Blodagarstiftelse, bruk og forberedelse

4025
Sherman Hoover

De blodagar det er et beriket, differensielt, men ikke-selektivt fast dyrkningsmedium. Den brukes til utvinning og vekst av et stort utvalg av mikroorganismer fra kliniske prøver eller til subkulturer..

Klassisk blodagar bør inkluderes for såing av de fleste kliniske prøver som mottas i laboratoriet; unntatt avføringsprøver der det ikke er nyttig, med mindre det er tilberedt med visse modifikasjoner.

Blodagarplate

Dette dyrkningsmediet består i utgangspunktet av en beriket basagar og 5% blod. Agarbasen kan variere i henhold til behovene, men den vil hovedsakelig være sammensatt av blant annet peptoner, aminosyrer, vitaminer, kjøttekstrakt, natriumklorid, agar..

Når det gjelder blod, er det normalt nødvendig å ha kontakt med et vivarium for å få blod fra dyr, som sauer, kaniner eller hester. Dette er imidlertid ikke alltid mulig, og menneskelig blod brukes noen ganger..

Blodagermedium kan tilberedes i laboratoriet eller kan kjøpes ferdig laget av dedikerte selskaper. Fremstillingen av dette mediet er en av de mest delikate, enhver uforsiktighet i dets tilberedning vil resultere i en forurenset sats.

Derfor må alle mulige forholdsregler tas, og til slutt må det utføres en kvalitetskontroll som inkuberer ved 37 ° C 1 plate for hver 100 som er klargjort.

Artikkelindeks

  • 1 Begrunnelse
  • 2 bruksområder
    • 2.1 Valg av blodtype
    • 2.2 Valg av basagar-type
    • 2.3 Bruk av blodagar i henhold til basemediet som brukes til fremstilling
  • 3 Klargjøring
    • 3.1 Vei og oppløs
    • 3.2 Sterilisere
    • 3.3 Blodaggregering
    • 3.4 Hell i petriskåler
  • 4 Referanser

Basis

Staphylococcus aureus dyrket på blodagar. Nathan Reading på Flickr Nathan R. på twitter [CC BY 2.0 (https://creativecommons.org/licenses/by/2.0)], via Wikimedia Commons
Det har allerede blitt nevnt at blodagar har karakteristikken av å være et beriket, differensielt og ikke-selektivt medium. Grunnlaget for hver av disse egenskapene er forklart nedenfor..

Blodagar er et beriket medium fordi det inneholder 5-10% blod på en agarbase som hovedadditiv. Begge forbindelsene inneholder mange næringsstoffer, og denne egenskapen lar de fleste dyrkbare bakteriene vokse i den..

At veksten skjer uten begrensning; av denne grunn er det ikke-selektivt. Imidlertid, hvis forbindelser blir tilsatt til dette mediet som forhindrer veksten av noen mikroorganismer og favoriserer andre, blir det selektivt. Dette er tilfelle hvis visse typer antibiotika eller soppdrepende stoffer tilsettes.

På samme måte er blodagar et differensialmedium, siden det lar oss skille mellom tre typer bakterier: beta-hemolytisk, alfa-hemolytisk og gamma-hemolytisk..

Beta-hemolytika er de som har evnen til å lyse eller bryte røde blodlegemer helt, og danne en klar glorie rundt koloniene, og derfor produserer de ß eller ß-hemolyse, og mikroorganismer kalles ß-hemolytika..

Eksempler på ß-hemolytiske bakterier er Streptococcus pyogenes Y Streptococcus agalactiae.

Alfa-hemolytika er de som utfører delvis hemolyse, der hemoglobin oksyderes til methemoglobin, og genererer en grønnaktig farge rundt koloniene. Dette fenomenet er kjent som α-hemolyse eller α-hemolyse, og bakterier er klassifisert som α-hemolytiske..

Eksempler på α-hemolytiske bakterier er Streptococcus pneumoniae Streptokokker av gruppen viridans.

Til slutt er det de såkalte gamma-hemolytiske eller ikke-hemolytiske bakteriene. Disse vokser på agaren uten å generere endringer på den, en effekt kjent som γ-hemolyse, og mikroorganismene er γ-hemolytiske.

Eksempel på γ-hemolytiske bakterier: noen stammer av gruppe D Streptococcus (Streptococcus bovis og Enterococcus faecalis).

applikasjoner

Dyrkningsmediet for blodagar er et av de mest brukte i mikrobiologilaboratoriet..

