De agar standardtelling Det er et fast, ikke-selektivt dyrkningsmedium designet for kvantifisering av den aerobe mikrobielle belastningen som er tilstede i prøver av drikkevann, avløpsvann, meieridrikker, blant andre matvarer. Dette mediet er også kjent som PCA-agar, for dets forkortelse på engelsk Plate Count Agar. Den ble opprettet i 1953 av Buchbinder, Baris og Goldstein.
Standardtallagarmediet består av gjærekstrakt, triptein, glukose, agar og destillert vann. Denne formuleringen inneholder grunnleggende ernæringselementer som tillater utvikling av den nåværende aerobe mikrobielle belastningen, ikke krevende.
Siden mediet ikke inneholder hemmere, kan bakterier vokse uten begrensninger, noe som gjør det ideelt for generell kolonitelling. Imidlertid vil platekvantifiseringsteknikken ikke oppdage alle bakteriene som er tilstede, men bare de som er i stand til å vokse under miljøforholdene som den frøede standardtallagaren er utsatt for..
I denne forstand søker platekvantifiseringsteknikken generelt å bestemme mengden bakterier av den aerobe mesofile typen, det vil si de som utvikler seg ved temperaturer mellom 25 og 40 ° C, med en optimal veksttemperatur på 37 ° C..
Denne bakteriegruppen er veldig viktig, fordi de fleste av de patogene bakteriene for mennesker finnes der..
Det skal bemerkes at det noen ganger kan være av interesse å kvantifisere mengden psykrofile bakterier som er tilstede i maten. Disse bakteriene er de som utvikler seg ved lave temperaturer (< 20°C) y son las responsables de que los alimentos se descompongan más rápido, aun estando en nevera.
Likeledes kan termofile bakterier, som utvikler seg i et område mellom 50 ° C og 80 ° C eller mer, være viktige i visse typer matvarer, som hermetikk..
Mikrobiell kvantifisering uttrykkes i kolonidannende enheter (CFU) per gram eller milliliter prøve.
Artikkelindeks
Standardtellemediet er designet for å tillate vellykket vekst av ikke-kjedelige aerobe bakterier, siden gjærekstraktet, triptein og glukose gir de nødvendige næringsstoffene for god mikrobiell vekst..
På den annen side har mediet en lys farge og et gjennomsiktig utseende, og det er derfor det er ideelt for visualisering av kolonier utviklet av dypsåingsmetoden (plate pouring)..
Det er også mulig å telle kolonier ved bruk av Drigalski-spateloverflaten..
Når den mikrobielle belastningen er høy, må desimalfortynninger av prøven som studeres gjøres for å kunne telle CFU-ene.
Det skal bemerkes at dette mediet er anbefalt av American Public Health Association (APHA) for telling av aerobe mesofiler..
Vei 23,5 g av det dehydratiserte mediet og oppløs det i en liter destillert vann. For å oppløse seg fullstendig, bør blandingen varmes opp ved å røre ofte til den koker. De neste trinnene avhenger av såingsteknikken som skal brukes.
Fordel ved å tildele 12 til 15 ml i reagensglass. Deretter steriliseres i en autoklav ved 121 ° C i 15 minutter. Tillat å stivne vertikalt i form av en blokk. Oppbevares i kjøleskap til bruk.
Smelt pluggen når du skal bruke den. Når det er smeltet, hold det i et vannbad ved 44-47 ° C mens prøvene tilberedes..
Steriliser mediet i en autoklav ved 121 ° C og fordel deretter 20 ml i sterile petriskåler. La stivne, snu og oppbevare i kjøleskapet til bruk.
Temper platene før bruk. Mediumets pH må være 7,0 ± 0,2.
Standard Count Agar brukes i den aerobe mesofiltellingsteknikken under mikrobiologisk analyse av vann og mat. Antallet aerobe mesofiler er nødvendig, siden det bestemmer hygienekvaliteten til prøven som studeres..
Anvendelsen av denne teknikken (ved hjelp av dette mediet) tillater makroskopisk visualisering av isolerte kolonier for kvantifisering..
