera, som la til kaseinpepton.

Dette mediet har et lavt oksidasjonsreduksjonspotensial, derfor anbefales det ikke for utvikling av strenge aerobe bakterier, men det er ideelt for å gjenopprette fakultative aerobe, strenge anaerobe og lite krevende mikroaerofile bakterier..

Thioglycollate buljong uten indikator. Viser utflod. Kilde: Bobjgalindo [CC BY-SA 4.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0)]

Den høye ytelsen som er observert med dette mediet i isolering og utvinning av et bredt utvalg av mikroorganismer, har gjort det akseptert av United States Pharmacopoeia (USP), av Official Association of Agricultural Chemists (AOAC) og av European Pharmacopoeia (EP)..

Disse organisasjonene anbefaler det for sterilitetskontrolltesting av farmasøytiske produkter og for berikelse av forskjellige typer prøver..

Kado-tioglykolatet består av gjærekstrakt, bukspyttkjertelfordøyelse av kasein, vannfri dextrose, L-cystin, natriumklorid, natriumtioglykollat, resazurin og agar i liten mengde.

Det er flere versjoner av dette mediet, blant dem er: tioglykolatbuljong med indikator, tioglykolatbuljong uten indikator, tioglykolatbuljong med indikator beriket med hemin og vitamin K1, og kalsiumkarbonat-tioglykolatbuljong.

Det skal bemerkes at tioglykollatbuljongvarianten beriket med hemin og vitamin K tjener til å øke veksten av kresne anaerober, og tioglykolatbuljongvarianten som inneholder kalsiumkarbonat er nyttig for å motvirke syrene som produseres under mikrobiell vekst..

Artikkelindeks

  • 1 Begrunnelse
  • 2 Klargjøring
    • 2.1 Tioglykollatbuljong med indikator
    • 2.2 Tioglykolatbuljong med indikator beriket med hemin og vitamin K1
    • 2.3 Tioglykolatbuljong med kalsiumkarbonat
    • 2.4 Thioglycollate buljong uten indikator
  • 3 Bruk
  • 4 Kvalitetskontroll
  • 5 Anbefalinger
  • 6 Referanser

Basis

Tioglykolatbuljong betraktes som et ikke-selektivt anrikningsmedium, da det tillater vekst av de fleste ikke-kresne bakterier. Ernæringsmessige krav er gitt av gjærekstrakt, fordøyelse i bukspyttkjertelen og glukose.

På den annen side inneholder dette mediet, til tross for at det er en buljong, en liten mengde agar; Dette betyr at det har et lavt oksidasjonsreduksjonspotensial på grunn av at det bremser oksygeninngangen på en slik måte at oksygenet avtar når det går dypere inn i røret..

Derfor er dette mediet ideelt for utvikling av fakultative aerobe, mikroaerofile og strenge anaerobe bakterier, sistnevnte 2 uten behov for å ruge under disse forholdene. Det samme mediet regulerer oksygenmengden i mediet, og er fraværende i bunnen av røret og i tilstrekkelig mengde på overflaten..

På samme måte virker tioglykollat ​​og L-cystin som reduksjonsmidler, og hjelper til med å forhindre akkumulering av stoffer som er skadelige for bakteriell utvikling, som peroksid. I tillegg inneholder disse forbindelsene sulfhydrylgrupper (-SH-), som nøytraliserer de hemmende effektene av kvikksølvderivater, arsenikaler, blant andre tungmetaller..

For sin del er resazurin en indikator på oksydreduksjon. Dette stoffet er fargeløst når det er redusert og rosa når det oksyderes. Det er indikatorer og ikke-indikatorer tioglykolatbuljongvarianter. Dens bruk vil avhenge av prøvetypen og laboratoriets preferanse..

I mellomtiden opprettholder natriumklorid den osmotiske balansen i tioglykolatbuljongen, og bruk av glukose i vannfri form forhindrer overflødig fuktighet i det dehydratiserte mediet..

Forberedelse

Thioglycollate buljong med indikator

Vei ut 29,75 g av det dehydratiserte mediet og oppløs i 1 liter destillert vann. Blandingen får stå i omtrent 5 minutter. Ta til en varmekilde og rist ofte til den er helt oppløst..

Hell mediet i reagensglass og autoklaver ved 121 ° C i 15 minutter. La avkjøles før bruk. Sjekk innsatsen til handelshuset for bevaring. Noen anbefaler å oppbevare ved romtemperatur på et mørkt sted, og andre i kjøleskap beskyttet mot lys.

PH i det tilberedte mediet er 7,1 ± 0,2.

Fargen på det dehydratiserte mediet er lys beige og det tilberedte mediet er lysegult med noe opalens..

Tioglykolatbuljong med indikator beriket med hemin og vitamin K1

Det er kommersielle midler som allerede gir hemin og vitamin K1, spesielt for dyrking av anaerober.

Hvis det anikerte anaerobe mediet ikke er tilgjengelig, kan den basiske tioglykolatbuljongen tilberedes. For dette tilsettes 10 mg heminhydroklorid og 1 mg vitamin K.1 for hver liter medium. Imidlertid, hvis blod eller serum tilsettes til tioglykolatbuljongen, er det ikke nødvendig å tilsette hemin eller vitamin K..