Blant mikroorganismene som er i stand til å vokse i blodagarmediet, er: strenge aerobe, fakultative, mikroaerofile, anaerobe, Gram-positive eller Gram-negative bakterier, raskt voksende eller langsomt voksende bakterier.

Noen ernæringskrevende eller kresne bakterier vokser også, samt sopp og gjær. På samme måte er det nyttig å utføre subkulturer eller aktivere stammer som er metabolsk veldig svake..

Valget av blodtype og basagar vil imidlertid variere avhengig av den sannsynlige mikroorganismen som mistenkes å komme seg, og bruken som vil bli gitt til platen (kultur eller antibiogram)..

Valg av blodtype

Blod kan være lam, kanin, hest eller menneske.

Det mest anbefalte er lammeblod, med noen unntak. For eksempel å isolere Haemophilus-arter, der det anbefalte blodet er hest eller kaninblod, siden lamblod har enzymer som hemmer faktor V.

Den minst anbefalte er menneskelig, men den er mest brukt, kanskje fordi den er enklest å få. 

Blodet må defibrineres, oppnås uten tilsetningsstoffer og fra friske dyr. For bruk av humant blod må flere faktorer tas i betraktning:

Hvis blodet kommer fra personer som har hatt bakterielle infeksjoner, vil de ha spesifikke antistoffer. Under disse forholdene vil sannsynligvis veksten av noen bakterier bli hemmet..

Hvis det er hentet fra blodbanken, inneholder det sitrat, og visse bakterier kan ikke vokse i dets nærvær. På den annen side, hvis blodet kommer fra pasienter som tar antibiotika, kan veksten av mottakelige bakterier hemmes..

Og hvis blodet kommer fra en diabetiker, forstyrrer overflødig glukose riktig utvikling av hemolysemønstre.

Valg av basagar-type

Basagaren som brukes til fremstilling av blodagar kan være veldig bred. Blant dem er: næringsagar, hjerneinfusjonsagar, trypticase soyagar, Müeller Hinton agar, Thayer Martin agar, Columbia agar, Brucella agar, Campylobacter agar, etc..

Bruk av blodagar i henhold til basemediet som brukes til fremstilling

Næringsagar

Denne basen er den minst brukte, siden den hovedsakelig vil vokse ikke-krevende bakterier, som enteriske basiller., Pseudomonas sp, S. aureus, Bacillus sp, blant andre. Det anbefales ikke å isolere Streptococcus.

Hjernens hjerteinfusjonsagar (BHI)

Det er en av de mest brukte som en blodagarbase, fordi den har de nødvendige næringsstoffene for vekst av de fleste bakterier, inkludert Streptococcus sp og andre kresne bakterier. Selv om det ikke er egnet for å observere hemolysemønstre.

Lamblod brukes vanligvis med denne basen.

Blodagarvarianter kan også fremstilles, der andre forbindelser tilsettes for å isolere visse mikroorganismer. For eksempel tjener hjerneinfusjonsagar supplert med kaninblod, cystin og glukose til å isolere Francisella tularensis.

Mens det med cystintelluritt er nyttig for isolering av Corynebacterium diphteriae. Menneske- eller lamblod kan brukes.

Med den første beta-hemolysen vil bli sett på som en smal glorie, mens den andre vil glansen være mye bredere.

På samme måte brukes denne basen sammen med bacitracin, maisstivelse, hesteblod og andre anrikningstilskudd (IsoVitaleX) til isolering av slekten. Haemophilus sp fra luftveisprøver.

Hvis kombinasjonen av antibiotika kloramfenikol - gentamicin eller penicillin - streptomycin tilsettes med hesteblod, er det også ideelt for isolering av krevende patogene sopp, selv med et høyere utbytte enn Sabouraud glukoseagar. Det er spesielt nyttig å isolere Histoplasma capsulatum.

Trypticase soyagar

Denne basen er den mest anbefalte for bedre observasjon av hemolysemønsteret og for å utføre diagnostiske tester som optokin taxa og bacitracin. Det er den klassiske blodagaren som brukes rutinemessig.

Med denne basen kan du også forberede den spesielle blodagaren for Corynebacterium diphteriae, med cystintelluritt Y lamblod.

På samme måte er kombinasjonen av denne agaren med lamblod, pluss kanamycin-vancomycin ideell for vekst av anaerober, spesielt Bacteroides sp.

Müeller Hinton agar

Denne basen supplert med blod brukes til å utføre antibiogram av krevende mikroorganismer, for eksempel Streptococcus sp.

Det er også nyttig for isolering av bakterier som Legionella pneumophila.

