De malonat buljong Det er det flytende dyrkningsmediet som brukes til diagnostisk test (malonat-test), brukt til å skille noen slekter av Enterobacteriaceae-familien. Den ble opprettet av Leifson i 1933 og senere modifisert av Ewing, som tilførte en liten mengde dekstrose og gjærekstrakt til den opprinnelige formelen..
Mediet består for tiden av gjærekstrakt, ammoniumsulfat, dikaliumfosfat, monokaliumfosfat, natriumklorid, natriummalonat, dekstrose og bromtymolblått. Denne testen er vanligvis inkludert i det biokjemiske identifikasjonsbatteriet for Enterobacteriaceae, og hjelper til med å skille visse slekter og arter..
Malonattesten er hovedsakelig basert på evnen til enkelte mikroorganismer til å bruke natriummalonat som eneste karbonkilde og ammoniumsulfat som nitrogenkilde..
Malonat-testen er vanligvis positiv hos noen arter av Enterobacter, Klebsiella og Citrobacter. Mens de fleste artene av slektene Escherichia, Salmonella, Shigella, Edwardsiella, Yersinia, Serratia, Morganella, Proteus og Providencia, gir negativ reaksjon.
Artikkelindeks
Malonattesten består av å vise de bakteriene som er i stand til å bruke natriummalonat som eneste karbonkilde og ammoniumsulfat som nitrogenkilde..
De fleste enterobakterier som ikke bruker malonat, er i stand til å vokse i dette mediet og tar dekstrose og gjærekstrakt som næringsstoffer..
I dette tilfellet vil ethvert forsøk på alkalisering ved bruk av peptoner motvirkes av produksjonen av syrer generert ved gjæring av dekstrose. På samme måte fungerer dikalium og monokaliumfosfater som en buffer og holder pH på 6,7.
Derfor, når testen er negativ, forblir buljongen den samme originale fargen (grønn). I sjeldne tilfeller kan mediet bli surt på grunn av dekstrose-gjæring; uten bruk av peptonene og pH-indikatoren ville det slå fargen på mediet mot gul. For at dette skal skje, må pH synke til 6.
Nå når denne testen er positiv, sies det at mikroorganismen brukte henholdsvis malonat og ammoniumsulfat som karbon- og nitrogenkilder uten å bruke de andre komponentene..
I dette tilfellet blir mediet alkalisk på grunn av frigjøring av natrium og den påfølgende dannelsen av NaOH. I denne forstand vender pH-indikatoren (bromtymolblått) fargen på mediet fra grønt til blått når pH er lik eller større enn 7,6. Blå kan være lys eller intens (preussisk blå).
Til slutt opprettholder natriumklorid mediumets osmolaritet, og vannet er fortynningsmiddelet til alle komponentene..
Samme fargebuljong (grønn) - negativ test
Gul buljong: negativ test
Lys eller dypblå buljong: test positivt
Det er en variant som kalles fenylalaninmalonatbuljong, også kalt Shaw og Clarkes medium. I dette tilfellet kan to tester analyseres, bruk av malonat som karbonkilde og produksjon av pyruvinsyre fra fenylalanin..
Antallet gram spesifisert av innsatsen til det valgte kommersielle selskapet veies (det kan variere fra ett til et annet). De veide gram er suspendert i en liter destillert vann. Varm opp litt til det er helt oppløst. Fordel 3 ml av mediet i 13/100 reagensglass med bomullshetter..
Steriliser i autoklav ved 121 ° C i 15 til 20 minutter.
Avkjøl før bruk. Hvis de ikke skal brukes umiddelbart, må du oppbevare dem i kjøleskap til bruk. Ta kjøttkraft til romtemperatur før du inokulerer.
Mediumets pH bør være 6,7 ± 0,2. Fargen på det tilberedte mediet er flaskegrønt.
Vei opp 11 g av det dehydratiserte mediet og oppløs det i 1 liter destillert vann. Resten av preparatet er det samme som tidligere beskrevet.
Det kan også fremstilles ved å tilsette 2 g / L fenylalanin til malonatbuljongmediet før det steriliseres..
Den brukes som en del av batteriet med biokjemiske tester som er samlet for å identifisere bakterier av Enterobacteriaceae-familien.
Hjelper med å skille mellom:
-Slekten Klebsiella og Enterobacter (+) av slekten Escherichia og Serratia (-).
-Arten av Salmonella enterica ssp arizonae, Salmonella enterica ssp salami og Salmonella enterica ssp diarizonae (+), av arten Salmonella enterica ssp enterica (-).
-Av slekten Klebsiella vanligvis (+) av slekten Actinobacillus (-).
-Noen ganger kan det hjelpe å skille mellom slekter og arter av bakterier som ikke tilhører Enterobacteriaceae-familien, for eksempel blant ikke-gjærende gramnegative stenger. Alcaligenes faecalis (+) og Acinetobacter sp (-).
Under en lighter tas en del av en ren cologne ved å bruke et riktig sterilisert og avkjølt platinahåndtak. Prøven som er tatt (lett inokulum) er oppløst i malonatbuljongen. Inkuber med lokket løst i aerobiose ved 35 ° C ± 0,2 i 24 til 48 timer.
Malonatbuljong kan også inokuleres fra en 18-24 timers kultur i trypticase soyabuljong. I dette tilfellet tas 0,01 ml med en steril pipette, og malonatbuljongen inokuleres. Inkuber med lokket løst i aerobiose ved 35 ° C ± 0,2 i 24 til 48 timer.
På slutten av tiden tolkes resultatene. Eventuelle spor av blå farge etter 48 timers inkubasjon bør betraktes som positive. Testen skal ikke tolkes som negativ før den inkubasjonstiden på 48 timer har gått..
Ved bruk av fenylalaninmalonatbuljongvarianten tolkes malonatet først, og deretter tilsettes 5 dråper 1 N HC1 og 3-5 dråper 8% jernklorid. En mørk grønn farge tolkes som en positiv test for fenylalanin. Hvis mediet tvert imot blir lyseblått, er testen negativ for fenylalanin..
For å utføre sterilitetskontroll av mediet, bør en eller to buljonger inkuberes ved 35 ° C ± 0,2 i 24 timers inkubasjon. Etter denne tiden bør det ikke være uklarhet eller fargeendring.
Kjente eller sertifiserte stammer kan brukes til kvalitetskontroll, for eksempel: Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 33945, Salmonella enterica ssp arizonae ATCC 13314 og Escherichia coli ATCC 25922.
De forventede resultatene er:
Ikke bruk buljong som viser uklarhet, utfelling, fargeforandring eller tegn på forverring.
Ingen har kommentert denne artikkelen ennå.