Chocolate agar foundation, bruksområder og tilberedning

4284
Jonah Lester

De sjokoladeagar Det er et solid, beriket, ikke-selektivt og ikke-differensielt kulturmedium. Den brukes hovedsakelig til isolering av krevende mikroorganismer fra ernæringsmessig synspunkt, selv om alle typer bakterier kan vokse i den..

Det er grunnen til at dens brukbarhet øker spesielt ved såing av prøver som normalt er sterile, slik som CSF og leddvæske. Selv om det også er inkludert i det valgte middel for såing av polymikrobielle prøver, men i disse tilfellene er det nødvendig med tilsetning av antibiotika som hemmer den samtidig floraen..

Sjokoladeagar med bakterievekst

Dette mediet har en karakteristisk brun farge veldig lik sjokolade, derav navnet. Preparatet ligner veldig på blodagar, bare i dette tilfellet må blodet varmes opp for at de røde blodcellene skal brytes ned..

Dens tilberedning, som blodagar, er veldig delikat, da den lett forurenses. Av denne grunn foretrekker mange laboratorier å anskaffe dette mediet som allerede er utarbeidet av kommersielle selskaper som garanterer kvaliteten..

Artikkelindeks

  • 1 Begrunnelse
  • 2 bruksområder
    • 2.1 Sjokoladeagar tilberedt med Columbia-agar
    • 2.2 Sjokoladeagar tilberedt med GC-basagar (for gonokokker)
    • 2.3 Sjokoladeagar tilberedt med Müeller Hinton-agar
    • 2.4 Sjokoladeagar tilberedt med Thayer Martin-agar
  • 3 Klargjøring
    • 3.1 Beregninger
    • 3.2 Vei og oppløs
    • 3.3 Sterilisere
    • 3.4 Blodaggregering
    • 3.5 En annen måte å tilberede sjokoladeagar uten å bruke blod
  • 4 Kvalitetskontroll
  • 5 Referanser

Basis

Dette mediet består av en næringsrik agarbase og oppvarmet blod. Hemolyse av røde blodlegemer gir faktor X (hemin) og faktor V (NAD), nødvendig for vekst av noen mikroorganismer, som slekten Haemophilus. Det er også veldig nyttig for å isolere Neisserias sp.

I likhet med blodagar kan forskjellige medier brukes som basagar, avhengig av behovet. Blant mediene som brukes er hjerneinfusjon og trypticase-soyagar, selv om de mest anbefalte er Columbia-agar, Müeller Hinton, GC-agar og Thayer Martin-agar..

Noen varianter av sjokoladeagar inkluderer et kommersielt tilgjengelig forsterket supplement kalt Isovitalex eller Polivitex..

Disse kosttilskuddene inneholder vitamin B12, L-glutamin, adenin, guaninhydroklorid, p-aminobensoesyre, nikotinamidadenindinukleotid (NAD), tiaminpyrofosfat, jernnitrat, tiaminhydroklorid, cysteinhydroklorid, L-cystin og glukose.

Det er viktig å merke seg at sjokoladeagar er mer beriket enn blodagar, men det tillater ikke observasjon av hemolysemønstre..

applikasjoner

Kilde: pixnio.com. Forfatter:
Pete Seidel, Amanda Moore, MT, Todd Parker, PhD, Audra Marsh, USCDCP

Sjokoladeagar tilberedt med Columbia-agar

Dette mediet inneholder fordøyelse i bukspyttkjertelen av kasein og hjerte, peptisk fordøyelse av kjøtt, natriumklorid, agar, gjærekstrakt og maisstivelse. Den er også rik på vitaminer, mineraler og essensielle aminosyrer.

Denne oppvarmede blodbasen er ideell for isolering av bakterier av slekten Neisseria. På den annen side, hvis et supplement for Brucella i tillegg tilsettes mediet, kan den nevnte mikroorganismen isoleres. Resultatene forbedres ved bruk av hesteblod.

Sjokoladeagar tilberedt med GC-basagar (for gonokokker)

Dette mediet inneholder peptoner, maisstivelse, monobasiske og dibasiske buffere, natriumklorid og agar..

De fleste kommersielt tilberedte sjokoladeagarpresentasjoner kommer med denne basen og inneholder ikke oppvarmet blod, men i stedet en syntetisk blanding av hemin og et kjemisk supplement av vekstfaktorer, vitaminer, mineraler, aminosyrer, faktor V og glukose..

Sjokoladeagar tilberedt med Müeller Hinton-agar

Det brukes til å utføre antimikrobiell følsomhetstesting av tøffe mikroorganismer, for eksempel Streptococcus pneumoniae ved bruk av 5% oppvarmet ramblod.

