Voges-Proskauer tester grunnleggende, forberedelse og bruksområder

3203
Alexander Pearson

De Voges-Proskauer test er en biokjemisk test som brukes til å identifisere bakterier som tilhører Enterobacteriaceae-familien. Det er spesielt nyttig for å skille stammer av Escherichia coli fra Klebsiella og Enterobacter, blant andre.

Testen utføres i et flytende dyrkningsmedium kalt Methyl Red-Voges Proskauer, bedre kjent under akronymet RM / VP. Dette mediet består av bufret polypepton, glukose, dikaliumfosfat og destillert vann..

Methyl Red-Voges Proskauer (RM / VP) Kommersiell Medium / VP Test henholdsvis positiv og negativ. Kilde: Foto tatt av forfatteren MSc. Marielsa Gil / Sudipta.nov15 [CC BY-SA 3.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0)], fra Wikimedia Commons

Det nåværende RM / VP-mediet er en modifikasjon av Clark and Lubs-mediet, som opprinnelig inneholdt en lavere konsentrasjon av peptoner og glukose. Derfor ble mindre av hydrogenionet, som kreves for den positive Voges-Proskauer-reaksjonen, produsert..

Testen er basert på mikroorganismens evne til å bruke glukose gjennom butylenglykolveien, og danne et nøytralt sluttprodukt kalt acetoin, i nærvær av oksygen og en alkalisk pH..

I RM / VP-mediet, i tillegg til å kunne avsløre Voges-Proskauer-testen, kan den metylrøde testen også avsløres.

Artikkelindeks

  • 1 Begrunnelse
    • 1.1 Grunnlag for Voges-Proskauer-testen
    • 1.2 Grunnlag for avsløring av bevis og tolkning
  • 2 Klargjøring
    • 2.1 Medium MR / VP
    • 2.2 Reagensvoger A
    • 2.3 Reagens Voges B
  • 3 Voges-Proskauer testprosedyre
    • 3.1 Utvikling av testen
  • 4 Bruk
  • 5 Kvalitetskontroll
  • 6 Referanser

Basis

Voges-Proskauer testgrunnlag

Pluripeptonene som er tilstede i mediet gir de essensielle ernæringskravene for bakterievekst. For sin del er glukose hovedforbindelsen. Mange bakterier har evnen til å metabolisere glukose og danne pyruvinsyre.

Pyruvinsyre er et midtpunkt i glukosemetabolismen, og derfra kan hver mikroorganisme ta forskjellige veier. Noen vil danne blandede syrer, slik som melkesyre, eddiksyre, maursyre og ravsyre, og andre vil danne nøytrale produkter som 2,3-butandiol..

Voges-Proskauer-testen avslører mikroorganismens evne til å danne acetylmetylkarbinol (acetoin), et mellomprodukt av 2,3-butandiol under aerobe forhold.

Acetoin reduseres og danner 2,3-butandiol, men denne reaksjonen er reversibel, så hvis 2,3-butandiol oksyderes, dannes acetoin. Derfor er oksygen viktig.

Dikaliumfosfat er bufferen som buffrer blandingen til pH 6,9 ± 0,2.

Bevisinformasjon og tolkningsgrunnlag

For å demonstrere reaksjonen, må en utvikling utføres med to reagenser (Barrit-reagenser), kjent som Voges A og Voges B.

Voges A er en 5% løsning av α-naftol, og Voges B er et 40% kaliumhydroksydpreparat. Hvis kaliumhydroksid ikke er tilgjengelig, kan det erstattes med 40% natriumhydroksid.

Α-Naftol er en katalysator som vil øke reaksjonsfargen, noe som gjør testen mer følsom. Α-naftol må alltid tilsettes først, og rister på røret slik at mediet kommer i kontakt med oksygenet. På denne måten oksyderes det tilstedeværende acetoin til diacetyl, og 2,3-butandiol oksyderes for å danne acetoin, og overfører dette til diacetyl..

Slik vil α-naftol binde seg til diacetyl, som igjen har sluttet seg til guanidinkjernen som er tilstede i aminosyren arginin, den siste kommer fra pluripeptoner.

På sin side er kalium eller natriumhydroksid ansvarlig for å absorbere COto og å reagere med peptoner. Denne reaksjonen forårsaker dannelsen av en lakserosa farge, som er godt synlig etter å ha ristet røret veldig godt..

