De hematoksylin-eosin flekk er en fargeteknikk som bruker kombinasjonen av hematoksylin- og eosinfargestoffer. Dette paret fargestoffer er en perfekt duo, ettersom hematoksylin fungerer som et grunnleggende fargestoff og eosin er et surt fargestoff..
Betegnelsen av basiske eller sure fargestoffer refererer ikke til pH-verdien de oppnår i løsning, men snakker snarere om den rådende andelen i form av de anioniske eller kationiske ladningene de besitter eller av plasseringen av kromoforgruppen..
I denne forstand betraktes hematoksylin som et grunnleggende (kationisk) fargestoff og har derfor en affinitet for syrestrukturer, slik som cellens kjerne. Mens eosin, som er et surt (anionisk) fargestoff, har en affinitet for alkaliske eller basiske strukturer, for eksempel cellecytoplasma.
Av denne grunn er denne kombinasjonen av fargestoffer mye brukt for vevsfarging, da det gjør det mulig å skille kjerner og cytoplasmer tydelig. Kjerner flekker mørkeblå eller lilla og cytoplasma rosa.
Hematoxylin-eosin-farging er en av de mest brukte fargeteknikkene innen histologi og cytologi, på grunn av den enkle håndteringen og lave kostnadene. Den brukes til visualisering av celler, tykke nervefibre og tilstedeværelsen av visse mikroorganismer i vevet, for eksempel: parasitter, sopp og bakterier, blant andre.
Artikkelindeks
Hematoksylin er et nøytralt fargestoff. Imidlertid er komponenten som gir fargen (kromoforen) plassert i det kationiske eller basiske sentrum av molekylet. Derav dens tilknytning til syrestrukturer. Dens kjemiske formel er C16H14ELLER6 og dets vitenskapelige navn 7,11b-dihydroindeno [2,1-c] kromen-3, 4,6a, 9,10 (6H) -pentol.
Det flekker hovedsakelig cellene, siden de er veldig rike på nukleinsyrer. Det kan også flekker cytoplasmatiske inneslutninger av viral opprinnelse.
For at hematoksylin skal flekke, må det være i oksidert tilstand og bundet til et metall. Sistnevnte vil tjene til å fiksere til vevet, det vil si at det vil fungere som en mordant.
Når hematoksylin oksideres, kalles det hematin. Oksidasjon oppnås ved eksponering for oksygen (aldring) av reagenset eller av stoffer som hjelper oksidasjonen (kjemisk oksidasjon).
Eosin er et fargestoff som flekker rødt eller rosa. Det er uoppløselig i vann, selv om det er en vannløselig versjon. Generelt fremstilles eosin ved å oppløse i alkohol (95 ° etanol).
Det flekker cytoplasmer, muskelfibre, cytoplasmatiske organeller og kollagen, men flekker ikke cellekjerner. Dette er fordi den er negativt ladet, derfor har den en affinitet for positivt ladede strukturer..
Det er to typer eosin "Y" og "B". Eosin "Y" er kjent som gul eosin. Dens vitenskapelige navn er tetrabromo ores uorescein og dets kjemiske formel er CtjueH8Br4ELLER5.
På den annen side blir eosin "B" noen ganger referert til som blåaktig erytrosin B. Dens vitenskapelige navn er dibromodinitro ores uorescein og formelen er CtjueH8BrtoNtoELLER9. Begge er veldig like, og forskjellen mellom å bruke den ene eller den andre er ikke merkbar. Imidlertid er den mest populære eosin "Y".
Eosin har egenskapen til å skille mellom en levende celle og en død, da den bare er i stand til å krysse membranen for å flekke cytoplasma når celler er døde, og etterlate cellens cytoplasma fargeløs hvis den forblir i live.
Med hematoksylin-eosin kan tykke nervefibre farges og identifiseres. Det er imidlertid ikke nyttig for farging av de tynne nervefibrene, siden det kreves sølvfarging for å visualisere sistnevnte..
I farging av det kåte laget av huden er fargestoffet eosin, siden cellene ikke har en kjerne på dette nivået.
I det granulære laget av huden flekker hematoksylin sterkt keratohyalinkornene inne i granulcellene. Tvert imot er det spinøse laget av huden svakt farget med hematoksylin, mens basal- eller kimlaget er flekket nok.
