De TSI agar o Triple Sugar Iron Agar er et solid kulturmedium som fungerer som en biokjemisk test for å lede den første identifikasjonen av gramnegative basiller. Den er basert på å vise gjæringen av det tilstedeværende sukkeret, og produksjonen av hydrogensulfid og gass.
Sammensetningen og grunnlaget ligner veldig på Kligler-jerntesten, med den forskjellen at sistnevnte bare inneholder glukose og laktose. På den annen side inneholder - som navnet antyder - trippel sukkerjernagar tre gjærbare karbohydrater: glukose, laktose og sukrose..
I tillegg har TSI-mediet fire proteinderivater som gjør det til en veldig næringsrik agar: gjærekstrakt, kjøttekstrakt, pepton og proteosepepton. Inneholder også jernholdig ammoniumsulfat, natriumtiosulfat, natriumklorid, fenolrødt og agar.
Manglende evne til en mikroorganisme å gjære glukosen som er tilstede i mediet, utelukker den umiddelbart fra å tilhøre Enterobacteriaceae-familien. Derfor er denne testen viktig for å bestemme hvilken identifikasjonsrute du skal ta for å bestemme slekten og arten..
Hvert laboratorium bestemmer om de skal arbeide med TSI-agar eller med Kligler jernagar..
Artikkelindeks
Hver av forbindelsene oppfyller en funksjon i mediet.
Natriumklorid er nødvendig for å opprettholde den osmotiske balansen i mediet. Mens agaren gir den solid konsistens.
PH i det tilberedte mediet er balansert ved 7,3, og pH-indikatoren (fenolrød) blir gul under 6,8. Dette betyr at små mengder syrer produsert ved gjæring av sukker vil gjøre mediet fra rød-oransje til gult..
Hvis gjæring ikke forekommer, vil det være alkalisering av mediet ved bruk av peptoner, og blir fra rød-oransje til sterk rød.
Når bakterier metaboliserer proteinene som er tilstede i TSI-agar, blir det produsert aminer som alkaliserer mediet (hovedsakelig på skrånivå), fordi reaksjonen krever oksygen. Aminer gjør rammen lys rød.
Men dette vil avhenge av bakteriens evne til å gjære karbohydrater eller ikke..
Studiet av gjæring av sukker kan gi flere bilder, og hver og en tolkes forskjellig. Testtolkningen deler mikroorganismer i 3 kategorier: glukose-ikke-gjærere, laktose-ikke-gjærere og laktose / sukrose-gjærere..
Det skal bemerkes at mengden glukose i mediet er begrenset, mens konsentrasjonen av laktose og sukrose er 10 ganger høyere..
Bakterier av Enterobacteriaceae-familien og andre glukosefermenterende mikroorganismer vil begynne å gjære dette sukkeret, da det er det enkleste karbohydratet for energi..
På den annen side er laktose og sukrose komplekse karbohydrater som må brytes ned og omdannes til glukose for at de skal komme inn i Embden-Meyerhof-syklusen..
Når den inokulerte mikroorganismen ikke er i stand til å gjære glukose, vil mye mindre være i stand til å gjære andre karbohydrater. Derfor dannes ingen syrer her, men det er dannelse av aminer i fasingen på grunn av bruk av peptoner.
I dette tilfellet blir rammen til en sterkere rød og bunnen av røret kan forbli uendret, eller det kan også være alkalisert, slik at hele røret blir rødt..
Tolkning: K / K betyr alkalisk skrå / alkalisk eller nøytral bunn
På bildet i begynnelsen av artikkelen se bildet av rør D.
Dette resultatet indikerer at mikroorganismen ikke tilhører Enterobacteriaceae-familien..
Hvis bakteriene er i stand til å gjære glukose, men ikke laktose eller sukrose, vil følgende skje:
Bakteriene vil konsumere all glukosen som er tilstede etter ca. 6 til 8 timer, og være i stand til å forsure både skråningen og blokken; agaren vil ha blitt helt gul. Men når glukosen er utarmet og manglende evne til å bruke laktose og sukrose, vil bakteriene begynne metabolismen av proteiner.
Denne reaksjonen trenger oksygen, derfor forekommer nedbrytning av peptoner på overflaten (skrå). De produserte aminene alkaliserer rammen og blir fra gul til rød. Denne reaksjonen er påvist etter 18 til 24 timers inkubasjon..
Tolkning: K / A betyr alkalisk skråkant og syre.
På bildet i begynnelsen av artikkelen, se bildet av rør B.
Mikroorganismer som er i stand til å gjære laktose og sukrose, kan åpenbart gjære glukose. Etter at den minste mengden glukose som er tilstede i mediet er oppbrukt, begynner det dannede pyruvat å metabolisere for å danne syrer gjennom den aerobe Krebs-syklusen, og i løpet av 8 til 12 timer vil alt mediet være gult.
Hvis bakteriene er i stand til å bryte ned laktose eller sukrose, vil syrer fortsette å produseres, og etter 18 til 24 timer vil hele røret - skrå og plug - fortsette å gulne.
Det skal bemerkes at bruken av glukose utføres på to måter: en aerobt ved skråningen av røret og den andre anaerobt i bunnen av røret..
Tolkning: A / A betyr sur skrå / syrebunn. Kan presentere gass eller ikke.
På bildet i begynnelsen av artikkelen se bildet av rør A.
