De potet dekstrose agar Det er et solid, ikke-selektiv næringsdyrkningsmedium. Bakterie- og sopparter kan vokse i den, men bruken av den er spesielt indikert for isolering av filamentøse sopp og gjær. Det er også kjent som PDA-medium for det engelske uttrykket Potato Dextrose Agar.
Det er spesielt nyttig for isolering av fytopatogene sopp, det vil si de som påvirker planter. For å så prøvene fra infiserte grønnsaker kan andre midler som Sabouraud-agar eller malta-agar brukes, men for rutinemessig bruk foretrekkes potetdextrose-agar på grunn av oppnåelse av større sporulering..
Det brukes også til telling av soppkolonier i prøver av kosmetikk, farmasøytiske produkter og noen meieriprodukter. På samme måte er det egnet for såing av prøver av hudskrap på jakt etter dermatofytter, som vokser veldig bra i dette mediet og utvikler deres karakteristiske pigmenter..
Potetdekstrosemedium er et veldig enkelt og lett medium å tilberede i laboratoriet. Inneholder, som navnet antyder, infusjon av potet, dekstrose og agar-agar. I tillegg kan hemmende stoffer tilsettes for å forhindre bakterievekst og øke selektiviteten for sopparter..
Artikkelindeks
Potetdekstrose-agar er et dyrkningsmedium som gir næringselementene som er nødvendige for utvikling av filamentøse sopp og gjær..
Kombinasjonen av infusjon av potet med glukose gir den perfekte energikilden for en tilfredsstillende vekst av sopp. Mens agaren er den som gir konsistensen til mediet.
Mediet i seg selv hemmer ikke veksten av bakterier, derfor er det et ikke-selektivt medium. For å gjøre det selektivt, trenger det tilsetning av hemmende stoffer som vinsyre eller antibiotika..
Den tilberedes som følger:
For det første vaskes potetene veldig godt og fjerner jorda de har. De skjæres i tynne skiver med alt og skall. 200 g poteter veies og kokes i en liter destillert vann i en halv time.
På slutten av tiden, filtrer eller sil alt preparatet gjennom en osteklut.
Den oppnådde væsken kompletteres med destillert vann opp til en liter. Tilsett 20 g agar-agar og 20 g dekstrose til infusjonen, bland godt og autoklav ved 121 ° C, ved 15 pounds trykk i 15 minutter..
La avkjøles til 50 ° C og serveres i sterile petriskåler. De tilberedte platene oppbevares i kjøleskap..
Potetdekstrose-agarkiler kan også tilberedes..
I dette tilfellet, før sterilisering i autoklaven, plasseres 12 til 15 ml av mediet i rør, senere autoklaveres de og når de forlates, ligger de på spesielle støtter til den stivner. Oppbevares i kjøleskap.
Mediet forblir ved en pH på 5,6 ± 0,2, men noen laboratorier tilfører 10% vinsyre for å senke pH til 3,1 ± 0,1 for å hemme bakterievekst..
I samme forstand foretrekker andre laboratorier å legge til antibiotika for å gjøre det selektivt for dyrking av sopp og forhindre bakteriell utvikling..
Vei ut 39 g av det kommersielt tilgjengelige dehydratiserte mediet og oppløs det i en liter destillert vann. La stå i 5 minutter.
Blandingen varmes opp med jevnlig omrøring til den er helt oppløst. Deretter steriliseres den i en autoklav ved 121 ° C i 15 minutter..
Plater eller kiler kan tilberedes. Fortsett som beskrevet ovenfor.
PH er 5,6 ± 0,2. Hvis pH på 3,1 er ønsket, skal 14 ml steril 20% vinsyre tilsettes før servering på platene..
Råmediet er beige og det tilberedte mediet er lysegult med et litt overskyet eller opaliserende utseende..
Bladene kuttes i biter.
I et 50 cc glass med 50% alkohol, legg bladene (flekker og sunne biter) for å desinfisere overflaten i 20 til 30 sekunder. Kast alkoholen og tilsett 20% natriumhypokloritt i 40 til 50 sekunder hvis de er tynne blader, og øk tiden til 80 sekunder hvis det er bark og tømmerstokker..