Riktig mengde diacetyl, pepton og α-naftol må blandes for at farge skal oppstå umiddelbart. Hvis dette ikke skjer, får røret hvile i 15 minutter før det tolkes..

Vanligvis er testen positiv etter 2 til 5 minutter, når en svak rosa farge kan sees. Hvis du får hvile i 30 minutter til 1 time, vil fargenes intensitet være maksimal (intens rød).

En negativ test vil vises når buljongen blir gul. Hvis testen er negativ etter 1 time, kan det dannes en kobberfarge som et resultat av reaksjonen av kaliumhydroksid på α-naftol.

Forberedelse

Medium MR / VP

Vei 17 g av det dehydrerte dyrkningsmediet og oppløs det i en liter destillert vann. La stå i 5 minutter. Kok opp for å oppløse seg helt. Server 3 til 4 ml i rør og steriliser i autoklav ved 121 ° C i 15 minutter.

Det dehydratiserte dyrkningsmediet har beige farge og det tilberedte mediet er lysegult i fargen..

Den endelige pH-verdien til mediet er 6,9 ± 0,2.

Reagens Voges A

Vei ut 5 g a-naftol og oppløs i 50 ml etylalkohol (absolutt). Fortsett deretter å tilsette etylalkohol til den når 100 ml..

Voges B-reagens

Vei 40 g kaliumhydroksid og oppløs i 50 ml destillert vann i et begerglass. Glasset må plasseres i et kaldt vannbad for å kontrollere temperaturen, for når preparatet er oppløst, stiger temperaturen kraftig.

Etter at løsningen er kald, overføres den til en målekolbe og fylles opp til 100 ml med destillert vann..

Voges-Proskauer testprosedyre

For å utføre Voges-Proskauer-testen inokuleres en RM / VP-buljong med mikroorganismen som studeres, fra en ren kultur i 18 til 24 timer..

Inokulatet skal ikke være veldig tett. Det inkuberes ved 35-37 ° C i 24 til 48 timer, selv om inkubasjon i flere dager noen ganger er nødvendig. Cowan og Steel mener at 5 dager er den minste inkubasjonstiden som er nødvendig for å oppdage alle positive Voges-Proskauer (VP) arter av Enterobacteriaceae-familien..

Testutvikling

Separer en 1 ml alikvot i et rør og utvikle på følgende måte: Plasser 12 dråper (0,6 ml) Voges A-reagens og 4 dråper (0,2 ml) Voges B. Bland for å lufte og la det legge seg i 5-10 minutter før tolking. Imidlertid, hvis testen fortsatt er negativ, la den sitte og observere røret etter 30 minutter til 1 time..

Utseendet til en rosa-rød farge indikerer at Voges-Proskauer-reaksjonen er positiv. Hvis mediet forblir gult, er reaksjonen negativ.

Å legge til utviklere i den angitte rekkefølgen og mengden er viktig for å unngå falske negativer..

Bruk

Voges-Proskauer-testen er nyttig for å skille mellom stammer av E coli som er VP-negative, av slektene Klebsiella, Enterobacter, Serratia, blant andre, som er VP-positive.

Kilde: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. utg. Redaksjonell Panamericana S.A. Argentina.

QA

Kontrollstammer kan brukes til å teste kvaliteten på det tilberedte mediet, inkludert Escherichia coli ATCC 25922, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Proteus mirabilis ATCC 43071, Salmonella typhimurium og Enterobacter cloacae ATCC 13047.

Forventede resultater er positive Voges-Proskauer-reaksjoner bare for K. pneumoniae Y E. cloacae. Resten gir negative reaksjoner.

Referanser

  1. Britannia Laboratories. MR-VP Medium. 2015. Tilgjengelig på: www.britanialab.com
  2. Microkit Laboratories. M-Ident Voges Proskauer. 2014. Tilgjengelig: http://www.medioscultivo.com
  3. Mac Faddin J. (2003). Biokjemiske tester for identifisering av bakterier av klinisk betydning. 3. utg. Redaksjonell Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12. utg. Redaksjonell Panamericana S.A. Argentina.
  5. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. utg. Redaksjonell Panamericana S.A. Argentina.

Ingen har kommentert denne artikkelen ennå.