Kinyoun flekker begrunnelse og teknikker

3162
Jonah Lester
Kinyoun flekker begrunnelse og teknikker

De Kinyoun flekk er en fargeteknikk som brukes til å flekker syrefaste bakterier og parasitter. Den ble født av modifiseringen av Ziehl-Neelsen-fargen; Begge teknikkene tolkes på samme måte, men skiller seg i to elementer: i utarbeidelsen av hovedreagenset og ved at Kinyoun-teknikken ikke bruker varme.

Av denne grunn er det også kjent som kaldmodifisert Ziehl-Neelsen eller Kinyoun kald flekk. Det er indikert for farging av Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium leprae, atypiske mykobakterier, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris Y Cyclosporas cayetanensis.

Cryptosporidium parvum farget med Kinyoun-flekk. Punlop Anusonpornperm [CC BY 4.0 (https://creativecommons.org/licenses/by/4.0)], fra Wikimedia Commons

Det er verdt å merke seg at Nocardia flekker svakt med denne teknikken, siden de er delvis syre-alkoholresistente, så for denne slekten er det en modifikasjon av metoden.

I sin tur har den kalde Kinyoun-teknikken blitt kombinert med trichrome-teknikken modifisert av Didier for påvisning av coccidia (Cryptosporidium parvum og Isospora belli) og mikrosporidiasporer (Enterocytozoon bieneusi Y Encephalitozoon intestinalis).

Artikkelindeks

  • 1 Begrunnelse
  • 2 Teknikk
    • 2.1 Materialer
    • 2.2 Klargjøring av Kinyoun's carbol fuchsin
    • 2.3 Fremstilling av syre-alkohol
    • 2.4 Fremstilling av metylenblått kontrastfargestoff
    • 2.5 Kinyoun flekker teknikk
    • 2.6 Spesiell Kinyoun-teknikk for nokardier
    • 2.7 Kombinert carbol fuchsin og trichrome teknikk modifisert av Didier
    • 2.8 Kvalitetskontroll
  • 3 Kinyoun-teknikk sammenlignet med Ziehl-Neelsen-teknikken
  • 4 Referanse

Basis

Hovedfargingsreagenset er karbolfuchsin eller karbolfuchsin, som har egenskapen til å binde seg til de karbolsyre som finnes i den voksagtige celleveggen, rik på lipider (mykoliske syrer) av mykobakterier og visse parasitter..

Denne bindingen motvirkes ikke av syreblekemiddelet; derfor er mikroorganismer definert som syre-alkoholresistente.

I motsetning til Ziehl-Neelsen-teknikken - som fikser fargestoffet gjennom varme - er dette trinnet i Kinyoun-teknikken ikke nødvendig, siden carbol-fuchsin-løsningen som er fremstilt for denne teknikken inneholder en høy konsentrasjon av fenol..

Fenol løser opp lipidmaterialet i celleveggen, slik at karbolfuchsinfargestoffet kommer inn. Etter at fargestoffet trenger inn, forblir det fast til tross for vasking med syrealkoholen.

På denne måten får syrebestandige mikroorganismer den karakteristiske røde fargen, mens alt som ikke er syreresistent alkohol blir misfarget og farget blått..

Teknikk

Materialer

- Modifisert carbol fuchsin.

- Alkohol-syre.

- Metylenblått.

Klargjøring av Kinyoun Carbol Fuchsin

- Grunnleggende fuchsin: 4 gr.

- Fenol: 8 ml.

- Alkohol (95%): 20 ml.

- Destillert vann: 100 ml.

Den grunnleggende fuchsinen skal oppløses sakte i alkoholen og blandes kontinuerlig. Deretter smeltes den krystalliserte fenolen i et vannbad ved 56 ° C. Når det er oppløst, tilsettes 8 ml til fuchsin-oppløsningen fremstilt ovenfor.

Fremstilling av syre-alkohol

- Konsentrert saltsyre: 3 ml.

- Etanol (95%): 97 ml.

Den må måles, skjøtes og blandes.

Fremstilling av metylenblått kontrastfargestoff

- Metylenblå: 0,3 g.

- Destillert vann: 100 ml.

Den veies og oppløses.

Kinyoun fargeteknikk

1- Forbered en smøre direkte fra prøven, som kan være sputum, lungevæske, urinsediment, cerebrospinalvæske eller avføring, blant andre; eller fra en suspensjon av mikroorganismer oppnådd fra rene kolonier utviklet i primærkulturmedier.

2- Fest smøret med varme.