Thayer Martin Agar

Dette mediet er ideelt som en base for blodagar når slekten Neisseria mistenkes, spesielt Neisseria meningitidis, som N. gonorrhoeae vokser ikke på blodagar.

Det brukes også til å utføre følsomhetstester for Neisseria meningitidis.

Columbia agar

Denne basen er utmerket for såing av gastriske biopsiprøver for Helicobacter pylori.

Mediet fremstilles ved å tilsette 7% lamblod defibrinert med antibiotika (vancomycin, trimetoprim, amfotericin B og cefsulodin) for å begrense veksten av andre typer bakterier som kan være til stede..

Den samme basen supplert med humant eller lamblod, nalidiksyre og colistin er nyttig å isolere Gardnerella vaginalis. Også ideell for å vurdere antimikrobiell følsomhet for antibiotika av samme mikroorganisme.

I tillegg brukes det til fremstilling av blodagar for dyrking av anaerober, tilsetning av aminoglykosider og vancomycin..

Denne basen lar deg observere hemolysemønstrene riktig.

Brucella agar

Dette mediet som brukes som en base for blodagar sammen med tilsetning av vitamin K er ideelt for dyrking av anaerobe bakterier. I dette tilfellet anbefales bruk av lammeblod..

Campylobacter agar

Campylobacter-agar supplert med 5% saueblod og 5 antibiotika (cefalotin, amfotericin B, trimetoprim, polymyxin B og vancomycin), er mediet som brukes til å isolere Campylobacter jejuni i avføringsprøver.

Forberedelse

Hvert kommersielle hus gir instruksjonene om å tilberede en liter kulturmedium på baksiden av beholderen. De tilsvarende beregningene kan gjøres for å forberede ønsket mengde, avhengig av valgt basagar.

Vei og oppløs

Basagaren er dehydrert (pulver), derfor må den oppløses i destillert vann justert til pH 7,3.

Mengden som er angitt av den valgte basagaren veies og oppløses i den tilsvarende mengden vann i en kolbe, deretter oppvarmes over moderat varme og blandes med roterende bevegelser til alt pulveret er oppløst..

Sterilisere

Når den er oppløst, steriliseres i en autoklav ved 121 ° C i 20 minutter.

Blodaggregat

Når du forlater autoklaven, får kolben avkjøles til temperaturen svinger mellom 40 og 50 ° C; Det er en temperatur som den menneskelige huden støtter, og samtidig har agaren ennå ikke størknet.

For å gjøre dette berøres kolben med hånden, og hvis varmen er tålelig, er det den ideelle temperaturen å tilsette tilsvarende mengde defibrinert blod (50 ml for hver liter agar). Bland forsiktig for å homogenisere.

Gjennomgangen av blodaggregasjon er avgjørende, for hvis det gjøres når mediet er veldig varmt, vil de røde blodcellene bryte ned og mediet vil ikke tjene til å observere hemolyse.

Hvis det blir tilsatt for kaldt, vil det oppstå klumper, og overflaten på mediet vil ikke være glatt for å gi riktig skåring..

Hell i petriskåler

Server i sterile petriskåler umiddelbart etter homogenisering av blodet. Ca 20 ml helles i hver petriskål. Denne prosedyren utføres i en laminær hette eller i nærheten av brenneren.

Når du serverer blodagar i petriskålene, skal det ikke være noen luftbobler på overflaten av platen. Hvis dette skjer, føres flammen til Bunsen-brenneren raskt over platen for å eliminere dem..

Platene får størkne og oppbevares i kjøleskap (2-8 ° C) invertert til bruk. Før du bruker blodagarplatene, må de herdes (får romtemperatur) for å kunne sås..

De tilberedte platene varer i omtrent 1 uke.

Referanser

  1. Bayona M. Mikrobiologiske forhold for dyrking av Helicobacter pylori. Pastor Gastroenterol 2013; 28 (2): 94-99
  2. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktisk klinisk mikrobiologi. University of Cadiz, 2. utgave. UCA Publications Service.
  3. "Blodagar." Wikipedia, The Free Encyclopedia. 10. des 2018, 14:55 UTC. 27. des 2018, 01:49 en.wikipedia.org.
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12. utg. Argentina. Redaksjonell Panamericana S.A.
  5. CEDIVET Laboratory Veterinary Diagnostic Center. Guatemala. Tilgjengelig på: trensa.com.
  6.  Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. (5. utg.). Argentina, redaksjonelt Panamericana S.A.

Ingen har kommentert denne artikkelen ennå.