Den brukes også til primærisolering av Neisserias og Haemophilus, men i det spesielle tilfellet med isolasjon av Haemophilus Bruk av hesteblod foretrekkes, da det er en rik kilde til faktor X og V.

På den annen side, hvis prøven som skal sås kommer fra et ikke-sterilt område, anbefales tilsetning av antibiotika for å hemme den normale floraen i området..

Eksempel på luftveisprøver der det er mistanke om tilstedeværelse av bakterier i slekten Haemophilus Bacitracin brukes til å hemme veksten av Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus og saprofytiske Neisserias.

Når det gjelder prøver på kjønnsskorre, der det mistenkes Haemophilus ducreyi, En sjokoladeagar fremstilt som følger er vellykket brukt: Müeller-Hinton-agar med 5% sjokoladebestemt hesteblod, 1% Isovitalex-anrikning og 3 µg / ml vankomycin.

Sjokoladeagar tilberedt med Thayer Martin-agar

Dette mediet er spesielt for isolering av Neisseria gonorrhoeae. Den må inneholde antibiotika for å hemme den tilhørende floraen. Lamblod brukes.

Forberedelse

Du bør se indikasjonene for klargjøring av basagar som skal brukes. De finnes på baksiden av beholderen til det dehydratiserte mediet. De beskriver generelt hvor mye du må veie for å tilberede en liter kulturmedium.

I laboratoriet kan den nøyaktige mengden som trengs tilberedes, den kan være mer eller mindre enn en liter.

Beregninger

En regel på tre brukes til å beregne hvor mye du skal veie for å forberede ønsket volum. Eksempel:

Hvis det er nødvendig å veie 40 g for 1 liter og laboratoriet krever 800 ml, sies det:

1000 ml -40 gr

800 ml - X

Formelen vil være som følger:

X = 32 gr (mengde som skal veies i 800 ml).

Vei og oppløs

Den nødvendige mengden veies og plasseres i en kolbe sammen med vannet.

Varm opp på moderat varme og bland forsiktig med roterende bevegelser til det dehydratiserte mediet oppløses helt, og la det koke i 1 minutt..

Sterilisere

Kolben plasseres i autoklaven for å sterilisere mediet ved 121 ° C i 20 minutter..

Blodaggregat

Når du forlater autoklaven, la den hvile til temperaturen på mediet er omtrent mellom 56 og 70 ° C for å plassere blodet og bland til mediet blir brunt..

Hvis du legger til kosttilskudd, er det på tide å gjøre det. Bland deretter og server 20 ml til hver steril petriskål.

Hele prosedyren bør gjøres i en laminær hette eller rundt Bunsen-brenneren..

La stå til det er solid og oppbevar omvendt i kjøleskapet.

En annen måte å tilberede sjokoladeagar uten å bruke blod

Basemediet fremstilles som beskrevet ovenfor, det kommersielt oppnådde dehydratiserte hemoglobinet oppløses og steriliseres i autoklaven..

Begge løsningene får avkjøles til 50 ° C, sammenføyes og tilsetningen tilsettes. Bland under aseptiske forhold og server deretter i sterile petriskåler..

QA

Det er viktig at blodet plasseres ved den angitte temperaturen, da det er det ideelle å lysere de røde blodcellene og samtidig opprettholde faktor V, som er temperaturfølsom..

Ingen bobler skal være igjen på overflaten av agaren. Fra hver sats på 100 plater, skal en eller to plater inkuberes i ovnen ved 37 ° C i 24 timer for å kontrollere steriliteten..

For best resultat bør sjokoladeagar brukes kort tid etter tilberedning..

Kontrollbakteriestammer bør oppbevares i laboratoriet for å evaluere effekten av det ferske mediet for vekst av de viktigste kjedelige mikroorganismer av klinisk betydning..

Referanser

  1. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktisk klinisk mikrobiologi. University of Cadiz, 2. utgave. UCA Publications Service.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12. utg. Argentina. Redaksjonell Panamericana S.A.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. (5. utg.). Argentina, redaksjonelt Panamericana S.A.
  4. Llanes R, Reyes A, Rodríguez C, Guzmán D, Llop A. Mulighet for å bruke GC-Biocen Agar basedyrkningsmedium i Microbiology Laboratory. Rev Cubana Med Trop,  2004; 56 (3): 237-238. Tilgjengelig på: scielo.sld.
  5. Wikipedia-bidragsytere. Sjokoladeagar. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 17. desember 2018, 19:54 UTC. Tilgjengelig på: en.wikipedia.org.

Ingen har kommentert denne artikkelen ennå.