De Kan Grünwald-Giemsa flekker o Pappenheim er en differensiell fargeteknikk som blander Giemsa og May Grünwald reagenser. Det brukes til å differensiere normale og unormale blodceller i perifert blod og beinmargsflekker, samt for farging av histologiske seksjoner og cytologiske prøver..
Begge reagensene -Giemsa og May Grünwald- er avledet av farging av Romanowsky-typen, en teknikk som er basert på kombinasjonen av sure og basiske fargestoffer..
Giemsa forbedret teknikken ved å stabilisere blandingen av eosin, metylenblått og deres derivater med glyserol. I stedet bruker May Grünwald eosin og metylenblått, og bruker metanol som løsningsmiddel. Denne strategiske kombinasjonen har gitt gode resultater.
Selv om det i forhold til observasjon av cellemorfologi virker på samme måte som Giemsa og Wright-flekkene, forbedrer denne teknikken de forrige ved å raffinere fargingen av parasittene som forårsaker malaria, Chagas sykdom, leishmaniasis og trichomoniasis..
I tillegg har det vist seg å være en veldig nyttig teknikk for den cytologiske studien av sædvæske. Det har skilt seg ut ikke bare ved å vise sædcellernes morfologiske egenskaper, men også ved å tillate differensiering av leukocytter, epitelceller og sædceller med stor effektivitet..
Artikkelindeks
Teknikken følger grunnlaget for Romanowsky-flekker, hvor sure fargestoffer har selektiv affinitet for basiske cellulære komponenter og sure komponenter tiltrekker seg grunnleggende flekker..
Forklart på en annen måte, har både cellestrukturer og fargestoffer positive eller negative elektriske ladninger; som ladninger frastøter og forskjellige ladninger tiltrekker seg.
For eksempel er grunnleggende fargestoffer som metylenblått positivt ladede og tiltrekkes av negativt ladede strukturer. Det er derfor dette fargestoffet flekker kjerner som er rike på DNA og RNA som har negativt ladede fosfatgrupper..
Granulatene av segmenterte basofiler og cytoplasmaene i mononukleære hvite blodlegemer som inneholder RNA farges også..
På samme måte bærer syrefargestoffet en negativ ladning, og det er derfor det binder seg til positivt ladede strukturer som erytrocytter og granulater av segmenterte eosinofiler. Når det gjelder granulatene til de segmenterte nøytrofilene, fester disse begge fargestoffene.
I denne teknikken eksisterer en kombinasjon av reaksjoner mellom ortokromatisk og metakromatisk fargestoff. Ortokromatika (eosin og metylenblått) binder seg til cellestrukturen som de er knyttet til og gir en stabil farge som ikke varierer.
På den annen side varierer metakromatika (derivatene av metylenblått asurblå A og asurblå B) sin opprinnelige farge når de er festet til den spesifikke strukturen, og det kan til og med være en rekke nyanser.
Til slutt krever trinnet som May Grünwald-løsningen tar tilstedeværelse av vann, fordi uten dette vil fargestoffet trenge gjennom strukturene, men ikke stivne. For at dette skal skje, må fargestoffet bli polært eller ionisere, og dermed være i stand til å utfelle og binde seg til relaterte strukturer..
- Mikroskop lysbilder.
- Broer for fargelegging.
- May-Grünwald-løsning.
- Giemsa flekk.
- Destillert vann.
0,25 g eosin-metylenblått (flekk ifølge May Grünwald) skal veies opp og oppløses i 100 ml metanol. Deretter blandes preparatet i 1 time og får hvile i 24 timer. Når tiden er ute, lekker den.
For å anvende teknikken må May Grünwald-fargestoff fortynnes som følger: For 200 ml fortynnet fargestoff måler du 30 ml av den konsentrerte løsningen, tilsett 20 ml bufferoppløsning og 150 ml destillert vann justert til pH7,2-7,3. Senere blandes det og filtreres.
0,5 g azurblå-eosin-metylenblått (flekk i henhold til Giemsa) må veies, oppløses i 50 ml metanol og 50 ml glyserin tilsettes til blandingen.
For å utføre teknikken fortynnes den 1:10 med bufferløsning og får stå i 10 minutter. Kan filtreres om nødvendig.
De bør veies:
- 40 mg kaliumdihydrogenfosfat (KH2PO4).
- 151 mg di-natriumhydrogenfosfat 12-hydrat (Na2HPO4).
Begge forbindelsene er oppløst i 100 ml vann.
Det er to moduser: en klassiker og en rask.
Teknikkene beskrevet her er en retningslinje, men det bør tas i betraktning at prosedyrene og fargetidene varierer i henhold til det kommersielle selskapet som distribuerer reagensene. Det anbefales å følge trinnene som er angitt av hvert kommersielle hus.
1- Dekk utstrykingen med et tynt lag av May Grünwald-løsningen i 4 minutter.
2- Fjern fargestoffet og vask med destillert vann.
3- Legg et lag fortynnet Giemsa (1:10) i destillert vann i 15 minutter.
4- Fjern fargestoffet og vask med destillert vann.
5- La tørke og observer i mikroskopet.
Teknikken krever at reagensene og vaskeoppløsningene har en pH justert til 7,2 -7,3, slik at fargenes fargestoffer for cellestrukturene ikke blir forvrengt og den forventede endelige fargen ikke varierer..
Denne teknikken brukes av kliniske laboratorier for å flekke flekker av perifert blod og benmarg, vevssnitt og cytologier..
I det hematologiske feltet er denne teknikken av avgjørende betydning i studiet av abnormiteter i celler når det gjelder form, størrelse og antall. Det er et veldig verdifullt verktøy for diagnostisering av visse sykdommer, som leukemi og anemier.
I tillegg er den av enestående nytte når man leter etter parasitter i hematologiske områder (Plasmodium sp Y Trypanosome cruzi) eller histologisk (Leishmanias sp).
Når det gjelder vaginal cytologi, er denne teknikken spesielt fordelaktig for observasjon av Trichomonas vaginalis. Dette er et viktig funn, siden tilstedeværelsen simulerer bilder av karsinom. in situ som deretter forsvinner når parasitten fjernes.
Det har vært et ideelt verktøy for studier av sædprøver, siden det gir verdifull informasjon om sædkvaliteten.
Dataene den tilbyr har hovedsakelig å gjøre med antall og morfologi, så vel som med de samtidig cellene som kan være til stede og som er av avgjørende betydning, for eksempel kjønnsceller, leukocytter og epitelceller..
Med denne analysen er det mulig å beskrive abnormiteter observert i sædceller i hode, nakke, midtstykke og hoveddel..
I tillegg kan de også bidra til å vise tilfeller av hemospermi (tilstedeværelse av røde blodlegemer i sæd) og leukospermi eller piospermi (økt antall leukocytter i sæd).
Ingen har kommentert denne artikkelen ennå.