Kast natriumhypokloritt og ta de desinfiserte bitene med en steril tang og legg dem på overflaten av mediet (maksimalt 10 stykker). Dato og ruge ved 20-30 ° C.
Hvis frukten er kjøttfull, åpner du frukten som er påvirket av soppen og tar biter med en steril skalpell, både fra de syke og sunne delene og plasserer dem på overflaten av agaren..
Hvis frukten er sitrus, som en sitron eller en appelsin, må den åpnes og frøene sås.
Når overflaten på frukten påvirkes og sporer observeres, er det ideelle å bruke rivemetoden på tallerkenen; Dette består i å berøre sporene med en sterilisert og avkjølt "L" -formet slikkepott, og deretter lage en sikksakk som sår 2 til 3 ganger på agaren.
De desinfiseres som beskrevet i bladene og blir senere plassert på agaren.
Det skrapes av barken og senere biter av den sunne og syke delen blir tatt og sådd direkte på agaren.
Frøplatene inkuberes aerobt ved 20-30 ° C i 72 timer.
Prøvetakingen skal gjøres ved hjelp av et skalpellblad nr. 11, enten for å klippe berørt hår, hudvekt eller negler på jakt etter dermatofytter. Før du tar prøven, må området desinfiseres med 70% alkohol..
Ved skjellende lesjoner skal kanten av lesjonen skrapes, da det er mer sannsynlig at soppen blir funnet der.
Ved eksudative lesjoner tas prøven med en tørr eller våt vattpinne. Så straks på potetdekrose-agar eller Sabouraud-agar. Unngå transportmidler.
En annen metode for prøvetaking er gjennom teppeteknikken til Mariat og Adan Campos. I dette tilfellet gnides det berørte området 5 ganger med et stykke steril ull for senere dyrking..
Prøven kan plasseres direkte i dyrkningsmediet.
Avhengig av patologien, kan den berørte delen kuttes eller rotes opp. Plasser prøven i kulturmediet.
En bestemt del av den berørte neglen kan skrapes eller kuttes. Det vil avhenge av skadetypen.
Skjær prøven i 1 mm biter før såing for å øke sannsynligheten for kontakt av soppen med dyrkningsmediet..
Koloniene oppnådd i platen isoleres i rør som inneholder potetdekstrosagar for å utføre den makroskopiske studien av koloniene (utseende, farge, konsistens, utviklingsgrad.
Den mikroskopiske studien (observasjon av strukturer og deres formasjoner) kan gjøres ved mikrokulturer eller direkte observasjon under mikroskopet mellom lamina og lamella..
Dette mediet kan også brukes til å bestemme sopp- og gjærbelastningen i plante-, mat-, kosmetikk- eller medikamentprøver. For dette formål brukes potetdekstrose-agar supplert med antibiotika, slik som: (kloramfenikol, klortetracyklin eller begge deler).
Hell 1 ml av prøven - fortrinnsvis fortynnet - i en steril og tom petriskål, smelt deretter en plugg med potetdekstrosagar og la den avkjøles til 45 ° C. Hell på petriskålen og roter til den er homogenisert. La stå til det er solid.
Inkuber aerobt ved 20-25 ° C (muggsopp) eller 30-32 ° C (gjær) i 5 til 7 dager eller mer, avhengig av hvilken sopp du søker og hvilken type prøve. To plater kan brukes til å ruge i begge temperaturområdene.
Potetdekstrose Agar kan brukes til å opprettholde levedyktige soppstammer i flere år.
For å gjøre dette dyrkes soppen i kiler av potetdekstrose-agar, og når soppen har vokst, er den dekket med mineralolje. Oljen skal steriliseres i en autoklav i 45 minutter, og ha en viskositet på omtrent 300 til 330 Saybolt. Oljen skal være 1 til 2 cm over spissen av skråningen.
Fra hver batch forberedt, skal 1 eller 2 plater tas og inkuberes ved 25 ° C i 48 timer eller ved 20 ° C i 96 timer. En god sterilitetskontroll er en der kolonien ikke observeres..
Kjente eller sertifiserte kontrollstammer som:
Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. Det forventes god vekst i alle tilfeller.
Ingen har kommentert denne artikkelen ennå.