Tioglykolatbuljong med kalsiumkarbonat

Den kommer kommersielt og tilberedes i henhold til instruksjonene på innsatsen.

Thioglycollate buljong uten indikator

Dette har samme sammensetning av det basiske tioglykollatet, men inneholder ikke resazurin.

Vei 30 g av det dehydratiserte mediet og oppløs det i en liter destillert vann. Resten av preparatet er den samme som beskrevet i tioglykolatbuljongen med indikator.

Bruk

Tioglykollatbuljong er nyttig for berikelse av kliniske prøver, spesielt de fra sterile steder. Det er også nyttig for ikke-kliniske prøver, for eksempel kosmetikk, medisiner, etc..

For inokulering av væskeprøver (for eksempel CSF, synovialvæske, blant andre) sentrifugeres prøvene først, og deretter tas 2 dråper av sedimentet og plasseres i tioglykolatbuljongen. Inkuber ved 35 ° C i 24 timer. Hvis det ikke er noen vekst (turbiditet) på denne tiden, inkuber du opp til maksimalt 7 dager.

Hvis prøven tas med en vattpinne, blir kulturmediet først inokulert i plater, og til slutt blir vattpinnen introdusert i buljongen, den utstikkende delen blir delt og røret er dekket, slik at vattpinnen blir igjen. Inkuber ved 35 ° C i 24 timer, maksimalt 7 dager.

For faste prøver homogeniseres i fysiologisk saltløsning (SSF) og deretter inokuleres tioglykolatbuljongen med 2 dråper suspensjon..

Det kan noen ganger brukes som et transportmedium for prøver der det er mistanke om tilstedeværelse av strenge anaerober eller som en reserveanrikningsbuljong..

Tioglykollatbuljongvarianten med kalsiumkarbonat brukes til å opprettholde kontrollstammer i lengre tid, fordi den har evnen til å nøytralisere syrene som produseres ved bruk av glukose; disse syrene er giftige for visse bakterier.

Vekst i tioglykolatbuljongen vil bli observert av mediumets uklarhet. Det anbefales å utføre en Gram-flekk og deretter subkultur i ikke-selektive og selektive medier, avhengig av prøvetype og mistenkte mikroorganismer..

QA

For sterilitetskontroll anbefales det å ruge en eller to buljonger uten inokulering. Det forventede resultatet er en klar buljong, uten fargeendring, selv om det er normalt å se en liten rosa farge på overflaten av røret..

For kvalitetskontroll bør mellom 10 - 100 CFU av sertifiserte kontrollstammer inokuleres, for eksempel Staphylococcus aureus ATCC 6538, Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Clostridium sporogenes ATCC 19404, Clostridium sporogenes ATCC 11437, Bacteroides vulgatus ATCC 8482.

Inkuber ved 30-35 ° C i aerobiose i 24 timer opp til maksimalt 3 dager, siden disse mikroorganismene vokser raskt.

Det forventes god utvikling i alle tilfeller, bortsett fra Micrococcus luteus Y Bacillus subtilis, der det kan være moderat utvikling.

For kvalitetskontroll av tioglykolatbuljong beriket med hemin og vitamin K1, kontrollstammer kan brukes Bacteroides vulgatus  ATCC 8482, Clostridium perfringens ATCC 13124 og Bacteroides fragilis ATCC 25285. Det forventede resultatet er tilfredsstillende vekst.

anbefalinger

-Noen ganger kan overflaten på indikatoren thioglycollate sesong bli rosa; Dette skyldes oksidasjon av mediet. Hvis den rosa fargen dekker 30% eller mer av den totale buljongen, kan den varmes opp i et vannbad i 5 minutter, avkjøles igjen og brukes..

Dette vil fjerne det absorberte oksygenet og bringe mediet tilbake til sin opprinnelige farge. Denne prosedyren kan bare gjøres en gang.

-For å forbedre veksten av aerobe bakterier, bør den inkuberes med hetten litt løs. Imidlertid er det foretrukket å bruke en hjerneinfusjonsbuljong eller trypticase-soyabuljong til dette formålet for riktig utvikling av strenge aerober..

-Frysning av mediet eller overoppheting bør unngås, da begge forholdene skader mediet..

-Direkte lys skader kulturmediet, det må lagres beskyttet mot lys.

Referanser

  1. Britannia Laboratories. Thioglycollate USP med indikator. 2015. Tilgjengelig på: labBritania.com.
  2. Chios Sas Laboratories. 2019. Thioglycollate buljong. Tilgjengelig på: quios.com.co
  3. BD Fluid Thioglycollate Medium (FTM) laboratorier. 2003. Tilgjengelig på: bd.com/Europe
  4. BBL-medier fremstilt i rør for dyrking av anaerobe mikroorganismer. Thioglycollate media. 2013. Tilgjengelig på: bd.com
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12. utg. Redaksjonell Panamericana S.A. Argentina.

Ingen har kommentert denne artikkelen ennå.