De xanthoprotein reaksjon er en kjemisk prosedyre som brukes til å bestemme tilstedeværelsen eller fraværet av aromatiske aminosyrer, slik som tyrosin og tryptofan, som kan være i fri form eller utgjør løselige proteiner, peptider eller polypeptider.
Det har også blitt brukt til å oppdage giftige stoffer i blodet som inneholder en benzengruppe i strukturen. Denne testen er også kjent som xanthoprotein Becher-reaksjonen..
Xanthoprotein-reaksjonen bruker konsentrert salpetersyre, varme og en nøytraliserende alkali. Hvis løsningen blir fra gul til oransje når reaksjonen nøytraliseres, anses testen som positiv. Den observerte fargen skyldes dannelsen av nitrogenforbindelser avledet fra nitrifisering av benzengrupper.
Hvis mengden totalt protein må kvantifiseres, er det nødvendig å bruke andre proteinbestemmelsesmetoder, for eksempel Biuret..
Xanthoprotein-reaksjonen brukes hovedsakelig når stoffer hvis kjemiske sammensetning ikke er kjent blir analysert. Denne reaksjonen er vanligvis en del av et sett med tester som vil bidra til å bestemme den kjemiske sammensetningen av et bestemt stoff eller ekstrakt. Det er derfor det er mye brukt av forskere.
På den annen side brukes Becher xanthoprotein-reaksjonen for å oppdage fenol- og indolstoffer i blodet, noe som gjør det mulig å forutsi utseendet til nefropati, før andre senere parametere økes..
Artikkelindeks
Reaksjonen oppdager i utgangspunktet tilstedeværelsen av benzen-gruppen, både i aminosyrer, så vel som i proteiner og peptider. Salpetersyre virker på benzenringen av aminosyrer som har den, og danner fenoliske nitroforbindelser.
Reaksjonen trenger varme for å bli utført, generelt dannes et bunnfall som skyer mediet og gjør det melkaktig. Bunnfallet kan være hvitt eller gult. Til slutt krever det et alkaliseringstrinn som fremhever fargen. For dette brukes en base som 40% natriumhydroksyd eller ammoniakk..
Reaksjonen vil bli tolket som positiv hvis en sterk gul farge observeres under oppvarmingsprosessen eller mørk oransje når reaksjonen blir alkalisk. Aminosyrene den oppdager er hovedsakelig tyrosin og tryptofan.
I tilfelle fenylalanin, selv om det er en aromatisk aminosyre, er benzenkjernen til denne aminosyren vanskelig å bli nitrert i en enkel reaksjon, derfor vil den avgi enten en negativ eller svak positiv reaksjon.
Generelt kan xanthoprotein-testen suppleres med Hopkins-Cole-testen, som brukes til å spesifikt identifisere tryptofan. Hvis xanthoprotein-testen er positiv og Hopkins-Cole-testen er negativ, er tilstedeværelsen av tryptofan i den løsningen utelukket, og peker på tilstedeværelsen av tyrosin. På samme måte kan det også suppleres med Millon-reaksjonen for påvisning av tyrosin, blant annet..
Denne reaksjonen kan også brukes på prøver av blod, plasma eller desalbuminert serum for diagnostisering av uremi eller nyresvikt. I dette tilfellet er det det søkes å oppdage giftige stoffer (fenol og indol) produsert av tarmforråtnelse..
Disse stoffene har benzengruppen og gir derfor en positiv xantoproteinreaksjon, selv om det reagerende stoffet verken er en aminosyre eller et protein..
Plasser 1 ml av prøven i et rent, tørt reagensglas.
-Tilsett 0,5 ml konsentrert salpetersyre.
-Inkuber blandingen i et vannbad ved 70 ° C i 2 minutter. Forbered vannbadet tidligere ved den nevnte temperaturen.
-Når du fjerner røret fra vannbadet, er det mulig å observere at løsningen har blitt melkeaktig og har fått en viss gulhvit farge..
-Løsningen blir avkjølt ved å slippe kaldt vann i bunnen av røret..
-Preparatet gjøres alkalisk ved langsomt å tilsette (dråpe for dråpe) en 40% natriumhydroksydoppløsning til det er en fargeendring.
