De orcein er en naturlig lilla farge, ekstrahert fra forskjellige lav som: orchilla eller urchilla, lichen fruticoso, Rocella tinctoria Y Lecanora parella hovedsakelig. De Rocella tinctoria Det finnes på det afrikanske og amerikanske kontinentet, selv om det kan erstattes av andre arter i Europa.
Denne flekken har blitt brukt mye i cytogenetiske studier siden antikken. I denne forstand ble orceinpreparatet som inkluderer eddiksyre introdusert av LaCourt i 1941, og derfor ble det opprinnelig kalt LaCourt-teknikken..
På grunn av sin enkelhet og lave kostnader har det også blitt brukt til fremstilling av lakmus (fargestoff ekstrahert fra lav) og i histologiske studier (farging av celler og vev)..
Flere studier har brukt denne flekken kombinert med andre kjemikalier, som ammoniakkpikrokarminat og eddiksyre, for å flekker henholdsvis elastiske fibre og kromosomer. For tiden fortsetter orcein å bli brukt i cytogenetiske studier av dyr og planter..
Nylig har Silva et al. 2017 brukte denne flekken med hell for å observere de forskjellige endringene som oppstår i de elastiske fibrene i tommelens hud hos chilenske eldre voksne. Denne studien avslørte hvordan tommelfibrene endres med aldring.
I denne forstand ble de elastiske fibrene observert å være brunsvarte i farger eldre enn 80 år; mens de i den yngste (fra 60 år) blir sett på som en rødbrun farge. Cytoplasma og andre cellestrukturer blir gulgrønne.
Dette tillot å bekrefte tilstedeværelsen og tilstanden til de elastiske fibrene, når det gjelder disposisjon, mengde og integritet. På den annen side har det også blitt påpekt at orcein er til stor hjelp for å identifisere aneurismer og diagnostisere arteritt, blant andre forhold.
Artikkelindeks
Orcein er en del av oksazin-gruppen av fargestoffer, og fargingen er basert på dens affinitet for DNA. Fargestoffet binder seg til den negative ladningen til dette molekylet, representert av fosfatgruppen. Det er derfor kromosomene er farget lilla.
Imidlertid får resten av cellens strukturer en annen farge. Spesielt når det gjelder elastiske fibre, er de farget rødbrune, cellekjerner fra blå til mørk lilla, mens kollagen ikke flekker.
Av denne grunn brukes orcein til å flekker kromatin og skille kjønn hos noen fluer. På samme måte kan kjerner og noen leverinneslutninger produsert av hepatitt B-antigener farges..
Orcein-løsninger har spesifikke funksjoner i farging. Orcein A har den funksjonen å myke cellemembranene, forårsake deres død og lamme prosessen med delingen. I mellomtiden har orcein B ansvaret for å fullføre fargeleggingen ved å klebe den til kromosomene..
For å fremstille en 1% oppløsning av aceto-orcein, oppløses 2 gram orcein i 45 ml iseddik, fortrinnsvis varm, og 55 ml destillert vann tilsettes ved romtemperatur..
Deretter blandes den konstant for å homogenisere løsningen, for senere å la den hvile til den avkjøles. Til slutt lagres den ved 4 ºC i mørke flasker. Dette preparatet ble brukt av Flores 2012 for å observere modningsfasene til ku-oocytter..
I dette tilfellet plasseres for eksempel aceto-orceinløsningen på vevet som tidligere var fiksert i eddiksyre-etanol i 24 timer. Denne fargeprosessen utføres i 30 minutter, og vevet blir deretter misfarget..
På samme måte kan den brukes til identifisering av organeller i flercellede vev. I dette tilfellet farges et utstryk av bukkal slimhinne med en dråpe av aceto-orceinløsningen, dekkglasset plasseres på lysbildet og umiddelbart kan cellens kjerne med dens understell observeres.
I tillegg kan orcein fremstilles med andre kjemikalier som melkesyre og propionsyre. For å gjøre dette oppløses ett gram orcein i en forblandet løsning ved romtemperatur på 23 ml melkesyre og 23 ml propionsyre; fyll opp volumet med destillert vann opp til 100 ml.
Med denne laktopropioniske orceinløsningen er det mulig å observere de forskjellige fasene av meiotisk deling av planteceller. I dette tilfellet plasseres den forhåndsfikserte og hydrolyserte prøven i 15 minutter i den laktopropioniske orceinløsningen, og deretter spres vevet på objektglass..
I Duques 2016-studie om polyetenkromosomer brukte han et preparat av 2 gram orcein fortynnet i eddiksyre og 85% melkesyre, fortynnet med en 65% eddiksyreoppløsning. Til slutt så han på kromosomene i spyttkjertlene i Drosophila melanogaster.
Det er viktig å merke seg at avhengig av prøven og hva som skal evalueres, blir den rette orceinløsningen utarbeidet. Således tilsettes for eksempel 1 N saltsyre til orcein A-løsningen for å observere delende celler..
Mens orcein B-løsningen er oppløst i 45% eddiksyre. Denne teknikken er en forkortet fargemetode og brukes vanligvis som et supplement til farging av kromosomstrukturer..
Siden århundrer siden, i land på det amerikanske kontinentet som Argentina, kan du få lav som: Lecanora, Parmelia Y Umbilicaria, som er gode kilder til orcein. Også europeiske områder som Kanariøyene var på den tiden store produsenter av orkillaen.
Dette ble eksportert til andre byer på samme kontinent som Genova og land som England, mens Holland monopoliserte produksjonen av lakmus fra orkillaen. Så senere ble denne lav redusert til den var i ferd med å bli utryddet.
Dette førte til at orkillaen ble erstattet av andre planter med fargestoffegenskaper. Imidlertid bidro fremveksten av syntetiske fargestoffer til avslutningen av handelen med denne lavkilden til orcein..
Dette var mulig takket være Cocq, som i 1812 beskrev syntesen av orcein, og visste da at den ble syntetisert av en fenolforbindelse kalt orcinol. Til tross for dette er naturlig orcein for tiden fortsatt det foretrukne.
Dette kan være fordi orcinol er en veldig luktende forbindelse hvor langvarig eksponering kan medføre helserisiko, for eksempel tap av evne til å oppdage lukt. Disse skadene på hypofysen kan gå fra midlertidig til permanent, jo større eksponering..
Ingen har kommentert denne artikkelen ennå.