3 - Plasser utstryk på flekkerbroen og dekk til med det forberedte Kinyoun carbol fuchsin-reagenset. La den hvile i 3 eller 5 minutter.

4- Vask med destillert vann.

5- Blek med sur alkohol i 3 minutter og vask igjen med destillert vann.

6- Blek igjen med syrealkohol i 1 eller 2 minutter til det ikke blir mer fargelegging.

7- Vask med destillert vann og la det renne av, og plasser lysbildet i vertikal stilling.

8- Dekk preparatet med metylenblått og la virke i 4 minutter.

9- Vask med destillert vann og la det lufttørke.

10- Undersøk ved 40X og deretter på 100X.

Hvis du vil forbedre og påskynde fargingen av syreaktive mikroorganismer, tilsett 1 dråpe fuktemiddel (for eksempel Tergitol nr. 7) til 30 eller 40 ml Kinyoun Carbol Fuchsin.

Noen laboratorier endrer metylenblått kontrastfarge til lysegrønn eller pikrinsyre; den første gir en grønn farge til bakgrunnen og den andre genererer en gul farge.

Spesiell Kinyoun-teknikk for nocardias

For å forbedre farging av bakterier av slekten Nocardia, brukes en modifikasjon av Kinyoun-flekken. Teknikken er som følger:

1- Dekk utstrykingen med Kinyoun carbol fuchsin i 3 minutter.

2- Vask med destillert vann.

3- Misfarg kort med sur alkohol tilberedt med 3% til det ikke blir farget mer.

4- Vask igjen med destillert vann.

5- Dekk preparatet med metylenblått og la stå i 30 sekunder.

6- Vask med destillert vann og la det lufttørke.

Kombinert carbol fuchsin og trichrome teknikk modifisert av Didier

Denne teknikken anbefales for analyse av avføringsprøver for coccidia og sporer av Microsporidium sp samtidig. Fremgangsmåten som skal følges er som følger:

1- Dekk utstrykingen med Kinyoun carbol fuchsin i 10 minutter.

2- Fjern fargestoffet og vask med destillert vann.

3- Blek i 30 sekunder med saltsyrealkohol.

4- Vask igjen med destillert vann.

5- Dekk utstryk med trikromoppløsning i 30 minutter ved 37 ° C.

6- Vask med destillert vann.

7- Blek i 10 sekunder med eddiksyrealkohol.

8- Vask smøret i 30 sekunder med 95% etanol.

QA

Som en positiv kontroll tilberedes flekker med stammer av Mycobacterium tuberculosis og flekk med de tilberedte reagensene for å verifisere at bakteriene tar riktig farge (rød-fuchsia).

Negative kontroller kan også brukes til å forberede utstryk med en hvilken som helst belastning som ikke er syrefast, og dermed verifisere at hele prøven får den kontrasterende fargen..

Kinyoun-teknikk sammenlignet med Ziehl-Neelsen-teknikken

Kinyoun-teknikken er enklere siden den eliminerer oppvarmingstrinnet, men den viktigste fordelen er at den unngår utslipp av damp, svært giftig og kreftfremkallende på lang sikt. Derfor er Kinyoun-flekken tryggere for farging av personell..

Det er viktig å ta i betraktning at det må tas hensyn til at reagensene ikke kommer i direkte kontakt med huden, da de er etsende og blekemiddelet er brannfarlig..

Når det gjelder ulempene, indikerer en negativ utstrykning ikke nødvendigvis at organismen ikke er til stede. I tillegg kan tilstedeværelsen av mobilavfall føre til falske positive, noe som fører til forvirring i diagnosen..

Henvisning

  1. Anvendt klinisk kjemi. (2016). BK Kinyoun Kit. Tilgjengelig på: cromakit.es
  2. Orozco-Rico Miguel. Kinyoun flekk og to Coccidia i HIV. Medical Journal MD. 2011; 3 (2): 137
  3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12. utg. Argentina. Redaksjonell Panamericana S.A.
  4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. (5. utg.). Argentina, redaksjonelt Panamericana S.A.
  5. Wikipedia-bidragsytere. "Kinyoun flekk." Wikipedia, The Free Encyclopedia. Wikipedia, The Free Encyclopedia, 8. februar 2018. Nett. 5. jan 2019.
  6. Combol A, Fernández N, Figueredo E, Acuña A, Zanetta E. Implementering av en fargeteknikk for samtidig diagnose av Coccidia og Microsporidia. Institutt for hygiene ved University of the Republic. Montevideo. Uruguay. Tilgjengelig på: hygiene.edu.uy

Ingen har kommentert denne artikkelen ennå.