De bakteriell smøre er en tynn filmforlengelse av en suspensjon av bakterielle mikroorganismer som er laget på en gjennomsiktig glassplate eller lysbilde for observasjon under et optisk mikroskop.
Forlengelsen i form av en film utføres for å skille mikroorganismene så mye som mulig, siden observasjonen ikke er klar hvis de er gruppert.
I studien av bakteriekulturer brukes smørepreparering, fiksering og fargingsteknikker for å bedre analysere dem. På grunn av den lille størrelsen på mikroorganismer, er bruk av et optisk mikroskop nødvendigvis nødvendig for deres observasjon..
Optiske mikroskoper er uunnværlige instrumenter for å observere flekker. Disse bruker optiske linser og lys som tillater visning av prøvene med stor forstørrelse..
Generelt har levende celler ikke for det meste fargede strukturer, sett med lysmikroskopet er de fargeløse, gjennomsiktige prøver, og de viser veldig liten indre kontrast og med omgivelsene..
Observasjon med det enkle lysfeltoptiske mikroskopet, uten bruk av hjelpefargingsteknikker, er veldig begrenset og brukes bare i noen tilfeller, for eksempel i observasjon av bevegelsen av mikroorganismer..
For optimal observasjon av mikroorganismer, må en balansere mellom kontrast og oppløsning. Celledetaljer kan ikke sees under mikroskopet, selv med høy oppløsning; bruk av fargestoffer er nødvendig gjennom fargingsteknikker, som gir kontrast for observasjon.
Artikkelindeks
For å oppnå utmerket kontrast er det sofistikerte mikroskop som kalles fasekontrastmikroskop, differensialinterferensmikroskop og mørkfeltmikroskop. Denne typen mikroskop brukes til å observere bakteriestrukturer som kapper og filamenter, blant andre..
Farging er en enkel teknikk for å øke kontrasten som oppnås med et lysfeltmikroskop. I denne teknikken kan forskjellige fargestoffer brukes som forbedrer mikroskopisk observasjon betydelig..
Flekkene utføres direkte på flekker eller utvidelser av suspensjoner av mikroorganismer på lysbildene, tidligere tørket og fiksert..
Fiksering er en teknikk som brukes til å bevare cellestrukturer; forårsaker inaktivering av mikroorganismer og vedheft til glasset i lysbildet. Det finnes forskjellige fikseringsbehandlinger: varmefiksering og kjemisk fiksering.
Dette er den mest brukte metoden for å observere bakterieutstryk. Teknikken består i å føre bakteriesuspensjonen av smøret gjennom flammen til en lighter. Denne teknikken er i stand til å bevare bakteriens ytre morfologi, men ødelegger deres indre strukturer..
Kjemisk fiksering bruker konserveringskjemikalier, for eksempel formaldehyd eller formaldehyd, etanol og eddiksyre, blant andre. Fordelen med å bruke kjemiske fikseringsmidler er at bevaring av de indre mobilstrukturene til mikroorganismer oppnås..
De vanligste prosedyrene for farging av tidligere tørket og fast flekker er positiv eller enkel farging, differensialfarging og negativ farging. Det er også spesielle teknikker for farging av bestemte cellestrukturer (kapsel, spore, flagella).
Positiv eller enkel farging er den mest brukte smørefargingsteknikken. Den bruker fargestoffer som har evnen til å binde seg til visse mikrobielle strukturer, slik at de kan observeres under et mikroskop.
Disse fargestoffene har kromoforgrupper (farget del) i sin kjemiske struktur, med alternerende dobbeltbindinger og enkeltbindinger (konjugering). Disse bindingene kan i sin tur etablere ioniske eller kovalente bindinger med noen cellulære strukturer..
Flekkene som brukes i positiv eller enkel farging er for det meste kjemiske derivater av anilin (fargede organiske salter).
På den annen side kan vi blant fargestoffene finne noen med en grunnleggende pH og andre med en sur pH..
I grunnleggende fargestoffer har kromoforgruppen en positiv elektrisk ladning. De aller fleste prokaryote mikroorganismer har en nøytral indre pH, og celleoverflaten er negativt ladet. Gjennom denne elektrostatiske interaksjonen binder kromoforen seg til cellen og flekker den.
Eksempler på grunnleggende fargestoffer er blant annet metylenblått, krystallfiolett, malakittgrønt, basisk fuscin, safranin..