Eosin flekker cytoplasmaet til alle celler, og intensiteten av fargen kan variere fra ett lag til et annet..
Gómez et al., I 2005 demonstrerte at hematoxylin-eosin-farging var mer effektiv i å identifisere tilfeller av amoebiasis pga. Entamoeba histolytica Y Entamoeba dispar enn den nye visualiseringsmetoden (saltvann og lugol) hos pasienter med akutt diarésykdom.
Det har også vist seg å være svært følsomt for å oppdage erytrofagocytose (amøber som har oppslukt erytrocytter).
Walwyn et al., I 2004 foreslo bruk av histologiske flekker for å oppdage infeksjonsfremkallende mikroorganismer.
Ved å bruke hematoksylin-eosin-farging klarte de å visualisere infeksjoner forårsaket av Clostridium, Actinomyces, spirillae eller Candida. De klarte også å observere tilstedeværelsen av parasitten Sarcoptes escabiei i hudseksjoner og virale inneslutninger av cytomegalovirus og herpes i seksjoner av forskjellige vev.
Histologisk snittfarging går gjennom en rekke trinn. Det første er å få tak i den histologiske seksjonen. Dette må vokses for senere å få kuttene (ultrafin) med en mikrotom. Teknikken består av følgende trinn:
1-Eliminering av overflødig parafin: for dette kan du bruke xylol eller Heme-D, senk i 3-5 minutter.
2-Rehydrering av prøven: Dette oppnås ved å senke prøven i forskjellige konsentrasjoner av alkoholer (etanol) i synkende rekkefølge (100 °, 90 °, 70 °). I alle tilfeller i 7 minutter.
3-eliminering av overflødig alkohol: for å gjøre dette, er det nedsenket i vann i 7 minutter.
4-farging med hematoksylin: prøven blir senket i 6-10 minutter i et brett som inneholder hematoksylin. Eksponeringstiden avhenger av størrelsen og tykkelsen på prøven..
5-eliminering av overflødig hematoksylin: Den vaskes med vann i 5 minutter, og deretter utføres en rask passering (10-20 sekunder) gjennom sur alkohol. Senere vaskes den med vann igjen i 5 minutter. Deretter senkes den i etanol ved 96 ° i 1 minutt.
6-farging med eosin: for dette blir prøven nedsenket i 5 minutter i eosinbrettet.
7-dehydrering av prøven: for dette blir alkoholbrettene (etanol) ført gjennom igjen, men denne gangen i stigende rekkefølge. (70 °, 90 °, 100 °). (I henholdsvis 5 sekunder, 5 sekunder, 1 minutt).
8-Avklaring av prøven: for dette utsettes den for xylol i 5-10 minutter og tørkes for å forsegles permanent med Canada balsam eller annet lignende materiale.
Det smøres med avføringen til pasienten på et lysbilde og festes med 80% alkohol i 5 minutter. Arket senkes ned i hematoksylin i 5 minutter og vaskes umiddelbart med vann..
Deretter blir den raskt nedsenket i sur alkohol og deretter i ammoniakkvann. Den vaskes med vann. Den er farget i 5 minutter i eosin. Prøven blir dehydrert som forklart i kjent teknikk og til slutt skylles den med xylen.
I en liter destillert vann oppløses 50 gram kalium eller ammoniumaluminiumsulfat. Når den er helt oppløst, tilsett 1 gram krystallisert hematoksylin. Ved fullstendig oppløsning tilsettes 1 g sitronsyre sammen med 50 g klorhydrat og 0,2 g natriumjodat..
Blandingen kokes i 5 minutter, får deretter avkjøles og filtreres for å fjerne eventuelle faste partikler som har blitt igjen. Reagenset som er fremstilt på denne måten kan brukes umiddelbart.
Den kan tilberedes med en alkoholholdig base eller med en vannbase.
I 100 ml etanol ved 95 ° C oppløses 0,5 gram eosin "Y". Tilsett deretter noen dråper iseddik.
I 1250 ml destillert vann oppløses 25 gram vannløselig eosin "Y". Tilsett deretter noen dråper iseddik.
Mål 0,5 ml konsentrert saltsyre og fyll opp til 100 ml med absolutt alkohol.
Mål 0,5 ml konsentrert ammoniakk og fyll opp til 100 ml med destillert vann.
Ingen har kommentert denne artikkelen ennå.