Teknikken består av følgende:
1) Homogeniser prøven for å omfordele bakteriene som er tilstede.
2) En opprinnelig suspensjon lages i en steril flaske eller pose, med respekt for forholdet mellom 10 g eller 10 ml prøve i 90 ml fortynningsmiddel (10-1).
3) Fra den opprinnelige suspensjonen blir de relevante desimale fortynningene gjort avhengig av prøvetypen. Eks: (10-to, 10-3, 10-4). Fortynninger er laget med peptonvann eller fosfatbuffer..
For å gjøre dette, ta 1 ml av den opprinnelige suspensjonen og legg den i 9 ml fortynningsmiddel, fortsett fortynningene om nødvendig, og ta nå 1 ml av fortynningen 10-to og så videre.
4) Ta 1 ml av hver fortynning og legg i tomme sterile petriskåler.
5) Tilsett til hver plate 12 til 15 ml standardtallagar som tidligere var smeltet og avgjort ved 44-47 ° C.
6) Drei platene forsiktig for å fordele prøven jevnt over agar og la den stivne..
7) Inverter platene og inkuber ved 37 ° C i aerobiose i 24 til 48 timer.
8) På slutten av tiden blir platene undersøkt og koloniene telles i fortynningen som tillater det. Disse platene som har mellom 30 og 300 CFU er valgt for tellingen.
Telling kan gjøres manuelt, eller du kan bruke kolonitellerutstyret.
Verdiene som er tillatt per ml prøve kan variere fra land til land, avhengig av regelverket de er underlagt..
Den generelle beregningen gjøres ved hjelp av følgende formel:
Uttrykk resultatene med 1 eller 2 sifre, multipliser med riktig base 10. Eksempel: hvis resultatet er 16.545, avrundes det basert på det tredje sifferet til 17.000, og det vil uttrykkes som følger: 1,7 x 104. Nå, hvis resultatet var 16.436, rund det til 16.000 og uttrykk 1,6 x 104.
-Inokuler med 0,1 ml av den direkte prøven hvis den er flytende, første suspensjon 10-1 eller 10 fortløpende fortynninger-to, 10-3 etc, i midten av en standard telleragarplate.
-Fordel prøven jevnt med en Drigalski-slikkepott eller L-formet glassstang. La stå i 10 minutter.
-Vend plater og ruge aerobt ved 37 ° C i 24 til 48 timer.
-Fortsett å telle koloniene, velg platene som ligger i området 20 - 250 CFU.
For beregningen brukes fortynningsfaktoren, som er den omvendte. Antallet er avrundet til to signifikante sifre (avrunding i henhold til det tredje sifferet) og uttrykt i kraften til base 10. For eksempel hvis 224 CFU telles i prøven uten fortynning (10-1), 22 x 10 er rapportert1 UFC, men hvis tallet var 225, rapporteres det 23 x 101 UFC.
Nå hvis du teller 199 CFU i fortynning 10-3, vil bli rapportert 20 x 104 CFU, men hvis 153 CFU telles i samme fortynning, vil 15 x 10 bli rapportert4 UFC.
Standardtellingskulturmediet kan evalueres ved hjelp av sertifiserte kjente stammer, for eksempel: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Bacillus subtilis ATCC 6633, Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Shigella flexneri ATCC 12022.
Hvis dyrkningsmediet er i optimale forhold, forventes tilfredsstillende vekst i alle tilfeller, bortsett fra L. fermentum som kan ha en jevnlig opptreden.
For å evaluere steriliteten til dyrkningsmediet, bør en eller to plater av hver tilberedte batch (uten inokulering) inkuberes ved 37 ° C i aerobiose i 24 timer. Etter denne tiden skal ingen vekst eller fargeendring av mediet observeres..
-Ikke smelt agaren mer enn en gang.
-Det tilberedte mediet kan vare i opptil 3 måneder så lenge det oppbevares i kjøleskap og beskyttes mot lys..
-Dette mediet er ikke egnet for kresne eller anaerobe mikroorganismer.
Ingen har kommentert denne artikkelen ennå.