De Baird Parker agar Det er et solidt, selektivt og differensielt kulturmedium. Den ble opprettet i 1962 for påvisning og telling av koagulase-positive stafylokokker (Staphylococcus aureus).
Den består av bukspyttkjertelkaseinhydrolysat, kjøttekstrakt, gjærekstrakt, litiumklorid, glysin, natriumpyruvat, kaliumtelluritt, agar og eggeplommeemulsjon..
Baird Parker Agar er basert på evnen til S. aureus for å redusere telluritt og produsere lecithinase. Begge eiendommene genererer en koloni med spesifikke egenskaper for denne arten. Derfor er det svært effektivt å oppdage denne mikroorganismen..
De typiske koloniene i S. aureus De er svarte eller mørkegrå, med en fargeløs kant og en lys glorie som omgir dem, og skiller dem fra andre mikroorganismer. Dette patogenet finnes i kliniske prøver, vann, kosmetikk og rå eller kokt mat..
Dens diagnose eller påvisning er av største betydning på grunn av mangfoldet av patologier den produserer, for eksempel matforgiftning, skåldet hudsyndrom, giftig sjokksyndrom, abscesser, hjernehinnebetennelse, septikemi, endokarditt, blant andre..
Artikkelindeks
Bukspyttkjertelkaseinhydrolysat, kjøttekstrakt og gjærekstrakt er kildene til næringsstoffer, vitaminer og mineraler som er nødvendige for generell mikrobiell utvikling, mens pyruvat og glycin er forbindelser som fremmer den spesifikke veksten av Staphylococcus aureus.
Baird Parker Agar er selektiv fordi den inneholder stoffer som hemmer veksten av den medfølgende floraen, samtidig som den fremmer utviklingen av S. aureus. De hemmende forbindelsene er litiumklorid og kaliumtelluritt..
Dette mediet gjør det mulig å differensiere S. aureus av resten av koagulase-negative stafylokokker. S. aureus har evnen til å redusere telluritt til fritt metallisk svart tellur, og danne svarte eller mørkegrå kolonier.
På samme måte gir eggeplommen substratene for å demonstrere tilstedeværelsen av enzymet lecithinase og lipase.. S. aureus er lecithinase-positiv, og det vil derfor bli observert en klar glorie rundt kolonien, noe som indikerer at lecitinet ble hydrolysert.
I denne forstand indikerer utseendet på denne agaren av skinnende svarte eller mørkegrå kolonier med en lys glorie rundt seg tilstedeværelsen av S. aureus.
Hvis det dannes en nedbørssone, er det en indikasjon på lipaseaktivitet. Noen stammer av S. aureus de er lipase positive og andre negative.
I tilfelle at S. aureus Hvis lipase er positiv, vil et ugjennomsiktig område bli observert rundt den svarte eller mørkegrå kolonien, og deretter en lys glorie på grunn av virkningen av lecithinase.
Kolonier av andre bakterier enn S. aureus som er i stand til å vokse i dette mediet, vil utvikle fargeløse eller brune kolonier, uten omkringliggende glorie.
Atypiske svarte kolonier kan også sees med eller uten fargeløs kant, men uten lys glorie. Disse koloniene bør ikke tas i betraktning, de tilsvarer ikke S. aureus.
Ta et ferskt kyllingegg, vask det godt og legg det i 70% alkohol i 2 til 3 timer. Egget åpnes deretter aseptisk, og det hvite skilles forsiktig fra eggeplommen. Deretter tas 50 ml av eggeplommen og blandes med 50 ml steril fysiologisk løsning..
Noen kommersielle hus selger 1% kaliumtelluritt klare til bruk. Det tilsettes mediet før mediet stivner.
For å fremstille denne løsningen i laboratoriet, veies 1,0 g kaliumtelluritt og oppløses i en del vann. Deretter er mengden vann ferdig til den når 100 ml. Løsningen må steriliseres etter filtreringsmetoden.