I syrefargestoffer har kromoforgruppen en negativ elektrisk ladning. Disse brukes til å flekke proteiner med positivt ladede aminogrupper. Eksempler på syrefargestoffer er syrefuscin, rosenbengal, Kongo rød og eosin.
Differensialfargingsteknikken består i å påføre to fargestoffer med forskjellig farge eller intensitet for å skille forskjellige mikroorganismer under mikroskopet. Gramflekk og syre-alkoholresistensflekk er de mest brukte differensialflekkene i bakteriologi.
Gram-flekken brukes som en foreløpig test for å kjenne form, størrelse, cellegruppering, samt typen cellevegg. Ved hjelp av Gram-flekkprøven blir celleveggbakterier klassifisert i Gram-positive bakterier og Gram-negative bakterier..
I denne teknikken brukes kjemiske fargestoffer som ikke trenger inn i celleinteriøret, men gjør mediet der mikroorganismene vises som en svart bakgrunn..
I den negative fargeteknikken blir smøret laget med en dråpe India-blekk eller nigrosinsuspensjon, som etter å ha tillatt tørking ved romtemperatur danner en film som er ugjennomsiktig for lysets passasje. På denne måten blir mikroorganismer sett på som lyse former på en mørk bakgrunn..
1.- Vask lysbildene veldig godt, tørk med absorberende papir og merk dem. Etiketten må angi innholdet i preparatet, datoen og navnet på personen som behandlet det..
2. - Tenn tenneren og steriliser inokulasjonssløyfen i flammen til den er rød.
3.- La håndtaket avkjøles.
4.- Ta bakteriekulturrøret, fjern hetten og pass raskt munnen på røret nær brenneren (flammen).
5.- Sett vaksinasjonssløyfen inn i røret som inneholder bakteriekulturen, og ta prøven.
6. - Hvis kulturen er i flytende medium, plasser prøven som er tatt med håndtaket i midten av lysbildet og fordel den forsiktig i en sirkel med en diameter på ca. 2 cm..
7. - Steriliser vaksinasjonssløyfen igjen.
8.- La smøre tørke i luften.
9.- Gjenta trinn 3 til 8 tre ganger.
10.- Hvis kulturen er i fast medium, må en dråpe destillert vann føres på lysbildet. Dette gjøres for å blande en liten prøve av kulturen tatt med inokulasjonssløyfen, som angitt i trinn 2 til 5 (aseptiske forhold).
11. - Spred den fortynnede prøven med vanndråpen på lysbildet og gjenta tre ganger.
1.- Tilsett to dråper metanol eller absolutt etanol til de tørre utstryk fra kultur i flytende medium..
2. - La lufttørke vekk fra tenneren.
3.- Hvis utstrykningen kommer fra en kultur på fast medium, blir den tørre utstrykningen fiksert med varme, og fører den 2 til 3 ganger raskt gjennom den varmeste delen av den lettere flammen..
4. - Berør den nedre delen av utstryket med ryggdelen av venstre hånd (for høyre hånd, ellers bruk høyre hånd) og sjekk at den er kald.
1.- Tilsett 2 dråper av den valgte flekken i smøret og la virke i den tid som kreves i de spesifikke protokollene for hver flekk (vanligvis mellom 1 og 5 minutter).
2.- Noen flekker krever bruk av varme for aktivering, i så fall må man være veldig forsiktig når man glir lysbildet i lysere flamme (manipuler det med en pinsett og unngå koking). En overoppheting av smøret kan ødelegge cellene som skal observeres..
3.- Fjern overflødig fargestoff ved å vaske med destillert vann fra en pikett. Fjern vaskevannet ved å banke forsiktig på lysbildet på kanten, vippet på arbeidsbordet.
4.- Tillat lufttørking.
5.- Avhengig av typen observasjon, brukes et dekkglass eller ikke på dette stadiet. Dekkglasset beskytter og bevarer smøret. Hvis en olje nedsenking observasjon er gjort på dette stadiet, brukes ingen dekkglass, men smøret kan ikke bevares.
1. - Senk utstrykingen suksessivt i hver av løsningene som er angitt nedenfor, i minst 5 minutter. Hensikten med disse "badene" er å la smøret være helt dehydrert. Hvert reagens skal dreneres godt før smøres i neste bad..
Rekkefølgen av dehydratiseringsbadene er som følger:
La deretter lufttørke.
2. - Monter dekkglass, fortrinnsvis 22 × 22 mm, med Canada balsam eller annet monteringsmedium.
Ingen har kommentert denne artikkelen ennå.