Noen mikroorganismer er i stand til å produsere gass under gjæring av sukker. Gassen fremgår av røret av trykket den utøver i agaren. Trykket forårsaker dannelse av bobler eller forskyvningen av agaren. Noen ganger kan gassdannelsen ødelegge mediet.
Det er viktig at når du sår TSI-mediet, blir punkteringen gjort rent gjennom midten av agaren til den når bunnen. Hvis punkteringen avledes mot rørets vegger, kan det forårsake falske positive effekter i produksjonen av gassen, siden den vil rømme gjennom den feil dannede kanalen..
Gassproduksjonen, så vel som reaksjonene som oppstår i agarfasingen, trenger oksygen, derfor anbefales det at røret dekkes med en bomullsplugg, og hvis en Bakelite-hette brukes, bør den ikke være helt tett..
Gassproduksjon rapporteres som positiv (+) eller negativ (-).
Bakterier som er i stand til å produsere hydrogensulfid (fargeløs gass) tar opp svovelet fra natriumtiosulfat som er tilstede i mediet. Når HtoS reagerer med jernholdig ammoniumsulfat og produserer jernsulfid (godt synlig svart bunnfall).
Produksjonen av HtoS rapporteres som positiv (+) eller negativ (-).
På bildet i begynnelsen av artikkelen, se bildet av rør C.
Vei 62,5 g av dehydrert trippel sukker jernagar (TSI) medium og oppløs i en liter destillert vann..
Varm opp til agaren er helt oppløst. Kok i et minutt, rør ofte. Fordel 4 ml av mediet i 13/100 reagensglass med bomullshetter.
Steriliser i en autoklav ved 121 ° C i 15 minutter. Fjern fra autoklaven og la den hvile i en vinkel. Det må tas hensyn til at både sokkelen og rammen har samme avstand.
Oppbevares i kjøleskap 2-8 ° C. La det varme opp før du sår bakteriestammen.
Fargen på det dehydratiserte mediet er lysebeige og det tilberedte mediet er rød-oransje.
Den endelige pH-verdien til det tilberedte mediet er 7,3 ± 0,2.
TSI-testen er mye brukt på mikrobiologisk laboratorienivå. Denne testen er viktig for å styre hvilken type test som må brukes for å oppnå identifikasjon av slekten og arten. Den gode utførelsen og tolkningen kan spare materiale og arbeid.
Hvis resultatet er en TSI K / K og cytokromoksydasetesten er positiv, er det kjent at tester skal brukes til identifisering av ikke-gjærende gramnegative stenger, som Pseudomonas, Alcaligenes, Achromobacter, Burkholderia, blant andre slekter. Hvis det er oksidase-negativt, er det orientert mot slektene Acinetobacter, Stenotrophomonas, etc..
På den annen side, hvis en TSI A / A eller K / A oppnås og cytokromoksidasetesten er negativ, jo flere nitrater reduseres til nitritter, vil vi være sikre på at det er en mikroorganisme som tilhører Enterobacteriaceae-familien. I dette tilfellet vil identifikasjonsveien fokusere på spesifikke tester for denne gruppen av bakterier..
På den annen side, hvis et K / A- eller A / A-bilde oppnås og cytokromoksydasetesten er positiv, vil de ekstra testene som skal settes sammen, være rettet mot identifisering av gjærende stammer som ikke tilhører Enterobacteriaceae-familien, slik som som: Aeromonas, Plesiomonas, Vibrio og Pasteurella.
En TSI med hydrogensulfid, oksidase-negativ, vil lede identifikasjonen av følgende slekter av Enterobacteriaceae-familien: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella eller Salmonella.
En TSI med lite eller moderat hydrogensulfid i den alkaliske skråningen med en alkalisk bakgrunn og en positiv oksidase, vil lede bruken av tester for identifisering av ikke-gjærende gramnegative basiller som produserer HtoJa, akkurat som Shewanella putrefaciens.
Til slutt kan TSI brukes til undersøkelse av hydrogensulfidproduksjon i Gram-positive basiller, spesielt når det er mistanke om Erysipelothrix rhusiopathiae.
TSI-mediet må inokuleres med rene kolonier, isolert i primære eller selektive kulturer. Hvis kolonien er hentet fra selektive medier som ble sådd med prøver med blandet flora, bør man være forsiktig med å ta bare fra overflaten, siden levedyktige stammer som er hemmet i det mediet, kan eksistere i den nedre delen av kolonien..
Derfor bør sløyfen aldri avkjøles på et selektivt medium for senere å ta kolonien og inokulere et TSI-medium..
Såingen vil bli gjort med en rett løkke eller nål. En punktering vil bli gjort, og pass på at den er gjennom midten av midten til den når bunnen, og så blir såingen fullført ved å inokulere overflaten i sikksakkform. Ikke gjør to punkteringer.
Inkuber ved 37 ° C i aerobiose i 18-24 timer. Tolk i denne tiden, verken før eller etter.
TSI-testen skal leses innen 18 til 24 timer etter inkubasjon. En avlesning før denne tiden kan gi en falsk positiv for A / A-gjæring. Mens en avlesning etter denne tiden kan gi opphav til et falskt negativt bilde av en ikke-gjæringsmiddel, på grunn av forbruket av peptoner som alkaliserer mediet..
Ingen har kommentert denne artikkelen ennå.