De kapsel flekker er en differensiell fargeteknikk som har egenskapen til å markere polysakkaridstrukturen som omgir visse bakterier og gjær som kalles kapsel. Den brukes i kliniske laboratorier for å diagnostisere visse patologier forårsaket av kapslede mikroorganismer..
Det brukes også i undervisningslaboratorier for demonstrasjon av denne morfologiske strukturen til studenter innen helsevitenskapskarrierer, for eksempel: medisin, bioanalyse, sykepleie eller cytoteknologi, blant andre..
Det er flere enkle teknikker for å demonstrere tilstedeværelsen av kapselen i mikroorganismer som har den, disse er: den negative flekken, Anthony-flekken og en variant som kombinerer de to foregående.
Negativ farging brukes hovedsakelig i CSF-prøver når det er mistanke om gjær. Cryptococcus neoformans. Denne gjæren er en vanlig årsak til hjernehinnebetennelse.
Denne teknikken bruker nigrosin eller India-blekk og er basert på å skape en kontrast mellom bakgrunnen for preparatet og den ugjennomtrengelige kapselen til mikroorganismen. Bakgrunnen blir mørk og kapselen er fargeløs. På denne måten fremheves denne strukturen.
Når det gjelder Anthony-teknikken, kan det sies at den mest brukes i undervisningslaboratorier for å demonstrere polysakkaridstrukturen i bakterier som Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pneumoniae Y Neisseria meningitidis.
Bruk av denne teknikken til diagnostiske formål er svært sjelden, siden det er andre rutinemessige tester som tillater identifisering av disse mikroorganismer..
Artikkelindeks
Kapslen er en sterk struktur av polysakkarid-natur. Dette beskytter mikroorganismer mot fagocytose, og er derfor en vanskelig struktur å trenge gjennom.
Det er derfor kapsel flekker er basert på kontrast. Fargestoffene flekker bunnen av preparatet mens kapselen forblir fargeløs.
Derfor er kapselen lett gjenkjennelig med disse teknikkene. Hvis mikroorganismen ikke har en kapsel, kan den ikke skilles fra denne typen fargestoffer, fordi alt vil bli farget i samme farge..
Alle teknikkene som brukes til å fargelegge kapselen har samme begrunnelse til tross for at de bruker forskjellige fargestoffer og prosedyrer..
Anthony's flekken bruker krystallfiolett som en flekk. Dette vil flekker bakteriekroppen og bakgrunnen lilla.
På den annen side brukes 20% kobbersulfat. Dette fungerer som en vaskeoppløsning, det vil si at den fjerner overflødig fiolett krystall fra preparatet, noe som gjør kapslene klare, men uten å miste fargen på bakteriekroppen eller bakgrunnen..
- Iriserende melk.
- Mikroskop lysbilde.
- 1% fiolett krystall.
- 20% kobbersulfat.
- Optisk mikroskop.
- Nedsenkingsolje.
Denne teknikken består av:
Det er viktig å ikke bruke varme hverken til å fikse eller tørke, da dette skader kapselen. Vask heller ikke med vann.
Iriserende melk er et utmerket dyrkningsmedium, da det gir næringsstoffene som er nødvendige for at mikroorganismen kan utvikle en fremtredende kapsel.
På den annen side vil den iriserende melken danne en tykk og kompakt bunn som vil bli farget lilla sammen med bakteriekroppen, men kapselen som omgir mikroorganismen vil forbli fargeløs. Derfor observeres en klar glorie rundt bakteriekroppen..
Det er en enkel teknikk å utføre. Ingen reparasjon nødvendig.
På samme måte skal det bemerkes at andre kulturmedier kan brukes, men melkemediet er foretrukket fordi det har fordelen at det gir mer fremtredende kapsler..
Det er en litt mer arbeidskrevende teknikk enn negativ farging, og visualiseringen krever at man venter på at preparatet tørker helt..
- Mikroskop lysbilder.
- Kulturmedium med mikroorganismen.
- Kinesisk blekk eller nigrosin.
- Optisk mikroskop.
- Fysiologisk saltløsning.
Plasser en dråpe fysiologisk saltvann på dekkglasset og oppløs en liten del av den mikrobielle kulturen. Det er viktig at preparatet ikke er for tykt. Legg deretter en dråpe kinesisk blekk eller nigrosin og bland.
Et dekkglass legges deretter over preparatet uten å flyte over væsken. Det observeres under mikroskopet ved først å fokusere på et 10X-mål og deretter flytte til 40X.
Denne teknikken kan også brukes direkte på CSF-prøver. Det vil si at i stedet for å plassere en dråpe mikrobiell kultur, plasseres en dråpe CSF.
Det er en enkel metode å utføre og samtidig billig. Krever ikke fiksering eller tørking av preparatet.
Det har ulempen at det må observeres under et mikroskop før preparatet tørker, for hvis dette skjer vil mikroorganismene trekke seg sammen, noe som vil gjøre visualisering vanskelig..
På den annen side kan falske positive oppstå hvis analytikeren er uerfaren, siden leukocytter ofte forveksles med gjær..
Observasjon av gjærkapsler med kinesisk blekk eller nigrosin-teknikk bør betraktes som en formodet diagnose av Cryptococcus neoformans til det demonstreres med kulturen.
Dette er fordi det er andre gjær som kan være årsaken til hjernehinnebetennelse og ikke bare Cryptococcus neoformans, slik som slekten Candida og Rhodotorula, så vel som andre arter av Cryptococcus.
Hvis det er kapslede mikroorganismer, vil en mørk bakgrunn bli observert, med gjennomsiktige kropper som flyter i væsken, og fremhever tilstedeværelsen av kapselen..
Denne teknikken kan også gjøres med nigrosin. Det er en kombinasjon av tidligere forklarte teknikker. Denne teknikken bruker krystallfiolett og indisk blekk eller nigrosin.
Bakteriekroppen blir lilla fra krystallfioletten fordi den er negativt ladet, mens nigrosin farger bunnen av smøret. Hvis bakterien har en kapsel, vil den fremstå som en gjennomsiktig glorie rundt mikroorganismen..
Krystallfiolett kan erstattes av noen av disse fargene: safranin, grunnleggende fuchsin eller metylenblått.
- Fiolett glass.
- Nigrosin eller indisk blekk.
- Mikroskop lysbilder.
- Mikroskop.
- Dyrke mikroorganismen i et kulturmedium.
- Legg en dråpe av kulturen på enden av et lysbilde, og ved siden av, legg en dråpe krystallindia-blekk eller nigrosin, bland og spred med enden av et annet lysbilde..
- Lufttørk og ikke varm.
- Dekk til med en krystallfiolett løsning i 1 minutt, vask med destillert vann, men veldig delikat (mild strøm), la det lufttørke.
- Observer under et mikroskop med et nedsenkningsmål. Søk mot endene av spredningen.
En fiolett farget bakteriekropp og en mørk bakgrunn vil bli sett. Kapslen, hvis den er tilstede, vil fremstå fargeløs rundt bakteriene.
Ingen har kommentert denne artikkelen ennå.