De Benedikts reagens er en blåaktig løsning av kobber som brukes til å oppdage tilstedeværelsen av reduserende sukkerarter: aldehyder, alfa-hydroksy-ketoner og hemicetaler. Den ble utviklet av Stanley R. Benedict (1884-1936).
Alfa-hydroksy-ketonsukker er karakterisert ved å ha en hydroksylgruppe i nærheten av ketonet. I mellomtiden er en hemiketal en forbindelse som skyldes tilsetning av en alkohol til et aldehyd eller keton. Benedikts reagens reagerer vilkårlig med alle disse reduserende sukker.
Benedikts metode er basert på reduserende virkning av sukker på Cuto+, av blå farge, som forvandler den til Cu+. CU+ danner et murrødt bunnfall av kopperoksyd. Avhengig av konsentrasjonen av sukker, vises det imidlertid et spekter av farger (øvre bilde).
Merk at hvis Benedict's reagens tilsettes et reagensglass uten å redusere sukker (0%), gjennomgår det ikke noen endring i den blålige fargen. Når konsentrasjonen er høyere enn 4%, blir prøverøret således farget brun..
Artikkelindeks
Reagenset ble opprettet av den amerikanske kjemikeren Stanley Rossiter Benedict i 1909, som publiserte sitt vitenskapelige papir Et reagens for påvisning av reduserende sukker, i tidsskriftet J. Biol. Chem.
Videre publiserte Lewis og Benedict (1915) en metode for bestemmelse av reduksjon av sukker i blod ved bruk av pikrat som en indikator; men sluttet å bli brukt på grunn av manglende spesifisitet.
Benedikts reagens er veldig lik Fehlings. De skiller seg ut ved at Benedict bruker sitrationet og natriumkarbonatsaltet; mens Fehling bruker tartration og natriumhydroksid.
Benedict-testen er kvalitativ, det vil si at den bare oppdager tilstedeværelsen av reduserende sukker. Imidlertid kan Benedikts reagens være kvantitativ hvis den har kaliumtiocyanat i oppløsning, som danner et hvitt bunnfall av kobbertiocyanat som kan titreres ved bruk av glukosestandarder..
Benedict-reagenset brukes fortsatt til å oppdage tilstedeværelsen av glukose i urinen og er en indikasjon på diabetes sykdom hos pasienten, hvis urin blir utsatt for Benedict-testen eller -testen. Selv om det ikke kan utelukkes at glukosuri har en annen opprinnelse.
For eksempel er økt glykosuri i tilstander som: graviditet, primær nyreglykosuri, nyretubulær acidose, primær eller sekundær Fanconis syndrom, hyperaldosteronisme og akutt pankreatitt eller kreft i bukspyttkjertelen..
Benedikts reagens er blå på grunn av tilstedeværelsen av Cuto+, som er redusert til Cu+ ved å redusere sukker; i dette tilfellet, glukose, og danner et mursteinrødt kobber (I) oksidutfelling.
Fargen og dannelsen av bunnfallet i Benedict-testen påført urin varierer avhengig av konsentrasjonen av det reduserende sukkeret. Hvis glukosekonsentrasjonen i urinen er mindre enn 500 mg / dL, blir løsningen grønn og det dannes ikke noe bunnfall.
En glukosekonsentrasjon i urinen på 500 - 1000 mg / dL forårsaker et grønt bunnfall i Benedict-testen. Ved en konsentrasjon større enn 1000 til 1500 mg / dL forårsaker det dannelsen av et gult bunnfall.
Hvis glukosekonsentrasjonen er 1500 - 2000 mg / dL, vil det sees et oransje bunnfall. Til slutt er en konsentrasjon av glukose i urinen større enn 2000 mg / dL, det vil føre til dannelse av et mursteinrødt bunnfall..
Dette indikerer at Benedict-testen har en semi-kvantitativ karakter, og resultatet rapporteres ved hjelp av kryss. Således tilsvarer for eksempel dannelsen av et grønt bunnfall et kryss (+); og dannelsen av et mursteinrødt bunnfall tilsvarer fire kryss (++++).
Benedikts reagens oppdager tilstedeværelsen av reduserende sukker som har en fri funksjonell gruppe eller en fri keton-funksjonell gruppe, som en del av deres molekylære struktur. Dette er tilfellet med glukose, galaktose, mannose og fruktose (monosakkarider), samt laktose og maltose (disakkarider).
Sukrose og stivelse reagerer ikke med Benedikts reagens fordi de har gratis reduserende grupper. I tillegg er det forbindelser som forstyrrer Benedict-testen i urinen, noe som gir falsk positivitet; slik er tilfellet med salisylat, penicillin, streptomycin, levodopa, nalidiksyre og isoniazid.
Det er kjemikalier i urinen som kan redusere Benedict-reaksjonen; for eksempel: kreatinin, urat og askorbinsyre.
Komponentene i Benedikts reagens er som følger: kobbersulfatpentahydrat, natriumkarbonat, trinatriumcitrat og destillert vann..
Kobbersulfat pentahydrat, CuSO45HtoO, inneholder Cuto+: er forbindelsen som gir Benedikts reagens den blå fargen. Reduserende sukker virker på Cuto+, produserer sin reduksjon til Cu+ og dannelsen av et bunnfall av kobberoksyd (CutoO) mursteinrød.
Natriumkarbonat genererer et alkalisk medium som er nødvendig for at reduksjonen av kobber skal finne sted. Natriumkarbonat reagerer med vann, og genererer natriumbikarbonat og hydroksylionen, OH-, ansvarlig for alkaliniteten i mediet som er nødvendig for at den reduktive prosessen skal skje.
Natriumsitrat danner et kompleks med kobber (II) som forhindrer at det gjennomgår en reduksjon til Cu (I) under lagring.
5 ml av Benedict's reagens blir plassert i et 20 x 160 mm reagensrør, og det tilsettes 8 dråper urin. Testrøret ristes forsiktig og legges i en beholder med kokende vann i 5-10 minutter..
Etter denne tiden fjernes røret fra varmtvannsbadet og overflaten avkjøles med rennende vann for å endelig få avlesningen av resultatet når du utfører Benedict-testen (fargene).
Reduksjonen av Cu (II) under Benedict-testen kan skisseres som følger:
RCHO + 2 Cuto+ (i kompleks) + 5 OH- => RCOO- + CutoO + 3 HtoELLER
RCHO = aldehyd; RCOO- = (karboksylation); CutoO = kobberoksid, et mursteinrødt bunnfall.
173 gram natriumcitrat og 100 gram natriumkarbonat veies ut og oppløses sammen i 800 ml varmt destillert vann. Hvis det blir observert spor av uoppløste stoffer, må løsningen filtreres.
På den annen side oppløses 17,3 gram kobbersulfatpentahydrat i 100 ml destillert vann..
Deretter blandes de to vandige oppløsninger forsiktig og fortsettes under permanent omrøring, hvorved det oppnås opptil 1000 ml med destillert vann..
Ingen har kommentert denne artikkelen ennå.