De vismut sulfitt agar er et solidt, selektivt og differensielt kulturmedium, spesielt formulert for isolering av Salmonella enterica undergruppe enterica serotype Typhi, blant andre arter av Salmonella. Mediet er kjent som BSA-agar for dets akronym på engelsk Bismuth Sulfite Agar..
Den opprinnelige formelen for vismutsulfittagar ble opprettet i 1927 av Wilson og Blair (Glucose Bismuth Sulphite Iron Medium); Dette inneholdt natriumsulfitt, glukose, vismutoppløsning, ammoniumcitrat, jernholdig sulfat og agar-agar..
I dag er det en modifisering av det originale mediet, sammensatt av kjøttekstrakt, kjøtt- og kaseinpeptoner, vismutsulfittindikator, glukose, dinatriumfosfat, jernholdig sulfat, lysegrønn og agar-agar..
Det er mange midler for isolering av Salmonella-arter, men når det gjelder utvinning av Typhi-serotypen, har vismutsulfittagar en bemerkelsesverdig fordel i forhold til dem, siden det i de fleste tilfeller oppnås en veldig lav eller ingen utvinning av denne mikroorganismen..
Imidlertid er det nødvendig å bruke mer enn en type medium når man prøver å isolere enteropatogener, fordi vismutsulfittagar er mindre effektiv for andre Salmonella-arter og for Shigella-slekten, som er hemmet eller utvikler seg veldig dårlig. I denne agaren..
Det skal bemerkes at av alle Salmonella-arter er Typhi-serotypen en av de viktigste enteropatogenene hos mennesker, dette er det eneste reservoaret. Denne serovaren forårsaker tyfusfeber, gastroenteritt, bakteriemi og septikemi..
Av denne grunn er det aktuelt å inkludere denne agaren når man analyserer vann, avføring eller matprøver der det er mistanke om tilstedeværelse..
Artikkelindeks
Som de fleste kulturmedier inneholder Bismuth Sulfite Agar næringsstoffer for å fremme bakterievekst, som peptoner og kjøttekstrakt. På samme måte fungerer glukose som en kilde til energi og karbon..
Imidlertid vil ikke alle bakterier vokse på dette mediet, da Bismuth Sulfite Agar er et selektivt medium. Den inneholder forbindelser som hemmer veksten av Gram-positive mikroorganismer og visse Gram-negative bakterier. Disse forbindelsene er: indikatoren vismutsulfitt og lysegrønn.
Dinatriumfosfat opprettholder på sin side osmolaritet og pH i mediet.
I tillegg er vismutsulfittagar et differensialmedium takket være tilstedeværelsen av jernholdig sulfat, som viser dannelsen av HtoS. HtoS dannet av bakterier reagerer med jernholdig sulfat og danner et godt synlig uoppløselig svart bunnfall.
Til slutt gir agar-agar mediet solid konsistens..
Vei opp 52,3 g av det dehydratiserte mediet og oppløs det i en liter vann. Varm blandingen til å koke i 1 minutt med hyppig omrøring, til den er helt oppløst. Ikke overopphet for mye. Dette mediet autoklaveres ikke, da ekstrem varme skader kulturmediet..
La avkjøles til 45 ° C og ristes før servering i sterile petriskåler. Det anbefales å lage plater med god tykkelse. For dette må 25 ml helles i hver plate. La stivne. Siden det er et medium som ikke er sterilisert, er det normalt at dets umiddelbare bruk blir foreslått.
Imidlertid viste en studie utført av D'aoust i 1977 at det er bedre utvinning av Salmonella typhimurium Y Salmonella enteritidis som Bismuth Sulfite Agar Medium age, påvirkes ikke ytelsen for serovarer Typhi Y Paratyphi B.
D'aoust anbefaler å bruke platene på dag 4 i kjøling, selv om han advarer om at i middelalderen avtar selektiviteten og utvikler lettere stammer av Proteus vulgaris.
Av denne grunn er det for sterkt forurensede prøver, som avføring, å foretrekke å bruke det nylagede mediet. Bruk ellers på dag 4 av tilberedningen. Andre forfattere anbefaler å bruke platene dagen etter tilberedningen, lagret i kjøleskapet..
Kjølte plater må herdes før bruk. Mediumets pH bør være 7,5 ± 0,2. Fargen på råmediet er beige og det tilberedte mediet er grønngrått, opaliserende.
Blant prøvene som kan plantes i dette mediet er prøver av avføring, drikkevann eller avløpsvann og mat..
For å forbedre isolatene anbefales det å utføre en forberikende behandling med laktosekraft og etter berikelse med tetrakionatbuljong eller cystinselenittbuljong, før man sår på vismutsulfittagar..
Platene inkuberes ved 35 ° C ± 0,2 i 24 til 48 timer i aerobiose.
Koloniene i Salmonella Typhi de blir vanligvis sett på denne agaren innen 24 timer med et svart senter og omgitt av en lysegrønn glorie. Mens de i løpet av 48 timer blir helt svarte på grunn av dannelsen av hydrogensulfid.
Salmonella Paratyphi A den presenterer kolonier med varierende egenskaper. Etter 18 timers inkubasjon kan det observeres svarte, grønne eller gjennomsiktige kolonier med mucoid utseende. Mens de på 48 timer er helt svarte og noen ganger med en uttalt metallisk glans..
S. Paratyphi A har en tendens til å sverte miljøet rundt kolonien.
Salmonella sp viser svarte eller grønngrå kolonier, med eller uten metallisk glans, og kan eller ikke sverte omgivelsene.
Koliforme stammer er generelt fullstendig hemmet, men hvis de vokser, utvikler de seg som ugjennomsiktige grønne eller brune kolonier uten metallisk glans. Ikke flekk mediet rundt kolonien.
-Svært svake podestoffer kan forårsake kolonier av Salmonella Typhi lysegrønn i fargen, blir ubemerket og kulturen rapporteres som negativ.
- Bismuth Sulfite Agar kan hemme utvinningen av noen Salmonella arter som S. sendai, S. berta, S. gallinarum, S. abortus-equi.
-Dette mediet hemmer de fleste artene av slekten Shigella.
- S. Typhi og S. arizonae kan gi veldig like kolonier.
-Koliformer som produserer HtoS som Proteus og Citrobacter produserer kolonier som ligner på Salmonella, derfor er det nødvendig å utføre biokjemiske identifikasjonstester.
-God striping må gjøres for å oppnå isolerte kolonier; det er den eneste måten å observere de typiske egenskapene til kolonier av slekten Salmonella.
For sterilitetskontrollen inkuberes en uinokulert plate ved 37 ° C. Det forventes at det ikke er noen vekst eller fargeendring..
For kvalitetskontroll, kjente stammer som:
Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella Typhi ATCC 19430, Shigella flexneri ATCC 12022, Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Det forventes at Escherichia coli Y Shigella flexneri hemmes delvis ved å utvikle henholdsvis grønnbrune og brune kolonier. Mens begge salmonellas må ha en utmerket utvikling med svarte kolonier med metallisk glans, og til slutt Enterococcus faecalis må være fullstendig hemmet.
Ingen har kommentert denne artikkelen ennå.