-Hvis testen er positiv, vil det dannes en mørk oransje ring ved væskegrensesnittet..
-Hvis reaksjonen er negativ, blir det ingen fargedannelse.
-Tilsett 5 cc 20% trikloreddiksyre på 5 cc venøst blod, plasma eller serum, hvor sistnevnte er den mest angitte. Bland godt og filtrer.
-2 ml av filtratet tas og blandes med 0,5 ml salpetersyre. Deretter varmes det opp til koking, for dette plasseres røret direkte over den lettere flammen i 30 sekunder. Den avkjøles med vann, og 1,5 natriumklorid 33% tilsettes..
Det tolkes slik:
-Negativt resultat: gulaktig farge.
-Positivt resultat (+) sitrongul.
-(++) gylden gul.
-(+++) mørk gul til brun
Det kan også tolkes ved hjelp av en referensiell Autenrieth kolorimetrisk skala, bestående av forskjellige konsentrasjoner av kaliumdikromat. Dette fremstilles i 10 til 10 fortynninger fra en 0,03874% stamløsning. Hvert rør representerer en prosentandel.
Det er to skalaer for tolkning kalt eldgammel og moderne. De normale verdiene er:
Gammelt bord: mellom 75 og 85%
Moderne bord: mellom 15 og 25%
Hvis fargen på prøverøret er midt i to standardrør, gjøres et gjennomsnitt mellom de to målingene.
Kaliumdikromat-standardløsningen fremstilles som følger: 7,9 ml 10 N kaliumdikromat måles og fylles opp til 100 ml i en målekolbe. For fortynningene, følg som vist i den kolorimetriske tabellen Autenrieth..
Bruken av xanthoprotein-reaksjonen er en del av et sett med biokjemiske tester som hjelper deg å kjenne den kjemiske sammensetningen av noe ukjent stoff. Denne testen bidrar til den kjemiske analysen påvisning av proteiner som inneholder benzengrupper i strukturen..
Denne reaksjonen er mye brukt av forskere i forskjellige studier av stoffer av interesse..
I denne forstand brukte Vásquez-Jorge og samarbeidspartnere denne og andre reaksjoner for å undersøke proteininnholdet i væsker ekstrahert fra mangroveøstersen. (Crassostrea rhizophorae).
På samme måte brukte Rojas et al. (2009) en serie tester, inkludert xanthoprotein-reaksjonen, for å analysere glykomakropeptider i ricotta-myseutfeller..
På den annen side ble Becher xanthoprotein-reaksjonen modifisert av Volhard for å brukes til andre formål. I dette tilfellet, for påvisning av fenol- og indolstoffer som kan stige mye tidligere (uker eller måneder) før nivåene av urea og gjenværende nitrogen i blodet øker..
Disse giftige avfallene dannes fra tarmens forråtnelse av maten.
Disse stoffene akkumuleres i blodet når de ikke elimineres riktig, og derfor kan en positiv xanthoprotein-test forutsi den tidlige begynnelsen av riktig nyresvikt eller en tilstand av uremi..
Avhengig av intensiteten til fargen, kan du bestemme hvor avansert den er. I dette tilfellet er testen kvantitativ.
Hos friske mennesker gir denne testen en svak gul farge, tilsvarende de normale nivåene av tryptofan og tyrosin som kan være i blodet..
Mens nyrepasienter er xantoproteinreaksjonen sterkt positiv på grunn av tilstedeværelsen av følgende stoffer: fenol, indol, parakresol, aromatiske oksysyrer, blant andre.
Denne testen må utføres av faglærte fagfolk. Alle biosikkerhetsbestemmelser må vurderes, siden reagensene som brukes er etsende syrer og baser..
Hvis det ved et uhell faller noen dråper salpetersyre på huden eller neglene, blir de gule siden begge strukturene inneholder proteiner. I tillegg forårsaker det alvorlige forbrenninger på huden og slimhinnene.
Hvis hudkontakt oppstår, bør fremgangsmåten være å vaske området umiddelbart med såpe og vann i omtrent 20 minutter..
Hvis det spruter i øynene, bør det vaskes med rikelig med ferskvann og prøve å holde øynene åpne..
Ingen har kommentert denne artikkelen ennå.