Bengal rose Det er en laboratorietest basert på en antigen-antistoffreaksjon for diagnostisering av brucellose. Teknikken tillater påvisning av spesifikke antistoffer mot bakteriene Brucella abortus i humane serumprøver. Resultatet kan rapporteres kvalitativt eller halvkvantitativt.
Den kvalitative formen uttrykker om pasienten er positiv eller negativ til testen, det vil si om det er antistoffer eller ikke. I mellomtiden er den semikvantitative rapporten rapportert i IE / ml og indikerer den omtrentlige mengden antistoffer som er tilstede. Det skal bemerkes at antistoffer bare vil bli produsert hvis pasienten har vært i kontakt med mikroorganismen.
På grunn av sin store enkelhet, høy følsomhet og spesifisitet er det en av de seroagglutinasjonsteknikkene som er mest brukt i medisin som en innledende test for diagnostisering av denne sykdommen..
Noen forskere har sammenlignet effekten av Rose Bengal-testen med andre teknikker, som seroagglutinasjon (feberantigener) og har observert at selv om det er god sammenheng, så de isolerte tilfeller der feberantigen-testen var negativ og Rose de Positive blusset.
Forskjellen som ble oppnådd skyldtes at disse pasientene hadde en underklasse av IgG-antistoffer mot Brucella abortus med bedre bindingskapasitet ved sur pH, derfor kunne de reagere med Rose Bengal-reagenset, men ikke med feberantigener.
I denne forstand har de foreslått at reagensene til feberantigenteknikken endres til en sur pH slik at de kan oppdage denne typen tilfeller..
Artikkelindeks
Rose Bengal Reagent består av en antigen suspensjon. Den består av S99-stammen av Brucella abortus, fortynnet i en sur laktatbuffer (pH 3,6), pluss fenol og Rose Bengal-fargestoffet.
Derfor er det i prøven anti-Brucella-antistoffer, hvis disse er tilstede vil de reagere med reagensantigenet og en makroskopisk synlig agglutinasjonsreaksjon vil bli observert. Testen oppdager enten IgM-antistoffer eller IgG-antistoffer.
Dette betyr at den kan oppdage sykdommen både i det akutte stadiet der IgM-antistoffer råder, eller i det kroniske stadiet der IgG-antistoffer dominerer..
Dette representerer en fordel siden det øker sensitiviteten til testen, men samtidig er det en ulempe siden den ikke skiller mellom ett trinn og et annet, fordi reaksjonen med IgM og IgG-antistoffer er identisk.
Testen må alltid utføres sammen med en negativ kontroll og en positiv kontroll. Den negative kontrollen inneholder animalsk serum uten antistoffer, og den positive kontrollen inneholder serum av animalsk opprinnelse med 50 IE / ml anti-Brucella-antistoffer..
Brucellose er en alvorlig sykdom som har en tendens til å være kronisk og farlig, så det er veldig viktig at den blir diagnostisert tidlig. Det er en zoonose og mennesker kan smittes ved direkte kontakt med forurenset materiale, de mest sårbare menneskene er veterinærer og dyreholdere.
Infeksjon kan også forekomme ved å konsumere infisert rå kjøtt, blant andre former for smitte.
Denne sykdommen angriper lokalt eller systemisk. Den systemiske formen er den mest alvorlige, siden forskjellige organer kan påvirkes, inkludert endikelsystemet i retikulum (lever, milt, benmarg), hud (cellulitt og lymfadenopati), luftveiene (lungebetennelse), muskuloskeletale systemet (leddgikt, sacroiliitt og spondylitt ), blant andre.
Rose Bengal-testen er en veldig nyttig teknikk for å utføre en første screening, fordi den er veldig billig, enkel å bruke og med stor spesifisitet og følsomhet..
Tilfeller av falske negativer og falske positive er svært sjeldne, og kan forekomme hos personer med svært lave antistofftitre (< 25 UI/ml) o extremadamente altos (>1000 IE / ml).
-Rose Bengal Kit
-Agglutinasjonsplate hvit bakgrunn
-50 ul pipette
-Rotator (valgfritt)
-Virvel
Kommersielle Rose Bengal-sett kommer med klare reagenser.
-Temper reagenser før du starter arbeidet.
-Agglutinasjonsplatene har tegnet sirkler, hver for en annen prøve. Bruk tre sirkler, den første for den negative kontrollen, den andre for prøven og den tredje for den positive kontrollen.
-Plasser en dråpe eller 50 ul av kontrollene og prøven i den tilsvarende sirkelen.
-Bland Rose Bengal Reagent ved hjelp av en vortex. Plasser en dråpe ved siden av de tidligere plasserte.
-Bland med tannstikkere av tre (bruk en til hvert prøve eller kontroll). Gjør sirkulære bevegelser og spred på en slik måte at den dekker hele sirkelen.
-Plasser platen på en automatisk rotator ved 80 til 100 RPM eller roter manuelt i 4 minutter. Les beviset på slutten av denne tiden.
-Kontroller at kontrollene ga som forventet. Sammenlign reaksjonen til testprøven med kontrollene. Rapporter som positiv hvis agglutinasjon observeres og som negativ hvis det ikke er agglutinasjon.
En positiv test indikerer at pasienten har en mengde som er lik eller større enn 25 IE / ml anti-Brucella-antistoffer.
Hvis prøven er sterkt positiv i den kvalitative reaksjonen, kan den semi-kvantifiseres. For dette gjøres serie dobbel fortynning av prøven med fysiologisk saltoppløsning. Fremgangsmåten beskrevet ovenfor utføres med hver fortynning..
Det tolkes også ved å observere agglutinasjonen makroskopisk. Resultatet vil være titer for den høyeste fortynning der et positivt resultat ble observert.
For å beregne den omtrentlige verdien av anti-Brucella-antistoffer, brukes følgende formel:
25 IE / ml x reaksjonstiter = IE / ml
Eksempel, hvis en pasient i den semi-kvantitative testen tester positivt ved fortynning ½, ¼ og 1/8 og begynner å være negativ fra 1/16 fortynning og utover, betyr dette at pasienten har en titer på 8.
Bruk av formelen:
25 IE / ml x 8 = 200 IE / ml
-Kittene har en utløpsdato, og den må respekteres. Bør ikke brukes hvis reagenset er utløpt.
-Sørg for at reagensen ikke inneholder faste partikler under bruk, da dette er et tegn på forverring..
-Oppbevares mellom 2 og 8 ° C.
-Ikke frys, denne handlingen skader reagenset uopprettelig.
-Kjør alltid testen sammen med de negative og positive kontrollene.
-Teknikken tolererer serumprøver med en viss grad av lipemi og hemolyse, men det er ikke tilrådelig å bruke overdrevet lipemisk og hemolysert sera, begge forhold endrer testresultatene..
-Varm alltid reagensene til romtemperatur før analysen startes..
-Ikke tolk reaksjoner som tar mer enn anbefalt tid, da dette genererer rapporter om falske positive, siden reagenset utfelles etter en viss tid, og simulerer en positiv reaksjon..
-Teknikken er 100% sensitiv og har en spesifisitet på 98%.
-Etter en halvkvantifisering på 1000 IE / ml er det muligheten for å observere en prozoneffekt (falsk negativ på grunn av overflødig antistoff sammenlignet med mengden antigener).
Ingen har kommentert denne artikkelen ennå.