De lentivirus, fra latin lenti som betyr treg, de er virus som krever lang tid, mellom måneder og år, fra den første infeksjonen til sykdomsutbruddet. Disse virusene tilhører slekten Lentivirus og retrovirus (familie Retroviridae), som har et RNA-genom som transkriberes til DNA ved revers transkriptase (TR).
I naturen er lentiviruses tilstede i primater, hovdyr og katter. For eksempel er det i primater to fylogenetisk relaterte linjer: simian immundefektvirus (SIV) og humant immunsviktvirus (HIV). Begge er årsaksmidler for ervervet immunsvikt syndrom (AIDS).
Lentivektorer, hentet fra lentivirus, har blitt mye brukt til grunnleggende forskning innen biologi, funksjonell genomikk og genterapi..
Artikkelindeks
Livssyklusen til alle retrovirus begynner med kroppens binding til en spesifikk reseptor på celleoverflaten, etterfulgt av internalisering av viruset gjennom endocytose..
Syklusen fortsetter med fjerning av virusbelegget og dannelsen av et viralt nukleoproteinkompleks (VNC), som består av virusgenomet assosiert med virale og cellulære proteiner. Sammensetningen av komplekset endres over tid og er relatert til konvertering, av TR, av inntrengerens genom til en DNA dobbel helix.
Integreringen av virusgenomet med cellen vil avhenge av virusgenomets evne til å trenge gjennom vertskjernen. VNC-omorganisering spiller en viktig rolle i import til kjernen, selv om viktige cellulære proteiner også spiller en rolle, slik som transportin-SR2 / TNPO3, importin-alpha3 og importin7.
Virale proteiner, som integrase, og transkripsjonsfaktorer for vertsceller, slik som LEDCF, er nøkkelen til integrasjonen av virusgenomet.
Den bruker vertscellemaskineriet til å transkribere og oversette virale proteiner og til å montere virioner, frigjøre dem til det ekstracellulære rommet..
Retrovirusgenomet har tre åpne leserammer (MLA) for de forskjellige virale elementene. For eksempel kapsidia og matrise (gen knebling), enzymer (gen pol) og konvolutt (gen env).
Konstruksjonen av en virusvektor består av eliminering av noen gener av villviruset, slik som de som er relatert til virulens. På denne måten kan en virusvektor infisere eukaryote celler, retro-transkribere, integrere i genomet til verts-eukaryote celle og uttrykke transgenet (innsatt terapeutisk gen) uten å forårsake sykdom..
En metode for lentivektorkonstruksjon er transient transfeksjon. Den er basert på bruk av virale minigenomer (kalt konstruksjoner) som bare bærer gener av interesse. Transient transfeksjon består av uavhengig levering av konstruksjoner.
Noen retrovektorer har bare hovedelementer for samling av viruspartikler, kalt ikke-funksjonelle retrovektorer. De brukes til å transfisere emballasjeceller.
Vektorer med en transgen ekspresjonskassett er i stand til å infisere, transformere celler (transduksjon) og uttrykke transgenet..
Bruken av separate konstruksjoner er ment å unngå rekombinasjonshendelser som kan gjenopprette villtypen fenotype..
Lentivector-teknologi er mye brukt i grunnleggende biologi og translasjonsstudier for stabil transgenoverekspresjon, stedstyrt genredigering, vedvarende gendemping, stamcellemodifisering, transgen dyregenerering og stamcelleinduksjon.
Lentivektorer er enkle å håndtere og produsere systemer. De er irreversibelt og sikkert integrert i vertsgenomet. De infiserer celler som er eller ikke deler seg.
De viser tropisme mot visse vev, og letter terapi. De uttrykker ikke virale proteiner, derfor har de lav immunogenisitet. De kan sende komplekse genetiske elementer.
I grunnleggende forskning har HIV-baserte lentivektorer blitt brukt som interferens-RNA-leveringssystemer (RNAi) for å eliminere funksjonen til et spesifikt gen, og dermed tillate studiet av interaksjonen med andre forskjellige..
På begynnelsen av 1990-tallet ble de første lentivektorene bygget fra HVI-1, som er nært beslektet med sjimpanse SIV. LVH-1 er ansvarlig for AIDS over hele verden.
Den første generasjonen av lentivektorer har en betydelig del av HIV-genomet. Inkluderer gener gal Y pol, og flere ekstra virale proteiner. Denne generasjonen ble opprettet ved hjelp av to konstruksjoner. En av dem, som uttrykker Env, leverer emballasjefunksjonene. En annen uttrykker alle MLAer, med unntak av Env.
Overføringsvektoren består av en ekspresjonskassett merket med to typer lange repetisjoner (LTRer) og gener som er nødvendige for emballering og omvendt transkripsjon..
Andre generasjon av pakningsvektorer mangler flertallet av tilbehørsgener og beholder Tat og Rev. Disse genene ble fjernet i tredje generasjon og levert av en fjerde konstruksjon..
Tredje generasjons overføringsvektorer er sammensatt av to emballasjekonstruksjoner. En koder gal Y pol. Andre koder rev. En tredje konstruksjon koder konvolutten, som er avledet fra VSV-G. Den som koder genet av interesse inneholder inaktiverte LTR lentivirale sekvenser for å forhindre rekombinasjon.
I sistnevnte tilfelle øker de transkripsjonelle regulatoriske elementene ytelsen til overføringsgenene..
HIV-2-viruset er nært beslektet med den grå magabey SIV (SIVYE), og er ansvarlig for AIDS i Vest-Afrika. Første og andre generasjons vektorer er blitt hentet fra dette viruset..
I likhet med HVI-1, fra SIVYE, Tregenerasjonsvektorer er konstruert av EIAV (equine infectious anemia virus), FIV (feline immunodeficiency virus) og BIV (bovine immunodeficiency virus (BIV). Vektorer basert på EIAV er utviklet for bruk klinisk.
Første og tredje generasjons vektorer er konstruert fra caprine arthritis-encefalitis virus (CAEV). Mens førstegenerasjonsvektorer er konstruert fra SIV til den afrikanske grønne apen.
Ingen har kommentert denne artikkelen ennå.