Vei ut 60 g av det dehydratiserte mediet og oppløs i 940 ml destillert vann. La blandingen hvile i omtrent 5 til 10 minutter.
Påfør varme ved å røre mediet ofte for å forbedre oppløsningen. Kok opp i et minutt. Steriliser i autoklaven ved 121 ° C i 15 minutter.
La stå til den når en temperatur på 45 ° C, og tilsett 50 ml eggeplommeemulsjon og 10 ml 1% telluritt. Bland godt og hell 15-20 ml på sterile petriskåler..
Tillat å stivne, ordne omvendt i panner og oppbevar i kjøleskapet til bruk.
Den endelige pH-verdien til det tilberedte mediet må være 6,8 ± 0,2.
Før du sår en prøve, vent til platen når romtemperatur. Så plater ved strekk eller såing på overflaten med Drigalski-slikkepott.
Fargen på det dehydratiserte mediet er lysebrun og fargen på det tilberedte mediet er lysegult.
De kliniske prøvene blir sådd direkte ved å tømme en del av materialet i den ene enden av platen, og derfra blir det stripet av utmattelse. Inkuber i 24 til 48 timer ved 35-37 ° C.
Vei 10 g av matprøven og homogeniser den i 90 ml 0,1% peptonvann, derfra tilberedes fortynninger om nødvendig. Inokuler platene i tre eksemplarer med 0,3 ml av de tilberedte løsningene, og frø på overflaten med en Drigalski-slikkepott. Inkuber i 24 til 48 timer ved 35-37 ° C.
Denne metoden gjør det mulig å telle de typiske koloniene som er oppnådd, og er ideell når tilstedeværelsen av S. aureus over 10 CFU per gr / ml prøve.
Hvis mengden av S. aureus Det er lite eller det er mye medfølgende flora, det anbefales å berike prøven i trypticase soyabuljong med 10% NaCl og 1% natriumpyruvat. Dette vil favorisere veksten av S. aureus og vil hemme utviklingen av den medfølgende floraen. Grusomme rør blir sådd på Baird Parker-agar..
I et sterilisert vakuumfiltreringssystem filtreres 100 ml studievann, og deretter fjernes den 0,4 mikron mikroporøse membranen med en steril tang og plasseres på en Baird Parker-plate. Inkuber i 24 til 48 timer ved 35-37 ° C. Denne teknikken gjør det mulig å telle typiske kolonier fra S. aureus.
Kjente stammer kan brukes til å vurdere kvaliteten på Baird Parker Agar, som f.eks Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 eller Proteus mirabilis ATCC 43071.
Når det gjelder stammer av S. aureus ATCC er kjent for å redusere telluritt, og de er lipase og lecithinase positive. Derfor må det være en tilfredsstillende utvikling og vokse konvekse kolonier med et svart senter og en fargeløs kant, med en ugjennomsiktig glorie og en lys ytterste glorie..
For sin del, S. epidermidis det forventes dårlig utvikling på dette mediet, med brungrå til svart kolonier, uten lys glorie.
For å E coli Y P. mirabilis det forventes å være helt eller delvis hemmet. I tilfelle vekst vil brune kolonier utvikle seg uten ugjennomsiktig område, eller lys glorie.
-Mediet skal ikke varmes opp etter tilsetting av telluritt og eggeplomme.
-Fremstillingen av eggeplommeemulsjonen og tilsetning av den i midten er et veldig sårbart trinn for forurensning. Det må utvises forsiktighet.
-Hvis det er typiske kolonier av S. aureus må bekreftes ved å montere en koagulasetest på nevnte belastning.
-Hvis det er tvilsomme resultater med koagulase, bør andre bekreftende tester monteres.
-Pass på å ikke forveksle tilstedeværelsen av typiske kolonier fra S. aureus med atypiske svarte kolonier.
Ingen har kommentert denne artikkelen ennå.